2021年高考生物第一轮复习《生物选修三》
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原理:DNA复制
过程:加热DNA解链 冷却引物结合到互补DNA 链 互补链合成
条件 :耐高温DNA聚合酶
基因文库的构建:
提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切
一定大小的DNA片段
将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存
某种生物的mRNA
逆转录
单链互补DNA
双链cDNA片段 与载体连接
导入受体菌中储存
种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部
位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开(切割
DNA分子) 作用结果: 形成平未端(SmaI)及黏性未端(EcoRI)
2.DNA连接酶——“分子缝合针” 1)、种类: E·coli DNA连接酶(黏性末端)
T4 DNA连接酶 (黏性末端和平末端)
2)、作用部位:磷酸二酯键
方法:农杆菌转化法(常用)、花粉管通道、 基因枪法
农杆菌转化法过程:
(二)动物基因工程前景广阔:
利用转基因动物生产药物--动物乳腺生物反应器
获取目的基因 (药用蛋白基因)
构建基因表达载体
(在药用蛋白基因前 加乳腺蛋白基因的启
动子)
显微注射导入 哺乳动物受精
卵中
形成早期 胚胎
将胚胎送入母体动 物
发育成转基因动物(只有在产下的雌性动物个体 中,转入的基因才能表达)
基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平
DNA分子水平
基本过程 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达
实质
基因重组
结果
新生物类型、生物产品
重难点剖析: 基因工程的“专用工具”
1.限制性核酸内切酶 黏性末端
EcoRI
来源:主要从原核细胞分离
黏性末端
作用:一种限制性内切酶只能识别双链DNA分子的某
转基因生物是指利用 基因工程 技术导 入 外源基因 培育出的能够将新性状稳定地 遗传 给后代的 基因工程 生物。
优 点:
打破了常规育种难以突破的 物种之间的界限(生殖隔离), 定向 的改变了生物的遗传性
状.
基因工程的应用
(一)植物基因工程硕果累累:
1.抗虫转基因植物 2. 抗病转基因生物 3.抗逆转基因作物 4.利用转基因改良植物的品质
用转基因wk.baidu.com物作器官移植的供体
供体动物:猪
存在的难题:免疫排斥
解决方法:将供体基因组导入某种基因调节因子,以抑
制抗原决定基因的表达,或设法除去抗原决 定基因,再结合克隆技术,培育出没有免疫 排斥反应的转基因克隆猪器官。
(三)、基因工程药品异军突起: 工程菌:用基因工程的方法,使外源基因得到高效率表
达的菌类细胞株系。 我国已生产的产品:白细胞介素-2、干扰素、乙肝疫苗等
质粒——细菌拟核DNA之外结构简单、
能自主复制的很小的环状DNA分子。
基本操作步骤
(一)目的基因的提取
目的基因:主要是指_编__码__蛋__白__质__的__结__构__基__因。 获取方法: 1、_从__基__因__文__库___中获取目的基因 2、人工合成法:化学方法合成DNA片段(反转录
法、直接合成法) 3、 PCR反应扩增DNA
中转移基因)
比较:基因工程和蛋白质工程
基因工程
蛋白质工程
相同点
都要改造基因,都属于分子水平
产生新的 基因型,无新基因 基因(型)
产生的蛋白质
原有的
可以是新的
联系
蛋白质工程是以基因工程为基础, 是基因工程的应用和延伸;前者可
为后者修饰、改造酶
蛋白质工程流程图
(三)将目的基因导入受体细胞
受体细胞 导入方法 农杆菌转化法
导入植物 细胞: 体细胞 受精卵 基因枪法 花粉管通道法
导入动物 细胞: 受精卵 显微注射法
导入微生物细胞:
Ca2+处理法
将目的基因导入微生物细胞
原核生物繁殖快、多为单细胞、遗 传物质相对较少,故早期常作为受体 细胞。
大肠杆菌细胞 用Ca2+处理 感受态细胞
基因组文库
cDNA文库
(二)基因表达载体构建
1、基因表达载体由__启__动_子___、_目_的__基__因__ __终__止__子__、标__记_基__因 四部分组成。
2、启动子作用:RNA聚合酶识别和结合的位点,
启动转录的“开关”。
3、标记基因的作用:
