用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备办法
细胞因子：帮助肌肤美丽的因子
养生圈医美研究表明，皮肤表皮细胞的修复、更新是由来自毛囊或表皮基底层的成体干细胞———表皮干细胞的增殖分化所决定的。
日常生活中人体的皮肤会受到外部环境侵扰，年轻时可以由表皮干细胞及时修复。
但随着年龄增长，表皮干细胞增值活跃度逐渐减弱，皮肤老化速度加快，很多肌肤问题会凸显出来。
现如今，护肤品已经从精细化工美容、植物美容向生物美容、基因美容发展。
生物护肤品的主要成分为生物活性多肽，大部分是细胞生长因子,开创了护肤产品的新纪元，人类护肤不再是给受损肌肤修修补补，而是遏制问题基因的表达。
干细胞与细胞因子的区别干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，是一种未充分分化尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，在医学界称为“万用细胞”或“种子细胞”。
细胞因子是在干细胞培养过程中由干细胞分泌的多肽物质，有促成纤维细胞代谢和胶原蛋白再生及组织修复的功能。
细胞因子能够在细胞间传递信息，是一种具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽。
人体皮肤内细胞生长因子含量的多少直接决定着皮肤的年轻程度，细胞因子有200多种，针对皮肤改善的主要有五大类：表皮生长因子（EGF）、角化细胞生长因子（KGF）、成纤维细胞生长因子（KGFs）、转化生长因子（TGF-）、血管内皮肤细胞生长因子（VEGF）等。
细胞因子对于皮肤的作用细胞因子可以达到刺激“唤醒”或营养表皮或真皮干细胞的作用。
使面部的皮肤分泌胶原蛋白、透明质酸、弹性纤维等物质，达到皱纹减淡、皮肤紧致、亮白肌肤的效果，修复大气污染等造成的敏感肌肤和不正确美容方式带来的损伤。
除此之外，还能激活体内原本存在的干细胞进行增殖和分化，使面部的皮肤分泌胶原蛋白、透明质酸、弹性纤维等物质，产生皮肤本质的改变，如皮肤厚度的改变、皮肤抵抗能力的增强。
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美容干细胞的制作原理
美容干细胞的制作原理
美容干细胞的制作原理涉及干细胞技术和细胞培养技术。
具体步骤如下：
1. 干细胞来源：首先需要从人类或动物体内获得干细胞。
可选的来源包括胚胎干细胞、间充质干细胞（如脐带血、骨髓、脂肪组织）、诱导多能干细胞等。
2. 细胞培养：获取到干细胞后，将其在适当的培养基中进行培养和扩增。
培养基通常包含营养物质、生长因子、激素等，以提供细胞所需的营养和环境。
3. 分化：将干细胞暴露于特定的分化因子和培养条件下，诱导其分化成具有特定功能的细胞类型。
在美容干细胞制作中，可以选择诱导成皮肤细胞、胶原蛋白产生细胞等，以满足美容的需求。
4. 提取和纯化：分化后的细胞经过提取和纯化步骤，以去除未分化细胞和其他不需要的细胞成分。
常用的方法包括离心、细胞筛选、抗体标记等。
5. 应用：经过纯化的美容干细胞可以用于制作各种美容产品，如面膜、精华液、注射剂等。
这些产品中的美容干细胞可以起到修复、再生皮肤的作用，改善皮肤质量和外观。
需要注意的是，美容干细胞的制作和应用需要遵循相关法律法规和伦理原则。
同时，干细胞技术还存在一些挑战和争议，如伦理问题、安全性、效果验证等，需
要进一步的研究和监管。
CIK制备细胞因子配制方法
细胞因子配制方法1、IL-1α⑴、厂家来源：PeproT ech；规格：2μg/瓶（2×106 IU/瓶）；使用浓度：10 IU/μl；存放：置-20℃冰箱冻存。
