简易的精子冷冻保存法
实验室常用猪精液的低温保存方法
实验室常用猪精液的低温保存方法
一、冷冻保存
冷冻保存是猪精液最常见的保存方法之一。
在冷冻保存之前，需要对猪精液进行初步处理。
需要保持猪精液的干净和纯净，避免杂质的混入。
将处理好的猪精液放入专用的冷冻管中，然后将冷冻管放入冷冻盒中。
接着，将冷冻盒放入专用的冷冻机中，进行冷冻保存。
在冷冻保存的过程中，需要控制温度和湿度，避免冷冻温度过高或者过低，以免影响猪精液的质量。
冷冻保存方法能够长时间保存猪精液，并且保持猪精液的活力和质量，适用于长时间保存和远距离运输。
二、液氮保存
液氮保存方法能够更好地保持猪精液的质量和活力，可以长时间保存，并且适用于大规模的保存和长时间的保存需求。
液氮保存需要特殊的设备和条件，并且保存、运输和使用过程中需要更加小心谨慎，否则会影响猪精液的质量。
三、干冰保存
干冰保存是一种中等程度的低温保存方法。
在干冰保存之前，同样需要对猪精液进行初步处理。
然后将处理好的猪精液装入专用的干冰盒中，接着将干冰盒放入专用的冷冻设备中进行保存。
干冰保存方法能够较长时间地保存猪精液，并且适用于一般实验室的保存需求。
它比液氮保存更为便捷和易行，但是保存时间相对较短。
实验室常用猪精液的低温保存方法有冷冻保存、液氮保存和干冰保存等多种方式。
不同的保存方法适用于不同的实验需求和实际情况，实验室人员需要根据实际情况进行选择和使用。
在保存猪精液的过程中，需要注意保持猪精液的纯净和完整，控制保存温度和湿度，以及避免受到外界因素的影响，以确保保存的猪精液的质量和活力。
希望本文对实验室人员在猪精液保存方面有所帮助。
实验室常用猪精液的低温保存方法
实验室常用猪精液的低温保存方法一、低温保存的原理猪精液的低温保存是利用低温来减缓其新陈代谢速度，延长其活力。
在常温下，精子的新陈代谢速度较快，容易受到环境因素的影响而丧失活力。
而在低温条件下，精子的新陈代谢速度减慢，能够有效地延长其存活时间。
低温保存是保持猪精液活力的有效方式。
二、常用的低温保存方法1. 液氮保存：液氮是目前应用最广泛的一种低温保存方法。
液氮的温度极低，能够有效地减缓精子的新陈代谢速度，延长其存活时间。
在保存猪精液时，首先需要将其置于专用的液氮保存罐中，随后将保存罐放置在液氮罐中保存。
液氮保存的优点是保存温度极低，能够有效地保持精子的活力，但由于操作需要液氮保存罐等设备，成本较高。
三、保存效果的分析对比上述三种低温保存方法，液氮保存的效果最为理想，能够保持猪精液的活力和质量。
但由于操作需要专用的液氮保存罐和液氮等设备，成本较高。
低温冰箱保存操作简单，适用于一般实验室的保存需求，但保存温度相对较高。
液氮罐保存介于两者之间，保存温度较低，设备成本相对较低。
在具体选择低温保存方法时，需要根据实验室的实际需求和条件进行综合考量。
四、保存注意事项1. 保持干燥：在进行猪精液的低温保存时，需要保持保存容器的内部干燥，避免水汽的凝结影响精子的存活。
2. 防止冻结：在进行液氮或液氮罐保存时，需要确保保存容器的密封性和抗冻性，避免因温度过低造成猪精液的冻结损伤。
3. 定期检查：无论采用何种低温保存方法，都需要定期检查保存容器的密封性和温度稳定性，确保猪精液的保存环境符合要求。
4. 合理标注：在进行猪精液的低温保存时，需要在保存容器上标注清晰的标识，包括保存日期、猪种和精液来源等信息，便于管理和使用。
实验室常用猪精液的低温保存方法
实验室常用猪精液的低温保存方法实验室中常常需要使用猪精液进行一系列实验和研究，但是猪精液的保存非常关键。
低温保存是一种常用的方法，可以有效地延长猪精液的保存时间，保持其活力和质量。
