精子冷冻保护剂
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
随着现代生殖医学的发展，精液冷冻已经成为一项重要的技术手段。
然而，精液冷冻
复苏效果的稳定性和可靠性一直是精液冷冻技术研究的热点问题。
精液冷冻前优化处理方
式对精子冷冻复苏效果的影响成为当前研究的一个重要方向。
精液冷冻前的优化处理方式具体包括以下几个方面：收集和处理精液、加工分装、添
加低分子保护剂、添加高分子保护剂、添加复合保护剂等。
首先，收集和处理精液对精子冷冻复苏效果有重要影响。
合理收集和处理精液可使精
子质量得到有效保护，从而提高精液冷冻复苏效果。
同时，要注意避免收集到混合精液、
精液质量差的情况，否则会影响冷冻复苏效果。
其次，加工分装也是影响精液冷冻复苏效果的重要因素之一。
加工分装时可以选择较
小容量的冻管进行分装，这样有利于保护精子，防止精子变形和损伤，从而提高精液冷冻
复苏效果。
除了上述两点，添加低分子保护剂、添加高分子保护剂、添加复合保护剂也是优化处
理方式的重要手段。
添加低分子保护剂可以有效保护精子细胞膜，增加精子的冷冻复苏率；添加高分子保护剂可以改善精液流变学特性，防止精子聚集、粘附和凝聚；添加复合保护
剂可以综合利用低分子和高分子保护剂的优点，进一步提高精液冷冻复苏效果。
精子冷冻保护液说明书
CryoSperm™For HSA-free cryopreservation of human spermatozoa•For cryopreservation of human spermatozoa•Free of proteins and any components of animal origin •Ready to useCryoSperm™For HSA-free cryopreservation of human spermatozoaCryoSperm™ is a ready-to-use, HSA-free sperm freezing medium using a blend of glycerol and raffinose ascryoprotectants. The medium is free of any proteins and components of animal origin.Raffinose is a trisaccharide, which functions as anextracellular (non-permeating) cryoprotectant, while glyc-erol permeates the cell membrane and functions intracel-lularly. The combination of raffinose and glycerol has pre-viously been shown to significantly improve the fertilizing ability of frozen-thawed spermatozoa (T ada et al 1990).The CryoSperm™ protocol follows the traditional 1:1 mix with seminal plasma.Clinical documentationCryoSperm™ has been compared to Sperm FreezingMedium (product no. 1067) in three independent studies at Clermont-Ferrand (F), Rennes (F), and Nordic Cryobank (DK).All parameters examined in all three studies showed equal or better results in CryoSperm™.CryoSperm™ yielded significantly better:• Straight-line velocity (VSL)• Motility• Amplitude of lateral head displacement (ALH)• Linearity • Vitality%µm/s ReferencesTada et al. (1990) J Reprod Fertil 89(2):511-6 Hammerstedt et al (1990) J Androl 11(1):73Quality control testing• Sterility tested (Ph. Eur., USP)• pH tested (Ph. Eur., USP)• Endotoxin tested ≤ 0.1 EU/ml (Ph. Eur., USP)• Sperm survival testedNote: The results from each batch are stated on a Certificate of Analysis, which is available on .Catalog No. 11010010CryoSperm™ (1 x 10 ml)ContactPlease visit to find your local ORIGIO MediCult Media distributor or contact ORIGIO directly at the address listed below.。
C57BL／6品系小鼠精子冷冻保护剂的选择
C57BL／6品系小鼠精子冷冻保护剂的选择遗传工程技术的快速发展，遗传修饰小鼠的获得越来越容易，如何高质量保存这些小鼠资源已经成为一个重要的问题。
精子冷冻保存是指将精子保存于超低温状态下，使精子新陈代谢速度减慢或停止，一旦恢复正常生理温度又能继续发育的过程。
小鼠精子冷冻保种法由于其操作简单、经济、并且产生后代的潜在能力强，已经在国外很多实验动物中心广泛使用，但国内动物中心普遍还是采用传统的小鼠活体保种法。
由于活体保种法非常不经济，又存在种源动物易污染，珍贵品系易丢失等潜在风险。
鉴于目前遗传修饰小鼠大部分是C57BL/6品系背景的，因此，建立和健全完善的C57BL/6品系小鼠精子冻存保种系统迫在眉睫。
本文通过对比三种不同的精子冻存保护剂，找出适合C57BL/6品系小鼠的精子冻存保护剂。
标签：C57BL/6品系；精子冻存；冷冻保护剂1 遗传修饰小鼠的获得现状作为常用的模式生物之一，小鼠在现代生物医学研究中发挥着不可或缺的作用。
随着遗传工程技术的快速发展，遗传修饰小鼠的获得越来越容易，如何高质量保存这些小鼠资源已经成为一个重要的问题，建立和健全完善的小鼠保种体系是生物医学发展的迫切需求。
小鼠保种方法主要有活体保种、胚胎冷冻、卵母细胞冷冻、精子冷冻、精子冻干等。
目前国际上比较常用的是胚胎冷冻和精子冷冻[1-2]。
但由于小鼠精子有较大的镰刀状头部和较长的尾部，对冷冻造成的机械损伤非常敏感，同时小鼠精子质膜成分特殊导致其对冷冻渗透压耐受性低[3-4]，所以小鼠精子冷冻完后成活率与复苏率非常低。
直到Nakagata发明的“Nakagata冷冻法”）[5-8]。
尽管Nakagata冷冻法对于部分小鼠品系的精液的冷冻保存具有很好的效果，但对于实验室广泛使用的C57BL/6、BALB/C等近交系小鼠的精子用Nakagata冷冻法冻完后的成活率和受精率远远低于封闭群和杂交小鼠[3，9]。
C57BL/6等实验室常用近交系小鼠的精子冷冻已成为当前急剧增加的遗传工程小鼠保种的一个瓶颈，同时也是国内外研究的热点。
精子冷冻保护剂（GEYC，含抗生素）说明书
精子冷冻保护剂(GEYC,含抗生素)说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介：
又名甘油-卵黄-柠檬酸盐冷冻保护剂，用于精子的冷冻保护,减少因冷冻造成精子的死亡。
最常用的精子冷冻保护剂，含卵黄和抗生素。
无菌溶液。
含有葡萄糖、柠檬酸钠、甘油、甘氨酸、卵黄、抗生素等。
由于添加青链霉素等抗生素，使用时应注意个别受精者发生过敏反应。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响精液冷冻是一种常见的生育技术，在许多不孕不育患者中得到了广泛的应用。
由于精子在冷冻过程中易受到损伤，因此精液冷冻前的优化处理方式对精子冷冻复苏效果有着重要的影响。