⑵、配制、分装：在超净台内，取1支新包装IL-1α，瞬时离心；取1支50ml离心管，加20 ml DMEM/F-12，取1ml DMEM/F-12充分溶解IL-1α后转移至此离心管内，润洗3次，充分混匀。
1 ml/管分装于EP管内（储存浓度为100 IU/μl），置-20℃冰箱冻存。
使用时取1支解冻，10倍稀释后-20℃保存备用，使用浓度为10 IU/μl；一旦解冻使用后，未使用完的IL-1α置4℃冰箱保存，7日内未用完，则弃去不用，重新解冻新的使用。
2、IL-2⑴、厂家来源：上海华新生物高技术有限公司；规格：20W IU/瓶；使用浓度：100 IU/μl；存放：置-20℃冰箱冻存。
⑵、配制、分装：在超净台内，以2 ml DMEM/F-12充分溶解，配制成浓度为100 IU/μl，4℃保存备用，若长期不用，置于-20℃冰箱冻存。
一旦解冻使用后，未使用完的IL-2置4℃冰箱保存，7日内未用完，则弃去不用，重新配制新的使用。
3、IFN-γ⑴、厂家来源：PeproTech；规格：20μg/瓶（4×105IU/瓶）；使用浓度：100 IU/μl；存放：置-20℃冰箱冻存。
⑵、配制、分装：在超净台内，取1支新包装IFN-γ瞬时离心；取1支50ml离心管，加入4 ml DMEM/F-12，从中取1ml充分溶解IFN-γ，润洗3次，配制成100 IU/μl。
1 ml/管分装至无菌的1.5 ml EP管中，做好标记，-20℃保存。
一旦解冻使用后，未使用完的IFN-γ置4℃冰箱保存，7日内未用完，则弃去不用，重新解冻新的使用。
4、CD3mAb⑴、厂家来源：R&D；规格：500μg/瓶；使用浓度：25ng/μl；存放：置-20℃冰箱冻存。
护肤相关的干细胞活性因子
护肤相关的干细胞活性因子干细胞活性因子（Stem Cell Activators）在护肤领域中被广泛应用，并且已经成为了护肤品中最热门的成分之一、干细胞活性因子可以激活皮肤中的自身干细胞，促进皮肤细胞的再生和修复，从而实现护肤效果。
本文将介绍一些常见的干细胞活性因子，以及它们在护肤领域中的应用。
1.水解胶原蛋白：作为一种常见的护肤成分，水解胶原蛋白可以促进皮肤细胞的再生和修复，提高皮肤的弹性和光泽。
它可以激活皮肤中的干细胞，增加胶原蛋白的合成，从而减少皱纹和细纹的出现。
2.胞外基质：胞外基质是皮肤组织中的一种细胞外基质，它可以提供支撑和保护皮肤细胞的功能。
胞外基质中的干细胞活性因子可以刺激皮肤中的干细胞增殖和分化，促进胶原蛋白和弹力蛋白的合成，从而改善皮肤的弹性和紧致度。
3.植物干细胞提取物：一些植物中含有丰富的干细胞活性因子，例如苹果干细胞提取物、葡萄干细胞提取物等，这些植物干细胞提取物可以激活皮肤中的自身干细胞，促进皮肤细胞的再生和修复。
它们还可以增加胶原蛋白和弹力蛋白的合成，改善皮肤的弹性和光泽。
4.血小板富含血浆（PRP）：PRP是一种富含血小板的血浆，其中含有丰富的生长因子。
这些生长因子可以激活皮肤中的干细胞，促进皮肤细胞的再生和修复，减少皱纹和细纹的出现。
PRP还可以提供皮肤所需的营养和氧气，改善皮肤的健康和光泽。
5.逆转酶：逆转酶是一种酵素，它可以逆转DNA的降解过程，从而保护细胞的DNA不被氧化或者破坏，促进细胞的再生和修复。
逆转酶在皮肤护理中被广泛应用，可以减少皮肤老化的迹象，提高皮肤细胞的活力和健康。
总结起来，干细胞活性因子在护肤领域中被广泛应用，可以促进皮肤中的干细胞增殖和分化，修复皮肤细胞，减少皱纹和细纹的出现，提高皮肤的弹性和光泽。
它们的应用形式多种多样，可以是水解胶原蛋白、胞外基质、植物干细胞提取物、PRP等。
未来，随着科学技术的进步，更多的干细胞活性因子可能会被应用到护肤品中，为我们带来更好的护肤效果。