鉴别受体细胞中是否含有 目的基因 ,从普通细胞 中筛选出含目的基因的受 体细胞
重组质粒形成过程:
(1)用一定的_限__制__酶____ 切割质粒,使其出现一个 切口,露出__黏__性__末__端____。 (2)用_同__一__种__限__制__酶____ 切断目的基因,使其产生
相同__的__黏__性__末__端__。
(3)将切下的目的基因片段插入质粒的__切__口__处, 再加入适量______D_N_A_连__接,酶形成了一个重组DNA分 子(重组质粒)
重组表达载体DNA 溶于缓冲液
导入 混合
(四)目的基因的检测与鉴定
目的基因是否插入转基方法: DNA分子杂交 因生物染色体的DNA上 检测 目的基因是否转录:方法: 分 子 杂 交
目的基因是否表达:方法: 抗原抗体杂交
鉴定—— 抗虫性鉴定、抗病性鉴定、生 物活性鉴定等(生理、性状水 平的检测)
转基因生物
• 生物选修三专题复习
基因工程相关要点
1、基因工程又叫做_基__因_ 拼接技__术_或D__N_A__重__组__技_ 术。
2、基本工具:
“分子手术刀”:限制性核酸内切酶
“分子缝合针”:DNA连接酶
基因进入受体细胞的载体: 运载体 3、基本操作步骤:
1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建(核心) 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定
(四)基因诊断与基因治疗:
基因诊断:用放射性同位素
等标记的“DNA探针”检测 肝炎病毒等病毒感染及遗传缺 陷,不但准确而且迅速。
基因治疗:把健康的外源基
因导入有基因缺陷的细胞中, 达到治疗疾病的目的。
基因治疗的类型
体外基因治疗(获得患者细胞,在体外对细
胞培养和转入基因,重新输入患者体内)
体内基因治疗(直接向患者的人体组织细胞
DNA连接酶可把平未端或黏性末端之间的缝隙 “缝合”起来,即相当于把梯子两边的扶手的断 口连接起来,这样一个重组DNA分子就形成了。
3.分子运载车——运载体 (1) 作用: 将目的基因送入受体细胞
(2) 具备的条件:
a.能自我复制. b.具有一个或多个酶切位点. c.有标记基因. d.对受体细胞无害. (3)种类: 质粒、噬菌体、动植物病毒
过程:加热DNA解链 冷却引物结合到互补DNA 链 互补链合成
条件 :耐高温DNA聚合酶
基因文库的构建:
提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切
一定大小的DNA片段
将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存
某种生物的mRNA
逆转录
单链互补DNA
双链cDNA片段 与载体连接
导入受体菌中储存
种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部
位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开(切割
DNA分子) 作用结果: 形成平未端(SmaI)及黏性未端(EcoRI)
2.DNA连接酶——“分子缝合针” 1)、种类: E·coli DNA连接酶(黏性末端)
T4 DNA连接酶 (黏性末端和平末端)
2)、作用部位:磷酸二酯键
方法:农杆菌转化法(常用)、花粉管通道、 基因枪法
农杆菌转化法过程:
(二)动物基因工程前景广阔:
利用转基因动物生产药物--动物乳腺生物反应器
获取目的基因 (药用蛋白基因)
构建基因表达载体
(在药用蛋白基因前 加乳腺蛋白基因的启
动子)
显微注射导入 哺乳动物受精
卵中
形成早期 胚胎
将胚胎送入母体动 物
发育成转基因动物(只有在产下的雌性动物个体 中,转入的基因才能表达)
基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平
DNA分子水平
基本过程 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达
实质
基因重组
结果
新生物类型、生物产品
重难点剖析: 基因工程的“专用工具”
1.限制性核酸内切酶 黏性末端
EcoRI
来源:主要从原核细胞分离
黏性末端
作用:一种限制性内切酶只能识别双链DNA分子的某
转基因生物是指利用 基因工程 技术导 入 外源基因 培育出的能够将新性状稳定地 遗传 给后代的 基因工程 生物。
优 点:
打破了常规育种难以突破的 物种之间的界限(生殖隔离), 定向 的改变了生物的遗传性
状.
