MPP_诱导PC12细胞氧化应激损伤的实验研究_安丽凤

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学位论文中期进展报告

南华大学研究生学位论文中期进展报告及评价论文题目:ADMA对MPP+损伤PC12细胞的拮抗保护作用及机制学科专业生理学研究方向神经退行性病变的防治研究生李玉娟学号20070447导师唐小卿副导师何剑琴开题日期2008.9.1拟毕业年月2010.6所属学院医学院南华大学研究生处制说明一、学位论文中期进展报告的主要内容及要求重点检查研究生的研究工作是否达到“开题报告”中提出的预期要求：是否全面掌握并正确评价与课题相关的已有成果，实验方法、研究过程是否正确、可靠，研究生是否受到良好的科研训练，是否掌握正确的科研方法，是否具备相应的科研能力，目前存在或预期可能出现的问题，论文按时完成的可能性，并决定是否通过。

具体应包括下列六部分内容：课题研究进度；已查阅文献资料情况；阶段性结论、成果及新见解；尚需研究的主要问题及研究方案；下一步研究内容和工作计划；公开发表的学术论文。

二、学位论文中期进展报告评审及要求1、学位论文中期检查时间。

研究生学位论文中期进展报告应根据论文实际进度要求精心构思与撰写，学位论文中期检查时间一般应在第五学期初完成。

2、学位论文中期进展报告形式审查。

研究生学位论文中期进展报告撰写完稿后，交导师（导师组）、学位点、学院进行形式审查合格后方可进行评审。

3、学位论文中期进展报告评价会。

学位论文中期进展报告会应在所在学科专业学术厅公开举行，学位点负责组织；学位论文中期进展报告评价专家由所在学科及相关学科专业具有硕士学位且具有高级职称的人员组成，也可邀请该研究领域的教学科研骨干参加，评委专家组人员组成在5人或5人以上，秘书1人。

4、学位论文中期进展报告评价内容。

学位论文中期进展报告评价内容主要包括课题研究进度，已查阅文献资料情况，阶段性结论、成果及新见解，尚需研究的主要问题及研究方案，下一步研究内容和工作计划，公开发表的学术论文等六个方面。

5、学位论文中期进展报告评价程序。

在学院或学位点统一组织下，由专家组长主持开题报告会。

麦角甾苷的神经保护作用研究进展

中国药理学通报ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ２０２１Ｊｕｌ；３７（７）
·９０７·
Ｔａｂ１Ｓｕｍｍｕｒｙｏｆｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｃｔｅｏｓｉｄｅ
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｏｄｅｌＰａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅＭＰＰ＋／ＰＣ１２ｃｅｌｌＭＰＴＰ／Ｃ５７ＭｉｃｅＭＰＰ＋／ｍｅｓｅｎｃｅｐｈａｌｉｃｎｅｕｒｏｎｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｓＲｏｔｅｎｏｎｅ／ｒａｔｓ６ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ／ｚｅｂｒａｆｉｓｈＤＪ１ｔｒａｎｓｅｃｔｅｄＳＨＳＹ５ＹｃｅｌｌｌｉｎｅＭＰＰ＋／ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒｇｒａｎｕｌｅｎｅｕｒｏｎｓＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅＳｃｏｐｏｌａｍｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄａｍｎｅｓｉｃｍｉｃｅＡβ２５３５ｉｎｄｕｃｅｄＳＨＳＹ５ＹｃｅｌｌｌｉｎｅＡβ２５３５ｉｎｄｕｃｅｄＰＣ１２Ａβ１４２Ａβ１４２ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌｌｙｉｎｆｕｓｅｄｔｏｒａｔｓＡβ１４２／ｒａｔＡβ１４２／ＳＨＳＹ５ＹＳｅｎｅｓｃｅｎｔＭｉｃｅＭｏｄｅｌ／ＤｇａｌａｎｄＡｌＣｌ３Ｈｙｐｏｘｉｃｍｅｍｏｒｙｉｎｊｕｒｙ
Ａｃｔｅｏｓｉｄｅ：５０ｍｇ·ｋｇ－１，ｐｏ
↓ｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｅｆｉｃｉｔｓ；↓ａｍｙｌｏｉｄｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｃｅｎｔｒａｌｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ
Ａｃｔｅｏｓｉｄｅ：５０ｍｇ·Ｌ－１
↓ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＡβ１４０ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ；↑Ａβ１４０ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ；↓Ａβ１４２ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ
关键词：麦角甾苷；神经退行性疾病；阿尔茨海默病；帕金森病；神经保护
麦角甾苷（ＡｃｔｅｏｓｉｄｅｏｒＶｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ）是一种水溶性苯乙醇糖苷类（Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｉｄｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）天然化合物，其是最为常见的二糖咖啡酰酯（ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃａｆｆｅｏｙｌｅｓｔｅｒｓ）［１］。其化学名为２（３，４二羟苯基）乙基１ΟαＬ吡喃鼠李糖基（１→ ３）（４ΟΕ咖啡酸）βＤ吡喃葡萄糖苷［２（３，４ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ１ΟαＬｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ（１→ ３）（４ΟΕｃａｆｆｅｏｙｌ）βＤｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］（Ｆｉｇ１）。麦角甾苷具有许多药理学活性。最近研究显示，麦角甾苷具有神经保护活性，在神经退行性疾病，如在帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）和阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）中的神经保护作用取得了一定进展，本文对麦角甾苷在ＡＤ和ＰＤ中的神经保护作用及其机制进行了总结，对其在动物中的药代动力学进行了归纳，同时指出其临床应用、本身局限性和将来的应用

