稀少精子冷冻技术

稀少精子冷冻技术

薛松果

临床应用价值高：

男方因素约占不孕症病因的30-40％，无精症约占男方因素的10％左右。1992年Palermo等首先将卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)技术应用于临床，解决了男性严重少、弱、畸形精子症患者不能生育子代的难题。而ICSI技术结合显微外科取精术如附睾精子抽吸术(microsurgical epididymal sperm aspiration，MESA)、经皮附睾穿刺取精术(percutaneous epididymal sperm aspiration，PESA)和睾丸精子抽取术(testicular sperm extraction，TESE)则使无精症患者养育遗传学子代成为可能。

然而，MESA、PESA和TESE等都是创伤性手术，多次反复手术可能造成睾丸、附睾组织纤维化，导致不可逆的睾丸萎缩、生精功能退化，为了尽可能地减少患者反复穿刺取精的痛苦，更好地保全男性的生精功能，医学工作者试图对无精子症患者诊断性穿刺或ICSI治疗周期剩余的微量活动精子进行冷冻保存，在女方采卵当日将复苏后存活的精子用于ICSI，这将大大提高该类患者辅助生育治疗的灵活性和可靠性。

技术难度大：

但是，传统的精子冷冻采用 1.8mL的冷冻管(Cryovial)或0.25－0.5mL麦管(Straw)作为冷冻载体，冷冻/复苏过程还需要对精子作2-3次离心洗涤，每一步操作都会造成精子不同程度的损失。而睾丸或附睾穿刺获得的精子一般数量少、活力差，常规冻存复苏后，往往难以找到足够的活动精子进行ICSI，所以传统方法不适用于对穿刺获得的精子进行冷冻保存。

现状：

自Jacques Cohen等报道用空透明带作为载体进行人单个精子冷冻以来，有多个载体被报道可用于单个或稀少精子的冷冻保存，如ICSI注射针、冷冻环（Cryoloop）、Cryotop、Cell Sleeper等等。但截至目前，尚没有一个理想的、简单、高效的方法和载体用于人辅助生殖临床上对无精症患者穿刺获得的精子进行冷冻保存。

九院特色：

自2010年开始，九院就尝试用自制的冷冻片Strawtop冷冻睾丸/附睾穿刺精子，并先后申请了两项稀少精子冷冻（含单个精子）方面的专利，我们的经验是，一个好的、适合在临床上推广使用的（不仅仅是研究用）稀少和单个精子冷冻的技术，应该满足三个条件：1 回收率高，这是前提，没有高回收率则会导致复苏后精子数量不足，而取消ICSI治疗周期，或被迫做卵子冷冻（该技术目前并不成熟，冷冻卵子的使用效率仅为新鲜卵子的50-60%）。2 复苏存活率高，这是关键，要尽可能提高稀少和单个精子复苏后的存活率。 3 易于使用、可及性强，临床技术人员是否愿意使用对一个技术方法的推广至关重要。

九院已有成绩：

2009年3月18日-2015年12月31日

558人次，2960支，5.3支/人/次

附睾穿刺93人次，睾丸穿刺316人次，睾丸切开47人次，精液102人次。

九院方法：

九院用自制冷冻片Strawtop对穿刺获得的稀少精子进行冷冻保存，与传统的麦管法相比，二者复苏精子的受精率、优质胚胎率、临床妊娠结局等均无差异，但该方法可以大大降低无精子患者反复穿刺的发生率，在诊断性穿刺手术日对穿刺获得的精子进行冷冻保存，极大避免取卵日无精子可用的情况发生。该方法在本科室已经成功应用了5年。

冷冻

解冻：

匡延平，彭秋平。精子的冷冻和解冻方法及精子的冷冻和解冻装置。申请号：200810042695.4，主分类号 C12N5/08(2006.01)I，分类号：C12N5/08(2006.01)I C12M3/00(2006.01)I，公开号：101671651，公开日：2010-03-17

薛松果，彭秋平，曹少峰，匡延平。一种微量精子冷冻保存载体。申请号或专利号：201520322730.3

Songguo Xue, Qiuping Peng, Shaofeng Cao, Qiao Y u, Jiqiang Si, Yanping Kuang*, Cryopreservation of a small number of human spermatozoa with home-made Strawtop: 3 years experience, The 2nd World Congress on Fertility Preservation, Miami USA, 2011.12.08-10, Journal of assisted reproduction and genetics, 28, 991-992.

Qiu-Ping Peng, Shao-Feng Cao, Qi-Feng Lyu, Song-Guo Xue*, Wei Jin, Xiao-Yin Liu,Wen-Jie Zhang, H. Ingolf Nielsen, Yan-Ping Kuang, A novel method for cryopreservation of individual human spermatozoa, In Vitro Cellular & Developmental Biology –Animal, 47(8), 565-72, 2011