本文将探讨精液冷冻前的优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响，并提出一些可能的改进方法。
一、精子冷冻的原理精子冷冻是指将新鲜精液中的精子通过特定的冷冻液处理后，降低到极低的温度，从而避免由于时间延长和环境因素的影响而导致精子死亡或功能丧失。
这样处理后的精子可长期保存，并在需要时通过复苏技术重新获得其活力和生育能力，以达到助孕的目的。
二、精液冷冻前的优化处理方式1. 精子分离和筛选在进行精液冷冻前，首先需要对精液进行分离和筛选，以去除掉畸形精子、无活力精子和其他污染物质。
这样可以保证只有高质量的精子被用于冷冻，提高冷冻后精子的复苏效果。
2. 添加保护剂在进行精液冷冻处理时，需要添加适量的保护剂以保护精子的细胞膜和生物结构。
这些保护剂可以在冷冻过程中减少冷冻液对精子的损伤，提高冷冻后精子的复苏效果。
3. 控制冷冻速率4. 优化冷冻液配方精液冷冻液的配方对冷冻效果有着重要的影响。
在进行精液冷冻前需要对冷冻液的配方进行优化，以提高冷冻后精子的复苏效果。
5. 标签和储存在进行精液冷冻后，需要对冷冻管进行标签记录，并将其储存在符合要求的冷冻条件下。
这样可以保证冷冻后的精子能够长期保存，以便在需要时进行复苏。
三、影响冷冻复苏效果的因素1. 冷冻液成分3. 冷冻液pH值冷冻液的pH值对精子的冷冻复苏效果也有着重要的影响。
不同的pH值可能会引起不同程度的精子损伤，因此需要对冷冻液的pH值进行严格的控制。
4. 冷冻储存条件冷冻储存条件的选择也对精子的冷冻复苏效果有着重要的影响。
不符合要求的冷冻储存条件可能会导致冷冻后的精子失去活力，降低其复苏效果。
四、改进方法3. 加强冷冻复苏技术加强冷冻复苏技术的研究和应用，提高冷冻后精子的复苏效果。
含雌激素的冷冻保护剂对冻存正常精子质量的影响
表 ２ 不 同 冷 冻 保 护 剂 冻 后 各 指 标 与 冻 前 比较 的 ｔ 值
（ ：， 讨雌 激素 在 精子 冻存 中的作 用， Ｅ）探 以指 导今后
的临床 实践 。
材 料与 方法
一
差异有 统计 学 意义 （ ＜００ ） Ｇ Ｐ ．１ 。 ４组 各参数 高于 Ｇ ２
组 ， 表 １ ３ 见 ～。
表 １ 冷 冻 前 后 精 子 的各 功 能 参 数 （ ｎ ２ ） ％，＝ ０
ｈｕ ａ， ＺＨＡ ０ ｎ—ｉ ＪＡ ｈｏ ｔｎ ｌ， Ｉ Ｓ ｏ—ｏ ｇ， Ｗ ＡＮＣ Ｈｏ ｇ－ ．Ｎｉ ｇ ｉ ｅ ｃａ ｉ ｅｓｔ Ｙｉ ｃ ａ ７ ００ ， Ｃｈｉａ ｎ ） ｎ ｘ ａ Ｍ ｄｉ ｌ Ｕｎ ｖ ｒｉ）， ｎ ｈｕ ｎ ５０ ４ ｌ ｎ
ｔ ｌＦ ｎ －ｕ ， ＷＡ ｎ － ￣ Ｌ ｅｇｈ ａ ＮＧ Ｈｏｇ） Ｒ ｐｏ ｕｔ ｅ ｌ ｆ ｔｅ Ａｆ ｉ ｅ ｓ ｉｌ ｔ Ｎ ｎｘａ Ｍｅ ｉ ｌ ｏ ｅ ｒｄ ｃｉ Ｃ ｎｅ ｏ ｈ ｆ ｌ ｔｄ Ｈｏ ｔ ｉ ｉ ｚ ｅ ｒ ｉａ ｐａ ｇ ｄｃ ｏ
合 剂 和 甘 油 及 甘 油 一卵 黄 一柠 檬 酸 钠 （ ＹＣ 作 为 Ｇ ）
精 子 冷 冻 保 护 剂 ，本 研 究 在 此基 础 上 加 入 雌 二 醇
－
４ ・ ０
国际生殖健康 ／ 计划生育杂志 ２ １ 年 １ ０１ 月第 ３ ０卷第 １ Ｊｎ Ｒ ｐｏ ｅｈ／ａ Ｐａ 。 ａｕｒ ０ １Ｖ １３ ， ｏ １ 期 ｔ ｅｒ Ｈ ａｈＦｍ ｌ Ｊ ａｙ １， ｏ．０ Ｎ ． Ｉ ｄ ｎ ｎ ２
旦 堕堡堕 芷 生 １ Ｊ 生宣垄 ０１ 月第３卷第１ Ｊ ｔｅ ＭＨａ ／ ｍＰｎ Ｊ ｕｙｏ１ ｏ ３，０１ 志２１年１ ０ 期 ｐ ｅ ｈ ａ ａ，ａ ａ ｌ Ｖ１ ０Ｎ． ｌＲｒ ｎ ｈＦ ｌ ｎ ｒ ． ２ ，
一种用于维持精子质膜稳定的精子冷冻保存液及其制备方法和应用[