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公开CN2 A号发布申请类型专利CN 7634申请号公开2009年6月24日日申请2009年1月7日日期优先2009年1月7日权日公开, CN 2 A, CN 2A, CN 7634, CN-A-2, CN2 A, CN2A, CN7634,号发明,者申请人导出, ,引文(1), (2), (3)外部链接:?,用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法CN 2 A摘要本发明涉及一种可用于美容、护肤的干细胞分泌因子的制备方法。
包括细胞分离、干细胞的扩增、干细胞因子体系的获取和浓缩、贮存得到含有干细胞活性因子体系。
该体系包括目前已鉴定的各型干细胞所分泌的活性因子。
本发明所得的干细胞活性因子体系中不含外来的培养液成分，也不含有死细胞裂解成分。
并可以长期保存而维持组织和细胞修复活性。
使干细胞美容真正从理想走向了现实。
在生物医学的深度对传统美学观念进行了提升。
同时该发明简单易行，适宜于大规模生产，为干细胞服务于美丽事业提供了一条捷径。
权利要求(6)1、一种用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法，其特征在于包括的步骤：1)分离干细胞：从人或哺乳动物相应组织中分离出干细胞；2)干细胞的扩增，用相应干细胞的常规培养方法，包括a-MEM培养基，加入10％的胎牛血清，5％CO2，37℃条件下培养，定期换液，传代，进而得到所需数量的干细胞；3)干细胞因子体系的获取：在干细胞分裂最旺盛的时期，弃去正常培养基，用PBS缓冲液(磷酸缓冲液，pH＝左右)清洗1-3次，然后加入PBS或生理盐水，细胞培养箱中培养4-24小时，收集上清液，即可得到富含干细胞生长因子体系的溶液；4)浓缩、贮存：所得液体离心，除去散落细胞，浓缩，按1×106个细胞/毫升的浓度进行浓缩，得产品，可于-20℃长期保存，以备使用。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的来源于干细胞所分泌的干细胞因子体系，该体系包括该体系包括干细胞因子、内皮细胞生长因子、表皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子肝细胞生长因子、神经生长因子、纤维母细胞生长因子、胰岛素样成长因子、粒细胞集落刺激因子、白细胞介素；此外，干细胞分泌因子中还含各型胶原蛋白，包括I、 II、 III、 IV型胶原蛋白，以及各种溶菌酶。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的千细胞因子体系是指：来源于人或哺乳动物胚胎干细胞、脐血干细胞、骨'髓千细胞、表皮干细胞、内皮干细胞、外周血干细胞、脂肪干细胞，也可泛指所有的干细胞。
4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所得的产品作为活性成分配以医学上接受的溶解液构成组合物的产品，直接用于美容、护肤，包括、美容、祛斑、修复疤痕。
5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所得的产品作为活性成分可以添加到各种制剂的美容护肤产品中，包括除皱、美容、祛斑、修复疤痕。
6、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所得的产品用于美容、护肤产品中的针剂、面霜、乳液、水液制剂，包括清洁霜、清洁乳、清洁皂、面膜、化妆水、按摩膏、乳液、营养霜、关容霜、粉底或粉饼。
说明用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法技术领域本发明涉及一种可用于美容、护肤的干细胞分泌因子的制备方法。