丁苯酞治疗帕金森病的现状与展望

㊃综述㊃基金项目:暨南大学科研培育与创新基金研究项目(21617482);广州市科技计划项目(20140501)通信作者:毕伟,E m a i l :b i w e i 4762@s i n a .c o m丁苯酞治疗帕金森病的现状与展望罗日鑫1,袁琼茹1,周泳芬1,周锐意1,朱丽红2,毕伟1,3(1.暨南大学附属第一医院神经内科,广东广州510632;2.暨南大学基础医学院病理生理学系,广东广州510632;3.暨南大学临床神经科学研究所,广东广州510632) 摘要:丁苯酞保护神经细胞的作用机制与帕金森病的发病机制有一定关联,丁苯酞可能是潜在的治疗帕金森病的药物㊂本文综述了目前丁苯酞在帕金森病细胞模型㊁动物模型中的保护机制和帕金森病患者中的治疗作用,并指出丁苯酞与帕金森病研究的新方向,为明确丁苯酞对帕金森病的治疗机制奠定基础㊂关键词:帕金森病;丁苯酞;保护机制中图分类号:R 742.5 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2018)11-1002-03d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2018.11.020 丁苯酞是一种从芹属种子中提取分离的化合物,是我国自主研究开发的用于治疗缺血性脑卒中的药物,它可以通过抑制炎症反应㊁保护线粒体功能㊁抗氧化应激及减少细胞凋亡等机制保护神经细胞,丁苯酞可能也是通过上述机制对帕金森病起到治疗作用㊂目前治疗帕金森病的选择和疗效有限,针对丁苯酞治疗帕金森病的机制研究,有利于扩大丁苯酞的适应症,为帕金森病患者提供更多选择㊂为进一步探索丁苯酞对帕金森病的治疗作用及其机制,现将目前丁苯酞在帕金森病模型及帕金森病患者中的保护作用及其相关机制予以概述㊂1 帕金森病的发病机制帕金森病是一种运动障碍性疾病,临床表现为静止性震颤㊁肌强直㊁运动迟缓及姿势障碍等运动症状和感觉障碍㊁自主神经功能障碍及精神障碍等非运动症状㊂帕金森病的主要病理改变包括黑质多巴胺能神经元丢失和神经元胞浆内路易小体形成㊂α-突触核蛋白是路易小体的主要成分之一,α-突触核蛋白对神经元有毒性作用,既可以直接激活小胶质细胞引起神经炎症,也可以通过增加炎性细胞因子白介素1β(I L -1β)和肿瘤坏死因子α(T N F -α)的表达,破坏多巴胺能神经元,是造成帕金森病的重要发病病理机制[1]㊂α-突触核蛋白是通过自噬降解的,当α-突触核蛋白错误折叠时,α-突触核蛋白会对神经元产生毒性作用,从而促进自噬的发生,加快α-突触核蛋白的降解,这提示自噬与帕金森病的发病密切相关[2]㊂另外,有大量研究认为线粒体功能障碍是导致多巴胺能神经元死亡的重要原因[3]㊂其中,1-甲基4-苯基吡啶离子(M P P+)发挥着重要作用,M P P +在神经元线粒体内抑制线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ活性,导致线粒体氧化磷酸化功能发生障碍,A T P 生成减少,激发氧化应激,活性氧(R O S )增加,进一步破坏线粒体膜结构,最终导致神经元变性坏死[4]㊂可见帕金森病与氧化应激反应也有着密切的联系,同时有研究表明[5],线粒体功能障碍㊁钙超载㊁铁离子堆积㊁小胶质细胞的激活等能造成多巴胺神经元氧化性损伤,促进多巴胺神经元的凋亡㊂根据目前这些已知的帕金森病的发病机制,已经有研究探讨了丁苯酞在帕金森病中的保护作用机制㊂2 丁苯酞在帕金森细胞模型中的保护作用机制2.1 大鼠的肾上腺嗜铬细胞瘤12(P C 12)细胞 P C 12细胞被神经生长因子处理后,会发生神经元样细胞分化,神经突起的数量和长度增加,生理生化功能趋向神经元[6]㊂因此,P C 12细胞模型已成为抗帕金森病药物体外研究的经典模型之一㊂目前已证实丁苯酞对P C 12细胞有一定的保护作用,并且其保护机制已经部分明确㊂丁苯酞可以在M P P+诱导的P C 12细胞帕金森病细胞模型中激活自噬,加快自噬体的聚集,促进α-突触核蛋白降解,从而保护P C 12细胞免受M P P +诱导的神经毒性[7]㊂而且丁苯酞可保护M P P +诱导的P C 12细胞帕金森病细胞模型的线粒体功能,并通过抑制R O S 的产生和抑制线粒体通透性转换,降低了M P P+的细胞毒性并增加细胞内谷胱甘肽(G S H )含量,从而减少氧化应激[8]㊂这意味着丁苯酞是一个潜在有效的用于治疗帕金森病的治疗剂㊂2.2 人神经母细胞瘤细胞系S H -S Y 5Y 细胞 S H -S Y 5Y 细胞是一种由人神经母细胞瘤细胞系S K -N -㊃2001㊃‘临床荟萃“ 2018年11月5日第33卷第11期 C l i n i c a l F o c u s ,N o v e m b e r 5,2018,V o l 33,N o .11Copyright ©博看网. All Rights Reserved.S H通过3次克隆后产生的亚系细胞,生长繁殖速度较快,细胞质具有神经样突起,可表达多巴胺转运体,是一种研究帕金森病的常用细胞系[9]㊂用鱼藤酮24小时诱导S H-S Y5Y细胞所建立的帕金森病细胞模型能够很好地模拟帕金森病的病理改变,尤其是α-突触核蛋白的表达和细胞包涵体形成[10]㊂丁苯酞可以抑制鱼藤酮诱导S H-S Y5Y细胞产生MM P +,同时抑制R O S生成,减轻氧化应激,从而保护多巴胺神经元,为S H-S Y5Y细胞帕金森病模型提供神经保护作用[11]㊂丁苯酞可能是通过调节J N K通路死亡受体途径上p-J N K㊁F a s㊁F a s L的表达[12]㊁下调P53㊁B a x的表达以及上调B c l-2的表达[13],从而抑制M P P+诱导的S H-S Y5Y细胞凋亡,提示丁苯酞可能是通过抑制细胞凋亡来发挥对帕金森病的治疗作用㊂3丁苯酞在帕金森动物模型中的保护作用机制3.1S D大鼠 S D大鼠头部较狭长,尾长接近身长,繁殖数目较多,生长发育较快,对呼吸系统疾病的抵抗力特别强,自发肿瘤概率低㊂研究表明,用黑质立体定向注射法,向S D大鼠黑质内注射鱼藤酮可以建立稳定的帕金森病动物模型[14]㊂丁苯酞在该模型中有一定保护作用㊂丁苯酞可改善帕金森病S D 大鼠模型旋转行为,并通过增高G S H水平,降低丙二醛(M D A)水平,增强超氧化物歧化酶(S O D)活性,从而增强抗氧化能力,同时可以提高黑质多巴胺能神经元残存率,提示其可能对帕金森病具有治疗和保护作用[15]㊂也有研究表明,丁苯酞对帕金森病S D 大鼠模型保护作用可能通过抑制B a x和C a s p a s e-8两个凋亡关键蛋白的表达,从而抑制了神经细胞的凋亡进程,减少神经细胞损伤,并促进T H表达,从而增加多巴胺含量,进一步发挥神经保护作用[16]㊂3.2 C57B L/6小鼠 C57B L/6小鼠通过腹腔注射脂多糖(L P S)后能够引起持续性的小胶质细胞活化,通过行为学检测发现经L P S处理后的小鼠可出现明显的帕金森病表现,同时通过免疫组化染色证实经L P S处理后的小鼠中脑黒质多巴胺能神经元数量减少显著,说明L P S诱导C57B L/6小鼠可建立较为稳定的慢性帕金森病小鼠模型[17]㊂丁苯酞在该模型中有一定的保护作用,丁苯酞可能是通过抑制小胶质细胞活化,降低核内α-突触核蛋白沉积,并增加L P S 诱导的帕金森病模型小鼠黑质中T H阳性细胞的存活,从而发挥其治疗效果[18]㊂除此之外,有实验研究表明,丁苯酞主要通过抑制J N K通路的激活㊁减少I L-1β,I L-6,和I L-10多种炎性因子的生产和上调血红素氧合酶-1,来发挥对L P S诱导的细胞炎性反应的抑制作用,从而对帕金森病小鼠模型起保护作用[19]㊂4丁苯酞在帕金森病患者的治疗作用对于早期帕金森病患者,还没有用丁苯酞治疗的先例,对于中晚期帕金森病患者,丁苯酞能有效改善其运动波动症状及非运动症状[20]:用丁苯酞治疗12周后,帕金森病评定量表(U P D R S)Ⅳ降低1.5分, 开期延长约1.45小时, 关期缩短1.55小时,患者的头晕㊁白天思睡和血压波动等非运动症状也有不同程度的改善,帕金森病生活质量问卷(Q O L)下降5.1分㊂甚至有报道,丁苯酞联合美多巴治疗比美多芭单独治疗更明显的改善帕金森病患者临床症状,表明丁苯酞可能是一种帕金森病的直接或间接的治疗药物,具有良好的应用前景[21-22]㊂丁苯酞对帕金森病合并抑郁症患者也有一定疗效㊂经丁苯酞治疗后,帕金森病合并抑郁症患者的汉密尔顿抑郁量表(H AM D)评分明显较前降低,丁苯酞的疗效可能与它可以明显降低血清C反应蛋白水平,提高5羟色胺水平有关[23]㊂通过蒙特利尔认知评估量表(M o C A)和简易精神状态量表(MM S E)评价认知功能,采用日常生活能力(A D L)量表评价其日常生活能力,可以证实丁苯酞可以改善帕金森痴呆患者认知功能和日常生活能力,研究表明,丁苯酞的在改善帕金森痴呆患者认知功能和日常生活水平疗效均优于盐酸多奈哌齐(安理申)[24-25],丁苯酞联合普拉克索改善认知效果优于单独使用普拉克索[26]㊂因此,丁苯酞在帕金森病中有一定疗效,但目前研究实验样本较小,需要更多研究确定其疗效和有无相关不良反应㊂帕金森病的体外细胞模型有多种,包括非神经元性肿瘤细胞系㊁神经元性肿瘤细胞系㊁炎症-免疫异常细胞模型以及诱导的多能干细胞来源的模型[27],帕金森病的动物模型也有很多种,包括S D大鼠㊁C57B L/6小鼠㊁秀丽线虫㊁猕猴[28];其中丁苯酞在P C12细胞㊁S H-S Y5Y细胞㊁S D大鼠和C57B L/6小鼠的帕金森病模型的作用机制已有研究,部分保护机制已经明了,但是对于丁苯酞在其他帕金森病模型的作用机制,目前尚无研究㊂丁苯酞治疗帕金森病的机制可能可以从这不些同的细胞模型和动物模型中得出新的结论,尤其是帕金森病的炎症-免疫异常细胞模型㊂小胶质细胞在病理状态下过度激活产生大量炎症因子可以直接或间接损伤神经元[29],是帕金森病的重要的发病机制之一,但丁苯酞在小胶质细胞的保护作用机制却暂无研究㊂在临床研究中,一方面,早期帕金森病患者临床症状不明显,又缺乏特异性标志物,本身诊断就比较复杂困难[30-31],㊃3001㊃‘临床荟萃“2018年11月5日第33卷第11期 C l i n i c a l F o c u s,N o v e m b e r5,2018,V o l33,N o.11Copyright©博看网. All Rights Reserved.因此缺乏丁苯酞对早期帕金森病患者治疗效果的研究;另一方面,丁苯酞治疗中晚期帕金森病的研究样本数量还不够大,还有部分研究缺乏安慰剂对照,这可能是丁苯酞治疗帕金森病的疗效未得到公认的原因之一㊂在丁苯酞对帕金森病疗效方面,大多数研究都侧重于帕金森病运动症状的改善,但是帕金森病的非运动症状也严重影响患者生活质量[32],如果针对丁苯酞对帕金森病非运动症状作研究可能可以得出新结论㊂综上所述,丁苯酞在多种帕金森病模型中可以发挥保护作用,并且在帕金森病患者中也体现一定的疗效,但其中的保护机制尚未完全明确,随着人们的不断探索,相信丁苯酞在帕金森病的疗效和保护机制将进一步明确㊂参考文献:[1]谈丹丹,洪道俊,徐仁伵,等.神经胶质细胞和神经退行性疾病[J].中国老年学杂志,2015,33(2):464-466.[2]沈杨,张琦,赵佳奇,等.阿尔兹海默病与帕金森病共性病理机制研究进展[J].中华中医药学刊,2018,36(2):319-322. [3]林瑶,许茜,蔡晶.线粒体功能障碍与帕金森病研究进展[J].海峡药学,2017,29(12):5-13.[4] T y a g i R K,B i s h tR,P a n tJ,e ta l.P o s s i b l er o l eo fG A B A-Br e c e p t o rm o d u l a t i o ni n M P T Pi n d u c e dP a r k i n s o n'sd i s e a s e i n r a t s[J].E x p T o x i c o l P a t h o l,2014,67(2):211-217. 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虾青素通过H-1NOX2途径抑制MPP+诱导PC12细胞氧化损伤