本文将介绍实验室常用的猪精液低温保存方法，希望能对实验室工作人员有所帮助。
一、低温保存的原理猪精液在常温下易受到氧化、蛋白质降解、细菌感染等影响，导致精子质量下降，活力减弱。
而低温保存的原理主要是降低猪精液内部的化学反应速率，减缓精子的新陈代谢，从而延长其保存时间。
一般来说，对猪精液进行低温保存可分为冷冻保存和冷藏保存两种方法。
二、冷冻保存方法1. 猪精液的采集猪精液采集是冷冻保存的第一步，要在成熟健康的猪只进行采集。
采集前应先对猪进行清洁，确保采集的猪精液是干净的。
通常采集后的精液应在30分钟内使用，如不能马上使用则应迅速进行冷藏，避免影响后续的保存效果。
2. 筛选和稀释将采集到的猪精液进行筛选和稀释，可以通过离心或者过滤手段进行筛选，去除其中的不活跃精子和其他杂质。
稀释的目的是使猪精液的密度均匀，便于后续的保存和使用。
3. 冷冻冷冻保存是最常见的猪精液保存方法之一，一般是将稀释后的猪精液置于-196℃的液氮罐中进行冷冻保存。
在进行冷冻前，要将猪精液分装入冷冻管或其他容器中，避免因为一次性取用而导致冷冻-解冻多次，影响猪精液的活力。
4. 解冻和使用需要使用时，将冷冻的猪精液快速解冻，不要使其在室温下解冻，以免影响猪精液的质量。
解冻后的猪精液应在4-8℃的温度下保存，尽快使用，避免长时间存放造成精子活力的下降。
除了冷冻保存外，冷藏保存也是一种常用的猪精液保存方法。
相比于冷冻保存，冷藏保存更加简便，并且对设备要求不高。
一般采用4-8℃的冷藏温度进行保存。
采集和筛选步骤与冷冻保存相同，在采集后务必迅速进行冷藏，避免影响后续的保存效果。
稀释后的猪精液可以直接置于4-8℃的冰箱中进行保存，无需进行冷冻。
在保存时要注意避免温度的波动，尽量将猪精液置于冰盒或者恒温箱中进行保存。
实验室常用猪精液的低温保存方法
实验室常用猪精液的低温保存方法【摘要】实验室常用猪精液的低温保存方法对于保障猪种质资源的保存和利用至关重要。
本文首先介绍了猪精液的重要性及保存方法的必要性。
在正文部分分别详细介绍了液氮、干冰和冷冻等常见的低温保存方法，包括保存步骤和注意事项。
还总结了低温保存猪精液的优点，如有效延长精液的保存时间和保持精液的生物活性等。
结论部分强调了猪精液低温保存方法的重要性，指出其对猪种质资源的长期保存和利用具有不可替代的作用。
同时展望了未来研究方向，希望通过技术创新和方法改进，进一步提高猪精液保存的效率和质量，为猪业发展提供更好的支持。
【关键词】实验室猪精液、低温保存方法、液氮保存、干冰保存、冷冻保存、注意事项、优点、重要性、发展方向。
1. 引言1.1 介绍实验室常用猪精液的重要性及保存方法在现代猪生产实验室中，猪精液是一种非常重要的生物材料，它包含着猪的遗传信息，可以通过人工授精的方式传递至下一代猪种。
有效地保存猪精液对于提高猪种质量和数量是至关重要的。
在实验室中，常见的猪精液保存方法有液氮保存、干冰保存和冷冻保存等。
这些方法能够有效延长猪精液的保存时间，保持其质量和活力。
液氮保存猪精液的步骤包括快速冷冻、贮存在液氮罐中等；干冰保存则需将猪精液置于干冰盒中，快速冷冻保存；冷冻保存则需将猪精液置于冷冻离心管中，通过冷冻保存。
在进行低温保存猪精液时，需注意避免冷冻过程中产生的结晶破坏猪精液细胞膜的情况，以及避免冷冻过程中的温度变化对猪精液造成的不利影响。
通过低温保存猪精液能够有效延长其保存时间，保持其质量和活力，为猪生产实验室的科研工作提供了重要支持。
未来，随着科技的发展，猪精液保存技术也将不断提升，为猪生产和繁育工作带来更多便利和效益。
2. 正文2.1 常见的猪精液低温保存方法常见的猪精液低温保存方法主要包括液氮保存、干冰保存和冷冻保存三种方式。
