2日龄SD大鼠

愿援 苑源 依 园援 愿远 苑援 缘园 依 园援 缘怨 裕 愿援 源怨 依 员援 园源
猿缘 凿 时体重、 脑重以及脑组织病理改变， 监测神经细胞凋亡、 酝月孕 蛋白表达及学习、 记忆能力情况， 干湿法测定术后 猿 凿
扎， 观察缺氧缺血后早期大鼠神经行为变化及 员 、 圆、 猿、 苑、 员源 、
时脑组织含水量。结果 摇 模型组大鼠体重、 脑重增长不良， 各时间点模型组大鼠的体重与正常对照组和假手术组比较， 常对照组和假手术组 （ 孕 约 园郾 园缘 ） 。匀耘 染色模型组大鼠出现 光密度与正常对照组及假手术组比较明显降低， 差异有显著 果 均 差 于 正 常 对 照 组 和 假 手 术 组， 差异有显著性 （孕 约 差异有显著性 （ 孕 约 园郾 园缘 ） ； 模型组脑组织含水量明显高于正
离池壁 圆缘 糟皂 处放置一个 覬 远 糟皂、 高 圆怨 糟皂 的圆形
圆 援 员摇 生长发育 摇
圆 援 员 援 员摇 体重摇 术前 猿 组大鼠体重比较差异无显著
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性。术后 员 凿 模型组存活大鼠出现体重下降， 明显
持不变。各组取 远 只大鼠于出生后 猿园 凿 开始进行 接受 源 凿 训练， 第 员 天让大鼠自由游泳 圆 皂蚤灶； 从第 圆 酝燥则则蚤泽 水迷宫实验， 为期 远 凿。 ① 定位航行试验， 用 于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的能力。大鼠连续
［ 员］ 经损害， 如脑瘫、 癫痫、 学习困难和认知障碍等 。
员 援 缘摇 体重测量 摇 术后 员 、 圆、 猿、 苑、 员源 、 猿缘 凿 测量各组 员 援 远摇 标本制备及脑组织病理形态学检查 摇 术后 员 、 圆、 猿、 苑、 员源 、 猿缘 凿 取每组存活大鼠各 远 只， 测量体重后 无水乙醚吸入麻醉， 打开胸腔， 暴露心脏， 经左心室 灌注 源益 灭菌生理盐水直至流出液清亮为止， 源豫 多
应即跳上平台。多数动物会再次或多次跳至铜栅
员凿 （ 第 圆 天） ， 同样在通电情况下记录 缘 皂蚤灶 内大鼠 员 援 员圆摇
较采用方差分析、 贼 检验。 圆 摇 结果
分为 杂宰、 晕宰、 杂耘 及 晕耘 源 个象限， 在 杂宰 象限正中
透明平台， 平台顶低于 水 面 员 糟皂。测 试 过 程 中 摄 像， 由计算机水迷宫视频分析软件同步记录大鼠运 动轨迹并计算各项指标。训练期间迷宫外参照物保
重， 源豫 多聚甲醛再固定 圆 凿， 常规组织脱水、 透明、 浸 切片， 片厚 缘 μ皂， 每间隔 员园 张取 员 张， 取相同层面 切片 匀耘 染色后光镜下观察脑室周围组织的病理形 态学变化。每一标本各取 员园 张以备对相邻切片进 员 援 苑摇 脑含水量测定摇 术后 猿 凿 取每组成活大鼠各 源 行原位末端标记法 （ 栽哉晕耘蕴） 及免疫组化染色分析。 只， 乙醚麻醉后打开胸腔， 暴露心脏， 经左心室灌注 蜡、 包埋， 选取前联合水平、 侧脑室平面行连续冠状
颈总动脉制作未成熟新生大鼠脑白质损伤模型， 探 讨缺血性脑白质损伤对大鼠脑髓鞘碱性蛋白 （ 皂赠藻鄄
造蚤灶 遭葬泽蚤糟 责则燥贼藻蚤灶， 酝月孕） 表达及对近、 远期学习、 记忆
圆园员圆 原 园缘 原 圆愿 接收 基金项目： 安徽省高校省级自然科学研究项目 （ 编号： 运允圆园员圆在员愿圆 ）
圆
聚甲醛固定后开颅取脑组织， 整体脑剥离后测量脑
观察 猿 组大鼠 酝月孕 表达情况， 每只大鼠取相邻切片
位随机选取 缘 个视野采图， 采用 允耘阅粤鄄愿园员阅 形态学
员 援 员员 援 猿摇 跳台试验摇 采用跳台法对大鼠进行学习记 忆能力测试。实验时先将动物放入反应箱内适应 圆 皂蚤灶， 然后立即通电， 大鼠受到电击后表现为逃避反
员 援 员园摇 早期神经行为观察与评价摇 未成熟大鼠脑白
天起， 每天分上、 下午两时段， 每段训练 圆 次， 每次间 隔 圆 皂蚤灶， 分别从 源 个不同的入水点入水， 观察并记 录大鼠寻找并爬上平台的路线图和所需时间 （ 逃逸 潜伏期） 。源 次潜伏期成绩的平均值作为当日最终 万方数据 成绩进入最后统计。如果大鼠在 员圆园 泽 内未找到平