性。 3、免疫印迹法结果显示，MPP+处理细胞后 NOX2、HO-1、Nrf2 升高(P＜0.05)；经
氯化血红素和虾青素预处理后，细胞内 NOX2 蛋白表达水平下降，而 Nrf2 和
2
万方数据
HO-1 蛋白水平升高。 4、Real-time RCR 结果显示，MPP+处理细胞后 NOX2、HO-1mRNA 升高(P＜0.05)；
万方数据
目
录
英文缩略词表·······················································1 中文摘要···························································2 英文摘要·························································· 4 引言·····························································6
发挥着至关重要作用。近年来发现虾青素是一种类胡萝卜素，可通过血脑屏障，具有很强的清除自由基、抗氧化损伤、抗凋亡等生物学作用。HO-1/NOX2 细胞信号途径在 MPP+诱导的 PC12 细胞氧化应激损伤中作用机制未见报道，虾青素是否通过 HO-1/NOX2 途径拮抗 MPP+诱导的 PC12 细胞氧化应激损伤也未见报道。【目的】 1、探讨氯化血红素对 MPP+诱导的 PC12 细胞模型的保护机制及其与 HO-1/NOX2
经氯化血红素和虾青素预处理后，细胞内 NOX2mRNA 表达水平下降，而 HO-1mRNA 水平升高。 5、共聚焦显微镜观察结果显示，MPP+明显增加 NOX2 和 HO-1 表达，其荧光范围伸长扩大，而该结果被 DPI 抑制。经氯化血红素和虾青素预处理后，细胞内 NOX2 蛋白荧光强度减弱，而 HO-1 蛋白荧光强度增强。【结论】 1、氯化血红素诱导 HO-1 表达水平上调和抑制 NOX2 表达，即 HO-1 过表达可抑制 NOX2 依赖的 ROS 产生，以减少 MPP+诱导的氧化应激损伤。 2、虾青素可通过活化 HO-1/NOX2 途径，抑制 ROS 产生，而使 PC12 细胞免受 MPP+ 介导的氧化损伤。【关键词】 MPP+、NOX2、HO-1、帕金森病、虾青素