液氮保存是目前应用较广泛的方法，通过将猪精液置于液氮罐中进行保存，可以长期保持其生物活性。
鱼类精子超低温冷冻保存简易方法[发明专利]
![鱼类精子超低温冷冻保存简易方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9d72a33fd15abe23492f4ddc.png)
专利名称：鱼类精子超低温冷冻保存简易方法专利类型：发明专利
发明人：柳凌,张洁明,危起伟,郭峰,朱永久
申请号：CN200710051591.5
申请日：20070215
公开号：CN101088511A
公开日：
20071219
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：鱼类精子超低温冷冻保存简易方法，它是将鱼类精子取出后，将精子与稀释液按1∶1～5的比例稀释放入4℃冰箱内平衡20－30分钟，再加入一定浓度的抗冻剂，然后用0.5毫升麦细管分装后，放入泡沫箱内液氮面上厚2.5～3厘米，宽10厘米沫板上，20分钟后，将泡沫板上的麦细管滑入液氮中，5分钟后再将所有的麦细管转入温度为－196℃的液氮罐中内冷冻保存。
本发明能在离实验室很远的野外条件下，以及没有程序降温仪或计算机控制程序降温仪的情况下，实现对鱼类精子快速、简便、超低温冷冻保存，其操作简便易行，冷冻效果好，成本低。
申请人：中国水产科学研究院长江水产研究所
地址：434000 湖北省荆州市沙市区江汉北路41号
国籍：CN
代理机构：荆州市技经专利事务所
代理人：王春玲
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精液冷冻储藏技术掌握精液收集处理和储存的方法
精液冷冻储藏技术掌握精液收集处理和储存的方法精液冷冻储藏技术是一项重要的生物技术，它可以帮助人们保存和储存精液。
无论是用于人类繁殖技术还是动物繁殖技术，精液冷冻储藏技术都发挥着重要的作用。
本文将介绍精液收集、处理和储存的方法。
一、精液收集方法精液的收集是精液冷冻储藏的第一步，它要求采用合适的方法来保证收集到高质量的精液样本。
1. 人类精液收集方法:人类精液的收集通常采用自慰法。
收集器宜选用干净的容器，确保不会对精液样本产生污染。
在收集的过程中，应保持良好的心态和放松的状态。
2. 动物精液收集方法：动物的精液收集可采用人工授精法、人工阴道法等多种方法。
具体方法需要根据不同动物的特点来确定。
二、精液处理方法精液的处理是为了去除其中的杂质，提高精液的质量。
1. 离心法：通过离心分离法，可以将精液中的不碳水化合物、细胞和其他杂质去除，提高精液的纯度。
离心的速度和时间需要根据精液的浓度和特性来确定。
2. 过滤法：通过过滤器过滤精液，使其中的颗粒和污染物被过滤掉，确保精液的干净和纯度。
三、精液储存方法精液储存是精液冷冻储藏技术的最后一步，它是为了确保精液的长期保存和保存质量。
1. 液氮储存：液氮储存是当前最常用的精液储存方法之一。
将处理好的精液样本放入液氮罐中，保持温度在零下196摄氏度，确保精液的长期保存。
2. 冷冻储存：冷冻储存是另一种常用的精液储存方法。
将处理好的精液样本放入冷冻管中，通过快速冷冻和在低温下保存，确保精液的保存质量。
总结：精液冷冻储藏技术是一项重要的生物技术，它可以帮助人们保存和储存精液，无论是用于人类繁殖技术还是动物繁殖技术。
在进行精液冷冻储藏之前，需要准确掌握精液收集、处理和储存的方法。
精液冷冻储藏技术的正确应用将对人类和动物的繁殖事业产生积极的影响。
实验十五精液的冷冻保存
