用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备办法

公开

CN2 A

号

发布

申请

类型

专利

CN 7634

申请

号

公开

2009年6月24日

日

申请

2009年1月7日

日期

优先

2009年1月7日

权日

公开

, CN 2 A, CN 2A, CN 7634, CN-A-2, CN2 A, CN2A, CN7634,

号

发明

,

者

申请

人

导出

, ,

引文

(1), (2), (3)

外部链接:?,

用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法

CN 2 A

摘要

本发明涉及一种可用于美容、护肤的干细胞分泌因子的制备方法。包括细胞分离、干细胞的扩增、干细胞因子体系的获取和浓缩、贮存得到含有干细胞活性因子体系。该体系包括目前已鉴定的各型干细胞所分泌的活性因子。本发明所得的干细胞活性因子体系中不含外来的培养液成分，也不含有死细胞裂解成分。并可以长期保存而维持组织和细胞修复活性。使干细胞美容真正从理想走向了现实。在生物医学的深度对传统美学观念进行了提升。同时该发明简单易行，适宜于大规模生产，为干细胞服务于美丽事业提供了一条捷径。

权利要求(6)

1、一种用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法，其特征在于包括的步骤：1)分离干细胞：从人或哺乳动物相应组织中分离出干细胞；2)干细胞的扩增，用相应干细胞的常规培养方法，包括a-MEM培养基，加入10％的胎牛血清，5％CO2，

37℃条件下培养，定期换液，传代，进而得到所需数量的干细胞；3)干细胞因子体系的获取：在干细胞分裂最旺盛的时期，弃去正常培养基，用PBS缓冲液(磷酸缓冲液，pH＝左右)清洗1-3次，然后加入PBS或生理盐水，细胞培养箱中培养4-24小时，收集上清液，即可得到富含干细胞生长因子体系的溶液；4)浓缩、贮存：所得液体离心，除去散落细胞，浓缩，按1×106个细胞/毫升的浓度进行浓缩，得产品，可于-20℃长期保存，以备使用。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的来源于干细胞所分泌的干细胞因子体系，该体系包括该体系包括干细胞因子、内皮细胞生长因子、表皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子肝细胞生长因子、神经生长因子、纤维母细胞生长因子、胰岛素样成长因子、粒细胞集落刺激因子、白细胞介素；此外，干细胞分泌因子中还含各型胶原蛋白，包括I、 II、 III、 IV型胶原蛋白，以及各种溶菌酶。

3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的千细胞因子体系是指：来源于人或哺乳动物胚胎干细胞、脐血干细胞、骨'髓千细胞、表皮干细胞、内皮干细胞、外周血干细胞、脂肪干细胞，也可泛指所有的干细胞。

4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所得的产品作为活性成分配以医学上接受的溶解液构成组合物的产品，直接用于美容、护肤，包括、美容、祛斑、修复疤痕。

5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所得的产品作为活性成分可以添加到各种制剂的美容护肤产品中，包括除皱、美容、祛斑、修复疤痕。

6、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所得的产品用于美容、护肤产品中的针剂、面霜、乳液、水液制剂，包括清洁霜、清洁乳、清洁皂、面膜、化妆水、按摩膏、乳液、营养霜、关容霜、粉底或粉饼。