MPP_诱导PC12细胞氧化应激损伤的实验研究_安丽凤

+
MPP + 对 PC12 细胞形态的影响
珋 MPP 对 PC12 细胞 OD 值和存活率的影响（ x ʃ s）时间 12h OD 值存活率（ % ） 100 90． 2 87． 6 87． 0 86． 1 24h OD 值 0． 366 ʃ 0． 06 0． 319 ʃ 0． 03 * 0． 308 ʃ 0． 03 * 存活率（ % ） 100 87． 2 84． 2 OD 值 0． 720 ʃ 0． 06 48h 存活率（ % ） 100
实验依据。 1 材料和方法 1. 1 主要材料
PC12 细胞购自中科院上海生物细胞 + 研究所； 1 －甲基－ 4 －苯基－吡啶离子（ MPP ），四甲基偶氮唑盐（ MTT ）购自美国 sigma 公司； DMEM 培养基购自 GIBCO 公司产品；胎牛血清（ NBS ）购自杭州四美国 philippines 公司；酶标仪，季青公司；倒置显微镜，塞默飞世尔（上海）仪器有限公司；流式细胞仪，美国 BD 公司。
1500r / min 离置 CO2 培养箱中培养 48h 后，胰酶消化，心 5min ，弃上清取沉淀，用 PBS 缓冲液漂洗 2 次，加入 500 μL Buffer 重悬细胞，过滤，再加 5 μL Annexin V － FITC 和 10 μL PI 染液，室温避光温育 5min ，流式细胞仪检测，所有数据均经 CellQuest 软件收集处理。 1. 5 LDH NO NOS 的测定实验分组同上，每组设 3 。 PC12 0. 5 ˑ 10 5 / mL 个复孔将对数生长期的细胞以接种于 6 孔板中，接种 1mL，培养 24h 后模型组加入 MPP + ，使它的终浓度为 300 μmol / L，空白组加入等体置 CO2 培养箱中培养 48h 后，收集培养积的培养液， NO、上清，分 3 份冻存备用。测时取上述样本按 LDH、 NOS 试剂盒操作，用 756 紫外可见分光光度计测定其吸光度。 1. 6 SOD MDA 的测定分组和处理方法同前。 PC12 细胞给予药物处理后，用胰酶消化收集细胞， 3000r / min 离心 5min ，并用 PBS 液洗 2 次，然后定量加入 1mL 含有 0. 05mM EDTA 的冰 PBS 超声裂解细胞， 4ħ ， 10000r / min 离心然后放入低温超速离心机中， 60min 。离心后，取上清液测定各组 MDA 的含量和 SOD 的活性。细胞蛋白定量应用考马斯亮兰标准定量方法。各样本吸光度值应用可见光－紫外光分光光度计测定。珋 1. 7 统计学处理各组数据均用 x ʃ s 表示，采用 SPSS 软件进行组间 t 检验， P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。 2 2. 1 结果 MPP + 对 PC12 细胞形态的影响从光镜观察可以看出空白组 PC12 细胞状态良好，梭型明显，细胞分

MPP +诱导PC12细胞损伤的蛋白质组学研究

关键词：Ｐ１Ｃ２细胞；ＭＰ；蛋白质组学；ＤＧＥＰＩ中图分类号：０Ｑ５３文献标识码：Ａ
ＰｒｔｏｃｒｓａｃｆａｏｔｓｓｉｄｃｄｂＰｉＣ１ｅｌｚＨＡＮＧ，ｎｍｅ，ｏｅｍｉｅｅｒｈｏｐｐｏｉｎｕｅｙＭＰｎＰ２ｃｌｓＹａ－ｉＣＨＡＮＧ，ｉｇ，Ｕｅ，ｔＭｎｗｗｉｅ
病的发病机制。法方
异凝胶电泳（ｉｅｅｔｌｅＥｅｔｐｏｅｉ，ＧＥ系统构建双向电泳图，ｅｙｅ件分析蛋白表达差异信息，Ｄｆｒｎｉｌ１ｃｒｈｒｓＤＩ）ｆａＧｏｓＤＣｄｒ软运用ＭＡＩＩ — ＤＴＯＦ质谱鉴定差异蛋白质。果与对照组相比，验组共有３蛋白点发生变化ｉ定了其中７结实２个鉴种
ａ．（ｅａｔｅｔｆＮｅｒｌｙ７ｈｉｔｓｉｌｉｎＵｎｖｒｉＣａｇｈｎ１０２，ｈｎ）１ＤｐｒｍｎｕｏｇｉａｏｏｅｓＨｏａｏｆｉｔＡｂｔａｔＯｂｅｔｖＩｒｅＯｓａｃｏｈｃａｉｍｆＰｒｉｓｎｄｓａｅ，ｔｄｅｈｈｎｅｏｓｒｃ：ｊｃｉｅｎｏｄｒｔｅｒｈｆｒｔｍｅｈｎｓｏａｋｎｏｉｅｓｗｅｓｕｉｄｔｅｃａｇｆｅ
结构和功能各异的蛋白。结论本研究鉴定出氧化应激和线粒体损伤相关的蛋白ｔｉｒｄｘｎＭＰｓ与细胞骨架ｈｏｅｏｉ、Ｐ，相关的蛋白ＮＦＩｚｉ，有分子伴侣活性的蛋白ＮＡＣ、ｒｓａｌ，免疫炎症相关的蛋白ｇｌＢ这些蛋白的显 — ｅｒ具ｎｃｙｔｉｉ与ｌｎＣｑＰ。著改变可能与Ｐ的发病机制密切相关。Ｄ