实验十五精液的冷冻保存一.实验特点实验类型：综合型实验实验类别：专业基础课计划学时：2学时每组人数：3～4人二、实验目的要求精子具有受温度变化直接影响本身活动力和代谢能力力的生物学特性。
利用这一特性，将精液特殊处理后，保存在超低温下，精子代谢活动完全受到抑制，停止能量消耗，处于生命静止状态，长期保存下来。
一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。
要求同学们了解精液冷冻保存的技术操作过程和精液冷冻保存原理，初步学会冷冻保存方法。
三．实验原理冰晶化是水在降温过程中的一定温度下，水分子重新按几何图形排列形成冰晶。
冰晶可造成精细胞（精子）内外的溶质浓度和渗透压增高，引起细胞内脱水、原生质变干、酸碱失去平衡、细胞膜和顶体以及整个组织和结构破坏等致死性伤害，最后导致精子发生不可逆的变化而死亡。
一般精液内含85%～95%的水分，精子内也含有及少量的水分，这些水分在降温过程中在-0.6～-60℃温度区内缓慢降温能形成冰晶。
降温速率越慢，所形成的冰晶越大，其中特别以-15～-25℃时冰晶形成最多。
在冷冻精液过程中只有避开这个有害温度区，才能得以长期保存。
快速升降温度的办法，难以达到完全玻璃化冻结条件。
为此，在制作冷冻精液的稀释液内，要加入一定量的甘油等抗冻害物质。
甘油具有极强的亲水性，可限制水分子形成冰晶而处于过冷状态，降低水形成冰晶的温度，即缩小精子的有害温度的上限。
此外甘油容易渗透精子内，可降低渗透压改变的不良影响及营养作用等，增强精子的抗冻害能力和无冻害生存环境。
精液在冷冻过程中不可避免地要形成冰晶，精子能否生存的关键在于冰晶的大小，冰晶越大对精液伤害越大，反之冰晶越小，伤害越小甚至无损伤。
因此，只要避免大冰晶形成，并使精子稳定在微晶的状态下，一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。
四．实验材料和仪器精液、2.9%的柠檬酸钠溶液、50～100ml烧杯、滴管、10 ml试管、低温温度计、20～80目纱网、漏勺、灭菌纱布袋、液氮罐、液氮、载玻片、盖玻片、显微镜、保温箱。
精液的冷冻保存课件(共21张PPT)《畜禽繁殖与改良》
小结
精液冷冻保存的意义
精液的冷冻保存
精液冷冻保存原理精液冷冻技术Fra bibliotek液态→固态
结晶态：缓慢降温形成。水分子有序形成 冰晶对精子有害：机械和渗透压损伤。
（0～-60℃ ）（ -15～-25℃）
玻璃态：快速降温形成。水分子无序形成 玻璃样的超微粒结晶，对精子无害
（ -60～-250 ℃ ）
• 玻璃化是可逆的，不稳定的，当缓慢升温时又可能形成冰晶化。
3精液冷冻技术
8
三、精液冷冻技术
2精液冷冻保存的原理
5
二、精液冷冻保存的原理
利用超低温使精液和精子快速冷冻，快速越 过形成冰晶的温度范围（0～-60 ℃）、精液或 精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。同 时在抗冻剂的存在下使精子免受冻伤，在温度上 升至体温精液解冻后精子能够保持完整的形态结 构、功能和受精能力。
二、精液冷冻保存的原理
0.08亿÷0.25mL=0.32亿/mL 细管冻精精子密度为：
0.32亿/mL÷0.35亿/mL=0.914亿/mL 稀释倍数为：
13.8亿/mL÷0.914亿/mL≈15(倍)
三、精液冷冻技术
➢ 精液稀释 • 稀释液的配制
三、精液冷冻技术
精液稀释
两次稀释法：缩短甘油与精子接触的时间，甘油添加量5%-7%
三、精液冷冻技术
精液分装
0.25mm细管冻精
精液分装机