基因工程的应用
(一)植物基因工程硕果累累:
1.抗虫转基因植物 2. 抗病转基因生物 3.抗逆转基因作物 4.利用转基因改良植物的品质
用转基因wk.baidu.com物作器官移植的供体
供体动物:猪
存在的难题:免疫排斥
解决方法:将供体基因组导入某种基因调节因子,以抑
制抗原决定基因的表达,或设法除去抗原决 定基因,再结合克隆技术,培育出没有免疫 排斥反应的转基因克隆猪器官。
(三)、基因工程药品异军突起: 工程菌:用基因工程的方法,使外源基因得到高效率表
达的菌类细胞株系。 我国已生产的产品:白细胞介素-2、干扰素、乙肝疫苗等
质粒——细菌拟核DNA之外结构简单、
能自主复制的很小的环状DNA分子。
基本操作步骤
(一)目的基因的提取
目的基因:主要是指_编__码__蛋__白__质__的__结__构__基__因。 获取方法: 1、_从__基__因__文__库___中获取目的基因 2、人工合成法:化学方法合成DNA片段(反转录
法、直接合成法) 3、 PCR反应扩增DNA
中转移基因)
比较:基因工程和蛋白质工程
基因工程
蛋白质工程
相同点
都要改造基因,都属于分子水平
产生新的 基因型,无新基因 基因(型)
产生的蛋白质
原有的
可以是新的
联系
蛋白质工程是以基因工程为基础, 是基因工程的应用和延伸;前者可
为后者修饰、改造酶
蛋白质工程流程图
(三)将目的基因导入受体细胞
受体细胞 导入方法 农杆菌转化法
导入植物 细胞: 体细胞 受精卵 基因枪法 花粉管通道法
导入动物 细胞: 受精卵 显微注射法
导入微生物细胞:
Ca2+处理法
将目的基因导入微生物细胞
原核生物繁殖快、多为单细胞、遗 传物质相对较少,故早期常作为受体 细胞。
大肠杆菌细胞 用Ca2+处理 感受态细胞
基因组文库
cDNA文库
(二)基因表达载体构建
1、基因表达载体由__启__动_子___、_目_的__基__因__ __终__止__子__、标__记_基__因 四部分组成。
2、启动子作用:RNA聚合酶识别和结合的位点,
启动转录的“开关”。
3、标记基因的作用:
鉴别受体细胞中是否含有 目的基因 ,从普通细胞 中筛选出含目的基因的受 体细胞
重组质粒形成过程:
(1)用一定的_限__制__酶____ 切割质粒,使其出现一个 切口,露出__黏__性__末__端____。 (2)用_同__一__种__限__制__酶____ 切断目的基因,使其产生
相同__的__黏__性__末__端__。
(3)将切下的目的基因片段插入质粒的__切__口__处, 再加入适量______D_N_A_连__接,酶形成了一个重组DNA分 子(重组质粒)
重组表达载体DNA 溶于缓冲液
导入 混合
(四)目的基因的检测与鉴定
目的基因是否插入转基方法: DNA分子杂交 因生物染色体的DNA上 检测 目的基因是否转录:方法: 分 子 杂 交
目的基因是否表达:方法: 抗原抗体杂交
鉴定—— 抗虫性鉴定、抗病性鉴定、生 物活性鉴定等(生理、性状水 平的检测)
转基因生物
• 生物选修三专题复习
基因工程相关要点
1、基因工程又叫做_基__因_ 拼接技__术_或D__N_A__重__组__技_ 术。
2、基本工具:
“分子手术刀”:限制性核酸内切酶
“分子缝合针”:DNA连接酶
基因进入受体细胞的载体: 运载体 3、基本操作步骤:
1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建(核心) 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定
(四)基因诊断与基因治疗:
基因诊断:用放射性同位素
等标记的“DNA探针”检测 肝炎病毒等病毒感染及遗传缺 陷,不但准确而且迅速。
基因治疗:把健康的外源基
因导入有基因缺陷的细胞中, 达到治疗疾病的目的。
基因治疗的类型
体外基因治疗(获得患者细胞,在体外对细
胞培养和转入基因,重新输入患者体内)
体内基因治疗(直接向患者的人体组织细胞
DNA连接酶可把平未端或黏性末端之间的缝隙 “缝合”起来,即相当于把梯子两边的扶手的断 口连接起来,这样一个重组DNA分子就形成了。
3.分子运载车——运载体 (1) 作用: 将目的基因送入受体细胞
(2) 具备的条件:
a.能自我复制. b.具有一个或多个酶切位点. c.有标记基因. d.对受体细胞无害. (3)种类: 质粒、噬菌体、动植物病毒