促红细胞生成素对MPP~+所致的PC12细胞线粒体氧化损伤的保护作用

ｍＬ时达到最大保护效应；ＭＰ导致Ｒ）量增加、ｍ降低；Ｐ）以抑制ＭＰ ’ 致Ｒ ③ Ｐ（ｓ含 △ Ｅ（可Ｐ所ＯＳ和 △ ｍ水平的变
化；ＥＯ增加了Ａｋ磷酸化水平，ＩＫ抑制剂Ｌ２４０ ③ ＰｔＰ３Ｙ９０２拮抗了ＥＯ的保护作用和对ＲＰＯＳ产生的抑制作用。论结
ＷｕｒａＳｕｎ，ｎｎｅｎ．ｎＸｉＦａｇＸｉｔａｌＤｅａｔｎｆＮｅｒｌｇＵｎｏｏｐｔｌＴｏｇｉｅｉａｏｌｇ，ｕｚｏｇｐｒｍｅｔｕｏｏｙ，ｉｎＨｓｉａ，ｎＪｄｃｌＣｌｅｅＨａｈｎｏＭ
。中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系，汉｛０３华武３００
摘要目的
探讨促红细胞生成素（Ｐ）对１甲基一基吡啶离子（Ｐ）导Ｐ１Ｅ（）一４苯ＭＰ诱Ｃ２细胞变性损伤的保护作用
第３９卷第２期第１６页５
２０年４月０１
华中科技大学学报（学版）医
ＡｃａＭｅｔｄＵｎｉｃｃｏｕｚｏｖＳｉＴｅｈｎｌＨａｈｎｇ
Ｖｏ．９Ｎｏ２Ｐ．１６１３．５Ａｐ．ｒ２１００
ＥＰＯ对ＭＰＰ损伤Ｐ２细胞具有保护作用，机制是通过Ｐ３Ａｋ通路实现的。Ｃ１其１Ｋ／ｔ
关键词促红细胞生成素；１甲基一一基吡啶离子；ＰＩ一４苯Ｃ２细胞；活性氧；线粒体膜电位；Ａｋｔ

红景天苷的生物学功能及应用前景

红景天苷的生物学功能及应用前景高刚1,2(1.伊犁师范大学体育学院新疆伊宁839300;2.新疆师范大学体育学院新疆乌鲁木齐830054)摘要：近年来，各种代谢性疾病和心血管疾病已经影响了人们的生命健康和安全。

红景天苷是一种具有极高药用价值的生物活性成分，它作为一种天然化合物，对代谢和心血管具有显著治疗作用。

红景天苷具有广泛的药理活性，包括抗癌、抗炎、抗氧化、抗缺氧、抗疲劳、抗衰老、抗病毒、抗运动性疲劳，红景天苷的潜在作用机制主要与调节基因和蛋白表达有关，该文就红景天苷对代谢和心血管疾病的影响，探索红景天苷在相关疾病中潜在的治疗作用。

关键词：红景天苷生物学功能应用前景中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：2095-2813(2023)17-0009-05 Biological Functions and Application Prospects of SalidrosideGAO　Gang1,2(1.College of Physical Education, Yili Normal University, Yining, Xinjing Uygur Autonomous Region, 839300China；2.Institute of Physical Education, Xinjiang Normal University, Urumqi, Xinjing Uygur AutonomousRegion, 830054 China)Abstract: In recent years, various metabolic diseases and cardiovascular diseases have affected people's life health and safety. Salidroside is a biologically active ingredient with high medicinal value. As a natural compound, it has significant therapeutic effects on metabolism and cardiovascular system. Salidroside has a wide range of pharmacological activities, including anti-cancer, anti-inflammation, anti-oxidation, anti-hypoxia, anti-fatigue, anti-aging, anti-virus, and anti-exercise fatigue, and the potential mechanism of action of salidroside is mainly related to regulator gene and protein expression. For the effect of salidroside on metabolism and cardiovascular diseases, this paper explores the potential therapeutic effects of salidroside in related diseases.Key Words: Salidroside; Biological function; Application; Prospect红景天，俗称“金根”或“玫瑰根”，属于景天科植物，具有抗糖尿病、抗癌、抗衰老、心脏保护和神经保护等作用。

nrf2信号通路与肝细胞凋亡研究进展

细胞凋亡又叫程序性细胞死亡或者细胞的自杀性死亡，是机体固有的一种自我调节形式。

当细胞凋亡受到抑制或者凋亡过度，打破了机体的平衡能力时，就会导致疾病的发生。

氧化应激是机体受到各种因素刺激时，体内产生过多高分子活性物质而引起组织和细胞损伤的过程，细胞内的氧化还原平衡受到破坏，从而影响多种信号转导通路。

转录因子NF-E2相关因子2（Nuclear factor E2-related fator2，Nrf2）是一个在全身表达的一种转录因子，主要在一些代谢性器官表达，如肝脏、肾脏、神经系统、皮肤[1]等，参与到各种细胞生命活动中，包括维持氧化还原平衡、代谢、增殖和凋亡。

此外，多方面的证据表明其在肝脏的损伤和修复中起到了重要的作用[2，3]。

研究表明，Nrf2可抑制细胞凋亡和促进细胞再生。

本文主要归纳了Nrf2信号通路及其在氧化应激下肝细胞凋亡中的作用，探讨其在临床治疗中的指导意义。

1肝细胞凋亡肝脏是人体重要的解毒、代谢、合成器官，可抵御有害物质对人体的侵害。

但当肝细胞受到一些因素的影响时，会出现过度的凋亡，引发一系列病理变化，导致疾病的发生。

以往人们认为肝细胞凋亡受到两个途径调控：1）外源性（死亡受体途径）：基本机制是Fas系统的激活，当细胞在接受凋亡信号（如TNF-α、FASL等）后，Fas和细胞膜上FasL受体相结合，激活了细胞凋亡通路[4]。

细胞表面分子受体相互聚集并与细胞内的衔接蛋白相结合，procaspases募集在受体周围并相互活化，产生级联反应，启动细胞凋亡。

2）内源性（线粒体途径）：当肝细胞受到多种信号（如：活性氧、钙离子、P53等）刺激时，可导致线粒体外膜通透性增加和膜电位的下降，线粒体内膜上的细胞色C（Cytochrome C，Cyt-c）释放到胞质中，并与胞质内的凋亡肽酶激活因子-1、ATP等结合形成凋亡小体，活化了Pro-caspase-9并激活下游的促凋亡蛋白激酶，不但使得DNA降解为寡聚核苷酸片段，同时将肝细胞骨架拆散，切断其与周围的联系，诱导了肝细胞表达促凋亡信号，引发细胞凋亡[5]。