三、精液冷冻技术
冷冻精液
三、精液冷冻技术
冷冻精液
三、精液冷冻技术
活率检查
冻精解冻
细管型：直接将其投入到38-40℃的温水中，待冻精融化到一半时，立即取出备用。
三、精液冷冻技术
保存精液
实验室常用猪精液的低温保存方法
实验室常用猪精液的低温保存方法猪精液是猪生殖系统中的一种重要生殖细胞，它包含了猪的遗传信息，对于繁殖和遗传改良具有至关重要的作用。
在实验室研究和生产实践中，科研人员需要对猪精液进行保存和储存，以便在需要时使用。
而猪精液的保存方式有很多种，其中低温保存方法是比较常用的一种，下面就介绍一下实验室常用猪精液的低温保存方法。
一、液氮保存液氮保存是目前最为常用的一种猪精液低温保存方法。
液氮保存是指将猪精液储存于低温的液氮罐中，利用液氮的极低温度（-196摄氏度）将猪精液冷冻保存起来。
这种保存方法不仅可以长时间保存猪精液，而且保存后的猪精液质量稳定，保存时间长，一般可以保存5-10年之久。
而且在液氮保存的过程中，由于猪精液是在液氮中迅速冷冻，几乎不会出现冻结伤害的情况，因此保存后的猪精液质量保持得比较好。
二、冷冻保存冷冻干燥保存是一种相对比较新的猪精液低温保存方法。
这种方法是将猪精液在冷冻的条件下干燥，形成干燥的猪精液粉末，然后通过低温保存的方式来保存猪精液。
这种方法可以有效地避免冷冻过程中对猪精液造成的伤害，同时由于是将猪精液变成了粉末，保存更加方便。
而且在保存时间上也比冷冻保存长一些，一般可以保存3-5年左右。
但是由于冷冻干燥保存的技术要求相对较高，因此在实验室中使用的相对较少。
无论是哪种保存方法，都需要注意一些常规的保存注意事项。
比如在保存之前，需要先对猪精液进行筛查和检测，确保猪精液的质量是符合保存要求的。
另外在保存的过程中，需要做好保存记录并进行定期的检查和维护。
只有在保存过程中做到这些细节，才能够确保猪精液的质量，在需要的时候可以顺利地使用。
猪精液的低温保存对于实验室研究和生产实践中的繁殖和遗传改良具有非常重要的作用。
而在实验室中，科研人员常用的猪精液低温保存方法主要有液氮保存、冷冻保存和冷冻干燥保存。
每种保存方法都有其特点和适用范围，实验室需要根据具体的情况选择合适的保存方法。
并且在保存过程中需要格外注意保存的细节，确保猪精液的质量和保存的有效性。
精子的简易保存方法
精子的简易保存方法
精子的保存方法可以分为两种：长期保存和短期保存。
短期保存方法：
1. 使用特制的精子保存液：在实验室或生育技术中心，精子可以使用特制的精子保存液进行短期保存，如液氮冷冻保存液。
2. 阴囊内保存：男性可以将精液保存在阴囊内，阴囊的温度比体温低一些，有助于延缓精子的新陈代谢，但此方法只适用于短期保存，不能超过数小时。
长期保存方法：
1. 冷冻保存：精子可以被冷冻并存放在液氮罐中，通常使用特殊的冷冻保存液保护精子的质量。
这种方法能够长期保存精子，但需要專業的冷凍保存设备和技术。
2. 冷冻干燥保存：精子可以冷冻干燥并封装在密封容器中，以在较长时间内保持稳定。
这种方法也需要专业的设备和技术。
无论使用哪种方法，精子保存前需要经过初步的处理，如去除其他液体和不健康的精子，以保持保存的精子的质量和活力。
精子保存的有效期根据保存方法的不同可以从数小时到数十年不等，建议咨询专业的医生或生殖技术专家获得更详细的指导。
人类精子的保存方法
人类精子的保存方法
人类精子的保存方法有多种，其中包括以下几种常见的方法：
1. 冷冻保存：将精子收集后，经过处理和添加冷冻保护剂，然后进行冷冻保存。
一般保存温度为-196的液氮罐内，可以长期保存数十年甚至更久。
这种保存方法通常用于人工授精、体外受精等辅助生殖技术。