安徽医科大学学报摇 粤糟贼葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽 粤灶澡怎蚤摇 圆园员圆 杂藻责； 源苑 （怨）
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· 员园猿苑·
圆 日龄大鼠缺血性脑白质损伤模型的实验研究
姜中惠员 ， 王 摇 杨员 ， 陈志武圆
摘要摇 目的摇 建立未成熟大鼠脑白质损伤动物模型， 观察缺 血性脑白质损伤对 圆 日龄大鼠脑细胞髓鞘碱性蛋白 （ 酝月孕 ） 生大鼠 员园愿 只随机分为正常对照组 （ 灶 越 圆愿 ） 、 假手术组 （灶 越 表达及近、 远期学习、 记忆能力的影响。 方法 摇 圆 日龄 杂阅 新
则被认为完成了学习， 记录大鼠在完成学习前错误
地进入暗室的次数 粤， 主要反映大鼠近期学习的能 室的时间， 即为记忆潜伏期， 以及错误进入暗室的次 数 月， 主要反映大鼠近期记忆的能力。
力； 圆源 澡 后再次放回明室， 记录大鼠由明室进入暗
圆 张， 每张切片于 源园园 倍光镜下在脑室周围同一部 图像分析系统对染色结果进行定量分析， 计算平均 光密度。
脑室周围白质损伤。术后 员 、 圆、 猿、 苑 凿 模型组大鼠 酝月孕 积分
性 （ 孕 约 园郾 园缘 ） ； 酝燥则则蚤泽 水迷宫试验、 避暗试验、 跳台试验的结 。结论摇 采用双侧颈总动脉结扎术导致大鼠脑白质损 园郾 园缘 ） 胶质细胞凋亡、 酝月孕 蛋白表达降低有关。
备脑白质损伤动物模型， 孕圆 大鼠无水乙醚吸入麻 醉， 取仰卧位， 四肢固定于小手术板上， 安尔碘消毒 颈部皮肤， 无菌条件下颈部正中切口， 逐层分离皮下 组织， 找到血管神经束， 游离出双侧颈总动脉， 假手
员 安徽医科大学第一附属医院新生儿科， 合肥 摇 圆猿园园圆圆 作者单位：
作者简介： 姜中惠， 女， 硕士研究生；
安徽医科大学基础医学院药理学教研室， 合肥 摇 圆猿园园猿圆
王摇 杨， 男， 副教授， 副主任医师， 硕士生导师， 责任作者， 耘鄄皂葬蚤造： 憎援 赠葬灶早员圆远岳 员圆远援 糟燥皂
万方数据
大鼠体重增长缓慢， 各时间点均低于正常对照组和 于正常 对 照 组 和 假 手 术 组， 差异有显著性 （孕 约 差异无显著性， 见表 员 。
低于正常对照组与假手术组， 术后 圆 凿 开始模型组
假手术组， 至出生后 猿缘 凿， 模型组大鼠体重仍明显低 园郾 园缘 ） ； 正常对照组与假手术组大鼠各时间点比较， 圆 援 员 援 圆摇 脑重摇 模型组大鼠在术后 圆 凿 脑重滞长， 明 显落后于正常对照组及假手术组， 随后脑重开始追 （ 孕 约 园郾 园缘 ） ； 术后 员 、 员源 、 猿缘 凿 猿 组大鼠脑重差异无显 著性， 见表 圆 。 长， 术后 圆 、 猿、 苑 凿 与正常对照组相比， 差异有显著性
圆源 澡 后， 在底部铜栅通电的情况下， 直接将动物置 时间， 称为潜伏期， 大鼠受电击后会逃避性的跳上平
上， 受到电击后又迅速跳回平台， 如此训练 缘 皂蚤灶。 于平台上， 记录从大鼠被放上平台到第 员 次跳下的 台， 然后记录 缘 皂蚤灶 内大鼠再次跳下的次数 悦 ， 再过 跳下平台的次数 阅。 统计学处理摇 采用 杂孕杂杂 员猿郾 园 软件对数据进 珋 行整理和分析， 计量数据均采用 曾 依 泽 表示。组间比
· 员园猿愿·
安徽医科大学学报摇 粤糟贼葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽 粤灶澡怎蚤摇 圆园员圆 杂藻责； 源苑 （怨）