PC12细胞中MPP~+诱导的α-synuclein聚集和自噬对其降解机制研究

PC12细胞中MPP~+诱导的α-synuclein聚集和自噬对其降解机制研究第一部分二巯基异构酶S-亚硝基化促进α-synuclein聚集目的利用MPP+诱导PC12细胞建立帕金森病细胞模型,研究氧化应激和氮化应激反应在帕金森病发病中的作用,以及PDI过亚硝基化以及PDI与α-synuclein异常聚集的关系,从抑制α-synuclein聚集角度探讨帕金森病细胞保护策略。

方法以MPP+诱导PC12细胞,建立帕金森病细胞模型,利用一氧化氮合酶抑制剂及一氧化氮前体物质分别或者共同作用于帕金森病细胞模型,检测一氧化氮生成水平及PDI S-亚硝基化程度,PDI S-亚硝基化采用生物素标记方法检测,同时WB检测α-synuclein 表达水平,研究分析在帕金森病中PDI S-亚硝基化与α-synuclein聚集的关系。

结果(1)MPP+处理的PC12细胞导致氧化应激和氮化应激反应,NO生成明显增加,细胞活性显著下降,α-synuclein表达增加;(2)WB方法检测MPP+处理后的PC12细胞总PDI表达量没有显著变化。

但是PDI S-亚硝基化水平明显增加,表明MPP+导致了PC12细胞PDI S-亚硝基化反应,同时α-synuclein表达增加;(3)使用一氧化氮合酶抑制剂后NO生成减少,PDI S-亚硝基化水平降低,同时α-synuclein聚集减少,提示α-synuclein异常聚集和PDI S-亚硝基化水平有关;(4)一氧化氮前体物质L-精氨酸可以抵消一氧化氮合酶抑制剂的作用,导致一氧化氮合酶抑制剂阻止PDI S-亚硝基化作用消失。

结论PDI S-亚硝基化在帕金森病细胞模型对α-synuclein异常聚集具有促进作用,当PDI发生过亚硝基化时其抑制α-synuclein聚集作用消失,氮化应激、NO生成过多与PDI S-亚硝基化反应有关,抑制PDI S-亚硝基化反应可以阻止α-synuclein聚集,具有细胞保护作用。

莫诺苷抑制铁死亡保护MPP^(+)诱导的PC12细胞模型的机制研究

莫诺苷抑制铁死亡保护MPP^(+)诱导的PC12细胞模型的机制研究徐进;张怀亮;杨东东;刘美君;李毛【期刊名称】《中医研究》【年(卷),期】2024(37)6【摘要】目的:通过体外实验观察莫诺苷对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP^(+))诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC)12模型的保护作用,阐释其通过激活核因子E-2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应原件(antioxidant response element,ARE)通路抑制铁死亡的作用机制。

方法:将细胞分为空白对照组、模型组(1 mmol/L MPP^(+))、莫诺苷组(5μmol/L莫诺苷+1 mmol/L MPP^(+))、ML385(Nrf2抑制剂)组(1 mmol/L MPP^(+)+2μmol/L ML385)、莫诺苷+ML385组(5μmol/L莫诺苷+1 mmol/L MPP^(+)+2μmol/L ML385)。

CCK-8法检测细胞活力,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),酶联免疫吸附法检测铁(ferrum,Fe)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,Western Blot法检测Nrf2、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、膜铁转运蛋白1(ferroportin 1,FPN1)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应检测SLC7A11、GPX4 mRNA表达。

米诺环素抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤

米诺环素抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤乐亮;李晶洁;黎仕锋;朱文博;束敏峰;苏兴文;邱鹏新;颜光美【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)005【摘要】目的:探讨米诺环素(minocycline)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤的保护作用.方法:将MPP+加入体外培养的的 PC12 细胞中,建立多巴胺能神经元凋亡模型,实验过程中用minocycline进行预处理,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞存活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,DCFH-DA检测ROS聚集,JC-1检测细胞线粒体膜电位变化.结果:0.5 mmol/L MPP+处理PC12细胞24 h,能明显抑制细胞生长(抑制率80.8%),诱导细胞发生凋亡(凋亡率5.22%),同时ROS浓度提高230.0%,线粒体膜去极化(绿/红荧光强度比为11.95).而加入10 μmol/L minocycline预处理30 min可明显升高MPP+处理的 PC12 细胞活性,细胞凋亡率明显降低(P<0.01),ROS浓度明显下降,绿/红荧光强度比也明显降低(P<0.01).结论:Minocycline抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡部分通过对抗其线粒体功能而发挥作用.【总页数】5页(P895-899)【作者】乐亮;李晶洁;黎仕锋;朱文博;束敏峰;苏兴文;邱鹏新;颜光美【作者单位】中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510082【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.类叶升麻苷通过诱导血红素加氧酶-1的表达抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤[J], 王洪权;王玉敏;崔其福;赵伟丽;成龙2.IGF-1通过PI3K/Akt通路抑制MPP+诱导PC12细胞凋亡机制的研究 [J], 黄露麒;王万铭3.二氢杨梅素通过上调自噬活性抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤 [J], 周湘华;赵其辉;周寿红4.姜黄素对MPP+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用 [J], 陈静;李波;李红军;肖长义5.天麻素联合异钩藤碱通过线粒体途径抑制MPP+诱导PC12细胞凋亡 [J], 李晓明;荣华;潘思文;董妙先因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

通过细胞模型体外评价抗氧化活性实验方法研究综述

通过细胞模型体外评价抗氧化活性实验方法研究综述源瀚祺;黄庆华;李娆玲【摘要】对抗氧化活性的细胞筛选实验方法进行综述,重点介绍了目前常用的细胞氧化应激损伤模型及其应用,并总结了构建该模型的细胞选择和氧化受损细胞的药效检测方法,为选择合适的抗氧化活性的细胞筛选实验提供参考.%This paper summarizes the methods for screening of the cellular antioxidant activity, and highlights the current cellular oxidative stress models and its application. Cell selection and oxidative injury examination were also discussion. The article aims to provide better references for perfecting the cellular antioxidant activity assay.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2012(028)002【总页数】4页(P208-211)【关键词】氧化应激;细胞模型;抗氧化活性【作者】源瀚祺;黄庆华;李娆玲【作者单位】广东药学院药科学院,广东广州510006;广东药学院药科学院,广东广州510006;广东药学院药科学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R965.1机体内正常生理活动过程中都有氧化活性物质参与的氧化反应，但当机体或细胞内的氧自由基(ROS)及其诱发产生的新自由基超出自身的抗氧化能力，或外源性氧化物质的过量摄入，就会导致氧自由基在细胞内过量蓄积而引发氧化应激的状态[1]。