该干细胞分泌的复合因子，可被应用于美容化妆品、保健品、护肤品。
背景技术干细胞是一种具有多向分化潜能的细胞，根据来源的不同可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。
胚胎干细胞可以分化为身体的任何一种细胞，所以也叫全能干细胞。
成体干细胞是指那些具有组织或器官特异性的干细胞，能在适宜的环境中分化成与其定位相宜的细胞系，又称为多能干细胞。
干细胞在特定的环境中可以定向分化，从而达到修复组织和细胞损伤的作用。
本发明者研究表明（Bcl-2 engineered MSCs inhibited apoptosis and improved heart function', Stem Cells, 2007 Aug;25(8):2118- 27..)干细胞可以通过分化为特定的细胞来修复组织，而旁分泌作用在组织的修复中发挥了更大的作用。
也就是说，在千细胞治疗组织损伤的时候，干细胞分泌的细胞因子发挥了极为重要的作用。
该体系包括干细胞因子（SCF)、内皮细胞生长因子（VEGF)、表皮细胞生长因子（EGF )、肿瘤坏死[刮子（TNF)肝细胞生长因子（HGF )、神经生长冈子（NGF )、纤维母细胞生长因子(F〔;F )、胰岛素样成长因子（IGF )、粒细胞集落刺激因子（G-CSF)、白细胞介素（IL) 等20余种。
其中干细胞因子（Stem Cell Factor, SCF)不仅是维持生命活动所需要的，而且在抵抗电离辐射对机体的作有及修复辐射所致损伤中都是必不可少的。
此外，干细胞分泌因子中还含各型胶原蛋白（如i、ii、m、[V型胶原蛋白）以及各种溶菌酶等。
表皮千细胞是皮肤更新的种子细胞。
每天都有大量的表皮细胞死亡脱落，也会有相应数量的新生细胞加以补充。
随着人们年龄的增加，皮肤出现斑点，皱纹也逐渐增多，表皮失去了往昔的光彩，这一切皆源于表皮干细胞再生能力的减退，如何使表皮干细胞保持旺盛的新陈代谢能力，将是保持皮肤健康美丽的关键所在。
基于人们对美丽的需求，干细胞美容技术及其相关产品的丌发R益受到业界的重视。
目前市场上出现了很多所谓的干细胞产品，从技术角度上并不具备实施的可行性。
中国专利CN1817339A、N1872025A和CN1817339A专利涉及产品的内容使用了活性干细胞和中药组分，首先如何在护肤品种保持干细胞的活性？其次如何避免干细胞坏死后产生毒素对人体的损害？这些都是值得探讨且很难以解决的问题。
CN1872025A采用细胞破碎技术，以及正常状态下的细胞培养技术来获取干细胞活性组分。
这种获取干细胞活性组分的方法缺乏依据。
就如你砍碎了苹果树你并不会得到苹果？粉碎了细胞只是得到了细胞片断。
常规来讲在正常生长状态下，所获取的细胞培养上清液，上清液中包含更多的是代谢废物，同时采用a-MEN(其中添加有激素如地塞米松）培养基，如何有效除去其中的激素，都是其所面临的问题。
3目前市场上也有在芙容护肤产品中添加生长因子如bFGF和EGF的，而细胞的更新是一个系统的过程，单一生长因子的添加在某种程度上虽可以刺激细胞的代谢，但也容易造成依赖性。
综上可以看出，基于干细胞的美容疗法具有广阔的前景，但如何科学、有效地利用干细胞的独特性能，开发出真正意义上的干细胞美容护肤产品，仍让是一个崭新的课题。
发明内容本发明的目的在于提供一种用于关容护肤的干细胞分泌因子的制备方法，干细胞分泌因子可用于关容护肤的产品。
本发明提供的用于关容护肤的千细胞分泌因子的制备方法包括的歩骤：1) 采用常规的细胞分离方法，从人或哺乳动物相应组织中分离出干细胞。
2) 干细胞的扩增，用相应干细胞的常规培养方法，包括a-MEM培养基，加入10% 的胎牛血清，5%C02，37'C条件下培养，定期换液，传代，进而得到所需数量的干细胞。