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010997227.3(22)申请日 2020.09.21(71)申请人 上海市第十人民医院地址 200000 上海市静安区延长中路301号(72)发明人 谢天承 詹相城 许云飞 (74)专利代理机构 上海申新律师事务所 31272代理人 郎祺(51)Int.Cl.A01N 1/02(2006.01)(54)发明名称一种用于维持精子质膜稳定的精子冷冻保存液及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种用于维持精子质膜稳定的精子冷冻保存液，组分包括：丙三醇、人血清白蛋白、甘氨酸、孕酮、DMSO和EBSS缓冲液；其中，所述丙三醇为10‑15％(v/v)，所述人血清白蛋白为5‑15％(v/v)，所述甘氨酸为5‑15mmol/L，所述孕酮为0.5‑1.5μg/mL，所述DMSO为0.01‑0.1％(v/v)。
本发明还涉及一种如上述精子冷冻保存液的制备方法。
本发明再涉及一种如上述精子冷冻保存液在维持精子质膜稳定中的应用。
本发明以最大限度的避免冷冻及复苏精子的损伤为切入点，加入了孕酮及甘氨酸等创新组分，制备全新的精子冻存液，有效的降低冷冻精子复苏过程中受到的损伤，显著的提高了复苏后精子的活力，保持的精子的受精能力。
权利要求书1页 说明书4页CN 112273369 A 2021.01.29C N 112273369A1.一种用于维持精子质膜稳定的精子冷冻保存液，其特征在于，组分包括：丙三醇、人血清白蛋白、甘氨酸、孕酮、DMSO和EBSS缓冲液；其中，所述丙三醇为10-15％(v/v)，所述人血清白蛋白为5-15％(v/v)，所述甘氨酸为5-15mmol/L，所述孕酮为0.5-1.5μg/mL，所述DMSO为0.01-0.1％(v/v)。
2.根据权利要求1所述的精子冷冻保存液，其特征在于，组分包括：丙三醇、人血清白蛋白、甘氨酸、孕酮、DMSO和EBSS缓冲液；其中，所述丙三醇为12％(v/v)，所述人血清白蛋白为10％(v/v)，所述甘氨酸为10mmol/L，所述孕酮为1μg/mL，所述DMSO为0.01％(v/v)。
冻精活力检测标准
冻精活力检测标准一、引言冻精是指经过冷冻保存后的精子，其活力能够保持在一定水平上。
冷冻精子的活力检测是在人工辅助生殖技术领域中非常重要的一项工作，它直接影响到人类生殖医学的成功率。
因此，建立符合标准的冻精活力检测方法和标准对于提高人工生殖技术的成功率具有重要意义。
二、冻精活力的影响因素1. 冷冻速度冻精的冷冻速度会影响其活力，一般情况下，冷冻速度越快，冻精的活力损失越小。
2. 冷冻保护剂不同的冷冻保护剂会对冻精的活力产生不同的影响，选择合适的冷冻保护剂可以有效地保护冻精的活力。
3. 冷冻温度冻精的冷冻温度也会对其活力产生影响，一般情况下，较低的冷冻温度可以更好地保护冻精的活力。
4. 解冻方法解冻方法的选择也会影响冻精的活力，合理的解冻方法可以最大限度地保护冻精的活力。
三、冻精活力检测方法及标准1. 冻精样品的制备a. 采用无菌技术，从冷冻管中取出适量的冻精样品放入离心管中。
b. 在室温下缓慢解冻，并且避免冻精样品受到过度的振动或剧烈晃动。
2. 活力检测方法a. 温度恢复试验将冻精样品置于37℃温水中，观察其在不同时间内的活跃度和活力回复情况。
b. 渗透试验将冻精样品与不同浓度的渗透试剂进行接触，观察其在不同浓度下的活力情况。
c. 顶空法检测在显微镜下观察冻精样品中活跃的精子数量和活力情况，以及其运动轨迹和速度等。
四、冻精活力检测标准1. 温度恢复试验标准a. 冻精样品在37℃温水中，活跃的精子占总数的百分比大于50%，视为活力良好。
b. 冻精样品在37℃温水中，活跃的精子占总数的百分比在30%-50%之间，视为活力一般。
c. 冻精样品在37℃温水中，活跃的精子占总数的百分比小于30%，视为活力差。
2. 渗透试验标准a. 冻精样品与浓度为200 mOsm/L的渗透试剂接触，活跃的精子占总数的百分比大于50%，视为活力良好。
b. 冻精样品与浓度为200 mOsm/L的渗透试剂接触，活跃的精子占总数的百分比在30%-50%之间，视为活力一般。
精子的简易保存方法
精子的简易保存方法精子的保存方法主要是为了保持其活力和生存能力，以便在需要的时候进行使用。
以下是几种可以较为简便地保存精子的方法：1. 冷冻保存法：将精液收集到无菌容器中，并添加适量的冷冻保护液，如冷冻培养基、人工输精管液等。
然后，经过预冷处理，将容器放入液氮罐中迅速冷冻至-196，即可长期保存。
这种方法适用于较长时间保存，保存时间可达数年。
2. 低温保存法：将精液收集到无菌容器中后，使用高冷冻度冰箱或液氮冷冻保存。