说明

用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法

技术领域

本发明涉及一种可用于美容、护肤的干细胞分泌因子的制备方法。该干细胞分泌的复合因子，可被应用于美容化妆品、保健品、护肤品。背景技术

干细胞是一种具有多向分化潜能的细胞，根据来源的不同可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞可以分化为身体的任何一种细胞，所以也叫全能干细胞。成体干细胞是指那些具有组织或器官特异性的干细胞，能在适宜的环境中分化成与其定位相宜的细胞系，又称为多能干细胞。干细胞在特定的环境中可以定向分化，从而达到修复组织和细胞损伤的作用。本发明者研究表明（Bcl-2 engineered MSCs inhibited apoptosis and improved heart function', Stem Cells, 2007 Aug;25(8):2118- 27..)干细胞可以通过分化为特定的细胞来修复组织，而旁分泌作用在组织的修复中发挥了更大的作用。也就是说，在千细胞治疗组织损伤的时候，干细胞分泌的细胞因子发挥了极为重要的作用。该体系包括干细胞因子（SCF)、内皮细胞生长因子（VEGF)、表皮细胞生长因子（EGF )、肿瘤坏死[刮子（TNF)肝细胞生长因子（HGF )、神经生长冈子（NGF )、纤维母细胞生长因子(F〔;F )、胰岛素样成长因子（IGF )、粒细胞集落刺激因子（G-CSF)、白细胞介素（IL) 等20余种。其中干细胞因子（Stem Cell Factor, SCF)不仅是维持生命活动所需要的，而且在抵抗电离辐射对机体的作有及修复辐射所致损伤中都是必不可少的。此外，干细

胞分泌因子中还含各型胶原蛋白（如i、ii、m、[V型胶原蛋白）以及各种溶

菌酶等。

表皮千细胞是皮肤更新的种子细胞。每天都有大量的表皮细胞死亡脱落，也会有相应数量的新生细胞加以补充。随着人们年龄的增加，皮肤出现斑点，皱纹也逐渐增多，表皮失去了往昔的光彩，这一切皆源于表皮干细胞再生能力的减退，如何使表皮干细胞保持旺盛的新陈代谢能力，将是保持皮肤健康美丽的关键所在。

基于人们对美丽的需求，干细胞美容技术及其相关产品的丌发R益受到业界的重视。目前市场上出现了很多所谓的干细胞产品，从技术角度上并不具备实施的可行性。中国专利CN1817339A、N1872025A和CN1817339A专利涉及产品的内容使用了活性干细胞和中药组分，首先如何在护肤品种保持干细胞的活性？其次如何避免干细胞坏死后产生毒素对人体的损害？这些都是值得探讨且很难以解决的问题。CN1872025A采用细胞破碎技术，以及正常状态下的细胞培养技术来获取干细胞活性组分。这种获取干细胞活性组分的方法缺乏依据。就如你砍碎了苹果树你并不会得到苹果？粉碎了细胞只是得到了细胞片断。常规来讲在正常生长状态下，所获取的细胞培养上清液，上清液中包含更多的是代谢废物，同时采用a-MEN(其中添加有激素如地塞米松）培养基，如何有效除去其中的激素，都是其所面临的问题。

3目前市场上也有在芙容护肤产品中添加生长因子如bFGF和EGF的，而细胞的更新是一个系统的过程，单一生长因子的添加在某种程度上虽可以刺激细胞的代谢，但也容易造成依赖性。

综上可以看出，基于干细胞的美容疗法具有广阔的前景，但如何科学、有效地利用干细胞的独特性能，开发出真正意义上的干细胞美容护肤产品，仍让是一个崭新的课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于关容护肤的干细胞分泌因子的制备方法，干细胞分泌因子可用于关容护肤的产品。

本发明提供的用于关容护肤的千细胞分泌因子的制备方法包括的歩骤：

1) 采用常规的细胞分离方法，从人或哺乳动物相应组织中分离出干细胞。

2) 干细胞的扩增，用相应干细胞的常规培养方法，包括a-MEM培养基，加入10% 的胎牛血清，5%C02，37'C条件下培养，定期换液，传代，进而得到所需数量的干细胞。

3) 干细胞因子体系的获取：在干细胞分裂最旺盛的时期，弃去正常培养基，用PBS 缓冲液（磷酸缓冲液，pt^左右）清洗l-3次，然后加入PBS或生理盐水，细胞培养箱中培养4-24小时。收集上清液，即可得到富含干细胞生长因子体系的溶液。

4) 浓缩、贮存：所得液体离心，除去散落细胞，浓缩，按lXl()"个细胞/ml的浓度浓缩，得产品，于-2(TC长期保存，以备使用。

本发明所述的来源于干细胞所分泌的干细胞因子体系，该体系包括干细胞因子