人体内自身存在自由基清除系统可维持氧自由基的动态平衡[2]。

但随着年龄的增长，清除系统功能减退，氧自由基产生增加，加速了机体的衰老性变化[3]，同时可能导致心血管疾病、糖尿病、癌症及神经性疾病的产生[4-6]。

学位论文中期进展报告

南华大学研究生学位论文中期进展报告及评价论文题目:ADMA对MPP+损伤PC12细胞的拮抗保护作用及机制学科专业生理学研究方向神经退行性病变的防治研究生李玉娟学号导师唐小卿副导师何剑琴开题日期2008.9.1拟毕业年月2010.6所属学院医学院南华大学研究生处制说明一、学位论文中期进展报告的主要内容及要求重点检查研究生的研究工作是否达到“开题报告”中提出的预期要求：是否全面掌握并正确评价与课题相关的已有成果，实验方法、研究过程是否正确、可靠，研究生是否受到良好的科研训练，是否掌握正确的科研方法，是否具备相应的科研能力，目前存在或预期可能出现的问题，论文按时完成的可能性，并决定是否通过。

二、学位论文中期进展报告评审及要求1、学位论文中期检查时间。

研究生学位论文中期进展报告应根据论文实际进度要求精心构思与撰写，学位论文中期检查时间一般应在第五学期初完成。

2、学位论文中期进展报告形式审查。

研究生学位论文中期进展报告撰写完稿后，交导师（导师组）、学位点、学院进行形式审查合格后方可进行评审。

3、学位论文中期进展报告评价会。

4、学位论文中期进展报告评价内容。

5、学位论文中期进展报告评价程序。

在学院或学位点统一组织下，由专家组长主持开题报告会。

14-3-3蛋白过表达减轻MPP +对PC12细胞的毒性损伤

ｔｉｒＣ２ｃｌｉｄｃｄｂＰａｄｉｅｈｎｓｓＭｅｈｄＦｒｘｒｓｏｍｍｌｌｅｓｌｉｕｙｆ１ｅｕｅｙＭＰｎｓｃａｉｍ．ｔｏｓｏｐｅｓｎｉｍａａｉＵ。ｌ－ｅｏＰｌｎｔｍｅｉｎａｃｐＤＡ．（＋）１－－ｐａｍｉｗｓｃｎｔｃｄａｄｔｎｆｃｄｉｔＰ１ｅｌｉｌｉｆｃｍｎ ‘ ２０．ｃＮ３１一４３３ｌｄａｏｓｕｔａｓｔｏＣ２ｃｌｗｔｐｅｔｉｅ００ｓｒｅｎｒｅｅｎｌＬｏａ
ｏｐｍｉｅｄｓｕａｅ（Ｏａｅｓｌｔｈｏｅｐｍｉａｅ（Ｓｉ）ｏＣ２ｃｌｔａｉｌＰｆｕｅｘｄｉｔｓｍｓＳＤ）ｓｌａｕｔｉｎｅｘｄｗｌｇａｓＧＨ．ｘｆ１ｅｅｔｗｔＭＰＰｒｅｄｌ
【摘要】目的探讨１－３白过表达对１甲基４苯基吡啶离子（Ｐ诱导Ｐ１４３蛋－一一ＭＰ）Ｃ２细胞损伤
的保护作用和可能的机制。方法构建ｐＤＡ．（＋）１－－ｃＮ３１一４３３真核表达质粒，染Ｐ１转Ｃ２细胞，立建稳定过表达１＿－白细胞株；４３３蛋通过四甲基偶氮唑盐法（Ｔ法）流式细胞术和酶标仪分别检测１ — ＭＹ、４
维普资讯
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７６・
２００７年２月第４０卷第２期
ＣｉＮｕｏ，ＦｂａｙｈｎＪｅｒｌｅｒｒｕ
ｏ，Ｊ
．
帕金森病
１ —— 白过表达减轻ＭＰ＋对４３３蛋ＰＰ１Ｃ２细胞的毒性损伤

虾青素通过S1NR1通路拮抗MPP+诱导的PC12细胞氧化损伤

目录英文缩略词表 (1)中文摘要 (2)英文摘要 (5)前言 (7)材料与方法 (9)结果 (21)讨论 (28)结论 (31)参考文献 (32)致谢 (36)综述 (37)英文缩略词表(Abbreviations and acronyms)虾青素通过Sp1/NR1通路拮抗MPP+诱导的PC12细胞氧化损伤中文摘要【背景】帕金森病（Parkinson Disease，PD）是老年人群中发病率很高的一种神经系统退行性疾病，氧化应激损伤在帕金森病的发生中起着关键作用已被广泛认可。

Sp1是第一个被克隆和纯化的核转录因子，具有高度保守的DNA结合序列。

Sp1通过自身及其下游基因表达的调节参与多种细胞的增殖、凋亡及相关疾病的发生发展和治疗。

体内外实验研究均证实，氧化应激条件下，Sp1的表达及其与NR1启动子结合活性均上调，进而上调NR1的表达，介导后续的兴奋毒性及细胞凋亡。

N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体在神经系统疾病中的作用越来越受到关注。

NMDA受体主要存在突触前膜，是由NR1、NR2A-D、NR3A-B等亚单位构成的异四聚体。

NR1是功能性NMDA受体的必须基团，PC12细胞中主要表达NR1。

氧化应激后，兴奋性谷氨酸过度激活NMDA受体导致神经元胞内钙超载而触发的系列生化改变和诱导相关基因的表达可能是导致神经元损伤的重要原因，因此该受体通道的调控在氧化应激的治疗中可能是重要的靶点之一。

近年来发现虾青素（astaxanthin，ATX）具有显著的抗氧化损伤、清除自由基、抗凋亡等生物学作用，可顺利通过血脑屏障，有望成为治疗神经退行性疾病的保护性药物。

Sp1/NR1细胞信号通路在MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤中作用未见报道，ATX是否通过Sp1/NR1细胞信号通路拮抗MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤也未见报道。

因此研究ATX对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用的机制，为寻求有效的保护和治疗PD提供新的思路，意义重大。