一般来说，温度介于-20到-80之间，可以保存数月至数年不同程度。
这种方法适合于中长期保存，同时比冷冻保存法更便捷。
3. 保护剂保存法：使用专门的保护剂可以保持精子的活力和生存能力。
常用的保护剂有乳糜、蔗糖、麦角酸等，可以有效地减少精子受损和死亡。
将精液和保护剂混合后，放置在恰当的温度下保存。
这种方法适用于短期保存，保存时间一般为几天至一周。
4. 冷冻干燥保存法：将精液在无菌条件下进行冷冻干燥处理，即将冷冻的精液转变成固态，然后经过低温真空下的脱水处理。
这种保存方法可以延长精子的存活时间和保存时间，适用于长期保存。
5. 混合保存法：将精液与其他物质（如胎牛血清、羊血清等）混合，以提高其保存能力。
这种方法被广泛应用于精子库的建立和管理，可以有效地保存大量的精子样本。
值得注意的是，以上方法仅仅是保持精子保存的基本方法，实际操作中还需结合具体情况和实验室设备来进行选择。
此外，保存过程中需要保持无菌条件、避免温度变化过大和震荡等，以确保精子的质量和保存效果。
总结起来，精子的保存方法多种多样，从冷冻保存到保护剂保存再到混合保存等不同方式，都可以较为简便地保存精子，以备需要时使用。
选择何种保存方法应根据实际情况来定，同时在保存过程中要注意维持适宜的温度和无菌环境，以确保保存质量和效果。
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精子冷冻保护剂
简介：
正常精液是一种混合物，在射精时由睾丸和附睾的分泌物及悬浮其中的精子与前列腺、精囊腺和尿道球腺的分泌物混合而成，最终射出的混合物是一种粘稠的液体。
精子分析的方法有很多，其中可通过培养进行检测。
Leagene 精子冷冻保护剂主要由甘油、葡萄糖、枸橼酸钠、抗生素等组成，经无菌处理，其基本原理是在细胞冷冻过程中随着温度不断下降，细胞外液中作为各种电解质溶剂的水分首先形成细小的颗粒状冰晶，导致细胞外水份减少，电解质浓度增加，细胞外液渗透压升高，，用冷冻过程中产生的渗透压的梯度使细胞皱缩，而不损伤细胞。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
(一)人类精液快速冷冻步骤
1、精液取出后，在37℃的水浴箱中液化。
2、精液液化后按照WHO 的标准进行常规分析，包括精液量、颜色、气味、PH 值、液化状况、精子密度、活动率、圆细胞数等，并做好相关记录。
3、提前将冷冻保护剂复温至室温。
4、将精液与冷冻保护剂按的比例混匀，并分装于冷冻管中，冷冻管做好标记。
5、将冷冻管置入4℃冰箱。
6、将冷冻管置入－80℃液氮蒸气。
7、将冷冻管投入液氮中冻存。
(二)人类精液程序冷冻步骤
1、精液取出后，在37℃的水浴箱中液化。
2、精液液化后按照WHO 的标准进行常规分析，包括精液量、颜色、气味、PH 值、液化状况、精子密度、活动率、圆细胞数等，并做好相关记录。
3、提前将冷冻保护剂复温至室温。
4、将精液与冷冻保护剂按的比例混匀，并分装于冷冻管中，冷冻管做好标记。
5、将冷冻管置于程序冷冻仪中，开始程序冷冻。
冷冻程序如下：编号
名称CZ0150Storage
精子冷冻保护剂
100ml -20℃
使用说明书1份
1）开始温度：20℃平衡5-10min；。
6、从程序冷冻仪中取出冷冻管，投入液氮中冻存。
(三)复苏步骤
冷冻过程中精子发生的一系列变化也会表现在解冻时的反向顺序中，而快速复温(100℃/min左右)可避免精液在溶解前的再次形冰晶成，具体步骤为：将贮存于液氮中的精液冷冻管取出，快速放入37℃的水浴箱中复温即可。
注意事项：
1、注意无菌操作，尽量避免污染。
2、影响精液冷冻贮存的因素主要有：冷冻程序、冷冻保护剂、复苏速率、贮存方式，及冷冻前精液质量等。
3、人们多使用液氮来贮存精液，液氮是一种无色、无味的气体，其沸点为－195.8℃。
具有低温、不助燃、不自燃、不易爆炸、来源丰富的优点。
有效期：6个月有效。
4℃保存1周有效。
相关：
编号名称
DH0006苏木素伊红(HE)染色液
PE0018SDS-PAGE凝胶配制试剂盒
TO1013丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。