源益 灭菌生理盐水直至流出液清亮为止， 立即开颅取 脑组织， 切除嗅脑和后脑， 以大脑纵裂及视交叉中点 为标志， 将左右大脑分开， 电子天平测定脑组织湿重 （ 精确到 员 皂早， 室温 圆园 耀 圆缘益 ， 湿度 远园豫 耀 苑缘豫 ） ， 后测定脑组织干重置恒温干燥箱 愿园益 烤 圆 凿 以上， 烘干至恒重， 两次测定值之差小于 园郾 圆 皂早 ） ， 按 耘造造蚤鄄 重） 辕 湿重 伊 员园园豫 。 亡。 燥贼 公式计算脑含水量： 脑含水量 （ 豫 ）越 （ 湿重 原 干 员 援 愿摇 细胞凋亡检测摇 采用 栽哉晕耘蕴 技术检测细胞凋 员援 怨摇 免疫组化染色检测 酝月孕 表达 摇 对各时间点 酝月孕 免疫组化染色积分光密度。术后不同时间点 脑组织石蜡切片采用免疫组化染色法测量脑组织
质损伤动物模型制备后观察大鼠是否躁动不安、 肢
体抖动、 肢体无力、 肌张力增强、 平衡能力异常、 嗜 睡、 昏迷或惊厥， 出现上述一项以上异常即作为神经 行为异常。同时记录呼吸频率和节律、 皮肤颜色、 有 员 援 员员摇 学习记忆能力评估 摇 术后 猿缘 凿 对各组进行 员 援 员员 援 员摇 酝燥则则蚤泽 水迷宫试验 摇 水迷宫为 覬 员园园 糟皂、 高 源园 糟皂 的圆形水池， 水深 猿园 糟皂， 水温保持在 （ 圆远 池壁上标有东、 西、 南、 北 源 个入水点， 它们将水池等 依 员） 益， 水面均匀覆盖一层大小相似的泡沫颗粒。 学习记忆能力检测。 无不吃奶和不爱活动， 直至动物被处死。
珋 表 员摇 不同时间点 猿 组大鼠体重变化 （ 早， 曾 依泽 ） 组别 正常对照 假手术 模型 灶 源 源 远 术前 远援 圆苑 依 园援 苑猿 远援 源怨 依 园援 远怨 远援 缘苑 依 园援 远源 员凿 圆 凿 猿凿 术后 苑凿 员源 凿
· 员园猿怨·
苑援 员苑 依 园援 怨怨 苑援 园远 依 员援 园猿 远援 源远 依 园援 远圆 裕
术组缝合皮肤， 模型组用 怨鄄园 丝线永久性结扎双侧
摇 摇 随着新生儿重症监护技术的发展， 越来越多的 中早产儿脑白质损伤及随后相伴随的远期神经发育
数字表法随机分成正常对照组 （ 灶 越 圆愿 ） 、 假手术组
早产、 极 （ 超） 低出生体重儿得以存活， 存活的患儿 障碍发生率较足月儿显著增高， 约 猿缘豫 遗留慢性神 对早产儿脑白质损伤进行深入研究， 建立合适的动 物模型十分必要。该研究应用 圆 日龄大鼠结扎双侧
员援 圆 摇 主 要 试 剂 和 抗 体 摇 细 胞 凋 亡 试 剂 盒 购 自
工程有限公司； 免疫组化染色 杂孕 试剂盒和 阅粤月 显
［ 圆］ 员 援 猿摇 动物模型的制备 摇 参照 哉藻澡葬则葬 藻贼 葬造 方法制
砸燥糟澡藻 公司； 酝月孕 单克隆抗体购自武汉博士德生物
色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。
伤， 可影响动物近、 远期空间学习、 记忆能力， 推测其与少突
关键词摇 脑缺血； 脑损伤； 大鼠； 疾病模型； 动物 中图分类号摇 砸 苑圆圆援 远 文献标志码 粤 文章编号 员园园园 原 员源怨圆 （ 圆园员圆 ） 园怨 原 员园猿苑 原 园远
颈总动脉后缝合皮肤切口。术后置 猿苑益 恒温水浴 箱内恢复 员 澡 至体温、 活动恢复正常， 返回母鼠笼中 继续喂养。 员 援 源摇 实验动物分组 摇 员园愿 只大鼠编号后采用随机 和模型组 （ 灶 越 缘圆 ） 。正常对照组不做任何 （ 灶 越 圆愿 ） 处理。 大鼠体重， 比较 猿 组之间差异。
台， 需将其引至平台， 这时潜伏期记为 员圆园 泽， 每次训 寻找平台后对平台空间位置记忆的能力。在第 远 天 的下午撤除平台， 记录大鼠在 员圆园 泽 内跨过平台所 在位置的次数， 称为穿环指数。 员 援 员员 援 圆摇 避暗试验摇 月粤鄄圆园园 型避暗测试箱分明、 暗 两室， 其间有小门相通， 避暗习性使大鼠本能地选择 进入暗室， 进入暗室的大鼠即刻遭受电击 （ 猿 皂粤， 缘园 匀扎） 而被动地逃回安全的明室。缘 皂蚤灶 不进入暗室 练间隔 远园 泽。② 空间搜索试验， 用于测量大鼠学会
能力的影响。 员 摇 材料与方法
圆愿 ） 及模型组 （ 灶 越 缘圆 ） 。模型组予双侧颈总动脉永久性结
员 援 员摇 实验动物 摇 新生 圆 日龄 （ 孕圆 ， 出生当天计为 园 日龄） 清洁级 杂阅 大鼠 员园愿 只， 雌雄不限， 体重 远 耀 愿 验动物中心。 早， 均由体格健壮的母鼠带养， 购自安徽医科大学实