硫酸化茯苓多糖对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究

硫酸化茯苓多糖对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究高贵珍;吴超;陈哲;刘小阳【期刊名称】《淮北师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)004【摘要】为探究硫酸化茯苓多糖（SP）对MPP+损伤的PC12细胞的保护作用，通过一定浓度的SP与PC12细胞共培养，检测SP的毒性作用；以MPP+损伤PC12细胞作为帕金森病（PD）细胞模型，MTT法检测细胞活力，显微镜观察细胞形态，紫外分光光度计法测定SOD、GSH-Px、LDH活性以及MDA含量.结果表明：SP浓度在0.5~4 mg/mL范围内对PC12细胞没有毒性；200μmol/L MPP+作用于PC12细胞24 h建立损伤模型；MPP+模型组细胞数量明显减少，细胞突起收回或消失，胞体变小、变圆；LDH释放量、MDA含量显著增加（均为P<0.01），SOD和GSH-Px活性极显著降低（均为P<0.01）.与模型组相比，SP 浓度在2~4 mg/mL时，细胞活力增大（P<0.05），细胞数量显著上升，胞体变大，贴壁能力恢复明显；LDH的释放量、MDA含量显著下降（均为P<0.01），SOD和GSH-Px活性显著提高（均为P<0.01）.一定浓度的SP能够抑制MPP+对PC12细胞的氧化应激损伤.【总页数】7页(P52-58)【作者】高贵珍;吴超;陈哲;刘小阳【作者单位】宿州学院生物与食品工程学院，安徽宿州 234000;宿州学院生物与食品工程学院，安徽宿州 234000;宿州学院生物与食品工程学院，安徽宿州234000;宿州学院生物与食品工程学院，安徽宿州 234000【正文语种】中文【中图分类】R322.81【相关文献】1.硫酸化茯苓多糖对MPP＋诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究 [J], 高贵珍;吴超;陈哲;刘小阳;2.豨莶草提取液对MPP＋诱导的PC12细胞损伤的保护作用 [J], 张磊;王彦永;刘佳;于静;杨树民3.促红细胞生成素对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用 [J], 李格;孙圣刚4.硫化氢对MPP+诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用 [J], 尹蔚兰;何剑琴;唐国华;张恺芳;唐小卿5.硫酸化茯苓多糖对MPTP诱导的小鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用 [J], 高贵珍;吴超;薛宏宇;王超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Nrf2活化剂SFP对MPP+所致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

Nrf2活化剂SFP对MPP+所致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用曹旭;肖海兵;杨燕;常飞;张临洪【摘要】目的探讨激活核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid-derived 2-related factor 2,Nrf2)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制.方法以MPP+损伤PC12细胞作为帕金森病(PD)细胞模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成量,罗丹明123(Rh123)染色检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),免疫印迹法检测磷酸化的蛋白激酶B(pAkt)表达水平,评价Nrf2激动剂莱菔硫烷(SFP)对该损伤模型的影响并探讨其相关机制.结果①500 μmol/L的MPP+可以导致PC12细胞的存活率下降,凋亡率增加,0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μmol/L浓度的SFP可以使PC12细胞的存活率增加、凋亡率降低,并在5.0 μmol/L时达到最大保护效果;②MPP+导致PC12细胞ROS生成增加、ΔΨm降低,SFP可以减轻该氧化应激损伤;③SFP增加Akt磷酸化水平,该效应及其抗氧化损伤作用可被PI3K抑制剂LY294002所拮抗.结论 Nrf2活化剂SFP能抑制MPP+对PC12细胞的氧化应激损伤,其机制是通过PI3K/Akt通路实现的.%Objective To investigate the protective effects of the Nrf2 agonist sulforaphane(SFP) on the MPP+-induced injury of PC12 cells and the related mechanisms. Methods A cell model of Parkinson's disease was established by treating rat pheochromocytoma(PC12) cells with MPP+. The cell viability was determined by MTT assay and the apoptosis rate of PC12 cells by flow cytometry. The cellular ROS level and the mitochondrial transmembrane potential were measured by spectroflu-orometry. Theexpression of pAkt in PC12 cells was detected by Western blot. Results The MPP+ treatment reduced the viability and increased the apoptosis of PC12 cells, which could be reversed by SFP. And there occurred the maximum protective effect of SFP at a concentration of 5. 0 jumol/L. Moreover,SFP could inhibit the production of ROS and the disruption of mitochondrial transmembrane potential induced by MPP+. SFP could increase the level of phosphorylation of Akt,a substrate of PI3K. It was also found that the anti-oxygen stress effect of SFP could be eliminated in the presence of the PI3K inhibitor, LY294002. The effect of SFP on the ROS levels and cell viability could also be blocked by LY294002. Conclusion The Nrf2 agonist sulforaphane may attenuate the MPP+-induced oxidative stress in thePC12 cells through the PI3K/Akt-mediated signaling pathway.【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(042)002【总页数】5页(P143-147)【关键词】核因子红系2相关因子2;莱菔硫烷;1-甲基-4-苯基吡啶离子;PC12细胞;氧化应激;Akt【作者】曹旭;肖海兵;杨燕;常飞;张临洪【作者单位】武汉市中心医院神经内科,武汉,430014【正文语种】中文【中图分类】R329.25帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是以黑质多巴胺能神经元变性死亡为主要病理改变的运动障碍性疾病，其主要的临床特征为静止性震颤、肌强直、运动迟缓及姿势步态异常。

miR-185_过表达对MPP+诱导帕金森病模型细胞损伤的影响及其机制

miR-185过表达对MPP+诱导帕金森病模型细胞损伤的影响及其机制刘啸1，张磊2，陶伟11 聊城市第二人民医院神经内科，山东聊城252600；2 聊城市第二人民医院肿瘤内科摘要：目的　探讨miR-185过表达对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导帕金森病（PD）模型细胞损伤的影响及其机制。

方法　体外传代培养PC12细胞。

取传3代、对数生长期PC12细胞，随机分为对照组、模型组、NC mimics 组、miR-185 mimics组。

模型组、NC mimics组、miR-185 mimics组予1 mmol/L MPP+诱导PD细胞模型，对照组不予MPP+诱导。

成模24 h，NC mimics组、miR-185 mimics组分别转染NC mimics、miR-185 mimics。

取上述各组细胞，采用RT-qPCR法检测miR-185表达；采用CCK-8法检测培养24、48、72 h细胞增殖活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用ELISA法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），采用Western blotting法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。

结果　与对照组比较，模型组miR-185相对表达量及培养24、48、72 h细胞增殖活性降低，细胞凋亡率升高（P均<0.05）；GSH、SOD含量降低，MDA含量升高（P均<0.05）；Bcl-2蛋白相对表达量降低，Bax 蛋白相对表达量升高（P均<0.05）。

与NC mimics组比较，miR-185 mimics组miR-185相对表达量及培养24、48、72 h 细胞增殖活性升高，细胞凋亡率降低（P均<0.05）；GSH、SOD含量升高，MDA含量降低（P均<0.05）；Bcl-2蛋白相对表达量升高，Bax蛋白相对表达量降低（P均<0.05）。

而模型组与NC mimics组上述指标比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。