3) 干细胞因子体系的获取：在干细胞分裂最旺盛的时期，弃去正常培养基，用PBS 缓冲液（磷酸缓冲液，pt^左右）清洗l-3次，然后加入PBS或生理盐水，细胞培养箱中培养4-24小时。
收集上清液，即可得到富含干细胞生长因子体系的溶液。
4) 浓缩、贮存：所得液体离心，除去散落细胞，浓缩，按lXl()"个细胞/ml的浓度浓缩，得产品，于-2(TC长期保存，以备使用。
本发明所述的来源于干细胞所分泌的干细胞因子体系，该体系包括干细胞因子(SCF)、内皮细胞生长因子（VEGF)、表皮细胞生长因子（EGF )、肿瘤坏死因子（TNF) 肝细胞生长因子（HGF )、神经生长因子（NGF )、纤维母细胞生长因子（FGF )、胰岛素样成长因子（K;F )、粒细胞集落刺激因子（G-CSF)、白细胞介素（IL)等。
此外，干细胞分泌因子中还含各型胶原蛋白（如I、II、III、iV 型胶原蛋白）以及各种溶菌酶等。
本发明所述的干细胞因子体系是指：来源于人或哺乳动物胚胎干细胞、脐血干细胞、骨髓干细胞、表皮干细胞、内皮干细胞、外周血干细胞、脂肪干细胞等，也可泛指所有的干细胞。
本发明所得的产品作为活性成分配以医学上接受的溶解液构成组合物的产品，直接用于美容、护肤方面的用途，包括除皱、美容、祛斑、修复疤痕等。
本发明所得的产品作为活性成分可以添加到各种制剂的美容护肤产品中。
用于美容、护肤方面的用途，包括除皱、芙容、祛斑、修复疤痕等。
本发明所得产品可以用于美容、护肤产品中的针剂、面霜、乳液、水液或常用化妆品中的各种制剂，以及按照用途分类的护肤及关容的各类产品，包括但不限于清洁霜、清洁乳、清洁皂、面膜、化妆水、按摩膏、乳液、营养霜、美容霜、粉底或粉饼等。
本发明所得的干细胞活性因子体系中不含外来的培养液成分，也不含有死细胞裂解成分。
并可以长期保存而维持组织和细胞修复活性。
本发明利用干细胞多向分化和强大的自我复制能力，体外大量扩增干细胞。
依据干细胞复合因子体系具有促进表皮干细胞增殖、促进皮肤新陈代谢，增强皮肤细胞的活力，促进细胞物质成分交换的作用，来增强皮肤对其他营养物质的吸收，以及机体内代谢废物的排放。
采用干细胞在无血清条件下的分泌效应，得到不含细胞培养基和细胞组分的干细胞因子复合体系。
由于本发明不含外来培养基和细胞组分，从而避免了外来添加剂和细胞裂解毒素对皮肤造成的伤害。
使干细胞美容真正从理想走向了现实。
在生物医学的深度对传统美学观念进行了提升。
同时该发明简单易行，适宜于大规模生产，为干细胞细胞服务于美丽事业提供了一条捷径。
具体实施方式实施例l小鼠胚胎干细胞：来源于南丌大学生物中心ES细胞的培养与扩增:取lml胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES)，细胞浓度约为1X10"个细胞A)]，注射器或吸管吹打数次，以保证为单细胞悬液，将细胞铺于有原代小鼠胚胎成纤维细胞（Mt:F)的培养瓶中，ES维持培养基（天津联呈生物技术有限公司）10inl培养，过夜培养后更换培养液，2-3天后，消化、传代，再培养。
反复以上操作，以得到足够数量的ES。
干细胞活牲因子的制备：在ES细胞生长最旺盛时（约长满培养瓶70-80%面积），弃去培养基，用PBS (或生理盐水）清洗2-3次，然后加入10mlPBS，继续培养24小时。
取上清，离心，得富含干细胞因子体系。
细胞消化、计数：用磷酸缓冲溶液（PBS)轻轻冲洗培养瓶中细胞1一2次，添加3ral 消化液（025%胰蛋白酶、002%RDTA)，37。
C保温2-3分钟，显微镜下观察细胞己经分离，加入含血清DMEM培养基，吹散细胞，1500转/分钟离心5分钟，弃上清，加入5mlPBS，充分吹散细胞，进行细胞计数，按lml上清液/lX10"个细胞的浓度浓缩上清液。