2. 冻干保存：将精子经过特殊处理，在低温下进行冻干，然后保存在低温环境下。
这种保存方法适用于需要长时间保存或运输的情况，可以在需要时重新激活精子。
3. 胚胎保存：对于辅助生殖技术中所需的受精卵，也可以先受精后培养发育成胚胎，然后进行低温保存。
一般保存温度为-196的液氮罐内，可以在需要时解冻并使用。
无论采用哪种保存方法，都需要严格控制温度和环境条件，以保证精子的保存质量。
此外，还应该遵守相关法律法规，进行合法保存和使用。
精液的冷冻保存word版本
Y为每ml原精液中呈直线前进运动总精子数 M为冷冻精液解冻后预测精子活力 Z为每头份冷冻精液要求最低应含有直线前进运动精子数 V为冷冻精液剂型容量
由于细管型冷冻精液的容量为0.25或0.5ml，因此稀释倍数较低。而颗粒型冷冻精液 前后需经两次稀释(冷冻稀释和解冻稀释)，每头份剂量为1.5～2.0ml，因此稀释倍数也 就较高。
精液的冷精液冷冻保存的方法，
要求学会： • 1、稀释液和解冻液的配制方法； • 2、精液的稀释、降温、平衡及制冻的技术； • 3、冷冻精液的解冻技术。
• 二、实验材料：公猪精液、公牛精液、新鲜牛奶、新
鲜鸡蛋、葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠（二水）、蒸馏 水、量筒、玻璃注射器、烧杯、三角烧瓶、滴管、冰壶、 保温杯或小液氮罐或泡沫盒、冰、液氮、0.25mL塑料吸管、 冷冻架、温度计、水盆、纱布、棉花，抹镜纸、75%精棉 球、镊子、捞筛、液氮罐、载玻片、小玻棒、石腊油、显 微镜、水浴锅、铝锅、电炉、标记笔等。
• 4、制冻
• （1）将保温杯或冰壶用小量液氮预冷2min，然后装入液 氮约7成满，并将制冻用的吊盆平稳地固定于离液氮面约 1～1.5cm处，加盖预冷2min。
• （2）揭开壶盖，用滴管吸取平衡过的稀释精液，迅速滴 在吊盆的凹槽内，每滴约lmL。滴完，加盖l～2min，然后 揭开壶盖，当精液完全冻结，并发出“喳喳”声时，即可 铲脱并倒入液氮内进行冷冻保存。
THANK YOU FOR YOUR
（2）解冻液的配制 用天秤分别称取葡萄糖1.5g、柠檬酸钠（二水）0.75g置于
干净的烧杯中，再加蒸馏水50mL，加盖隔水煮沸消毒10min， 取出冷却后，加入安那咖注射液1ml便成解冻液。
• 2、精液的稀释
一种冷冻保存动物精子的方法[发明专利]
![一种冷冻保存动物精子的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3aa1bdeea0c7aa00b52acfc789eb172dec639951.png)
专利名称：一种冷冻保存动物精子的方法
专利类型：发明专利
发明人：许红喜,卫喜明,宋伟红,甘文平,孙晓玉,张洪涛,韩志强
申请号：CN201910992558.5
申请日：20160629
公开号：CN110742058B
公开日：
20220201
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种冷冻保存动物精子的方法，包括以下步骤：（1）将采集到的动物精液放入保温瓶内，温度保持在20‑35℃；（2）用动物精子稀释液按精子数300‑1000万/mL稀释，灌装并封口，得到细管精液；（3）以0.1‑0.5℃/min的速度降温至0‑4℃；（4）静置1h‑2h；（5）将细管精液放在液氮上方，距离液氮面高度1.0cm‑2.0cm，温度为零下100℃‑120℃，熏蒸5min‑15min，直接投到液氮里，得到细管冻精，在液氮里把细管冻精装到纱布袋里备用。
本发明解决了传统方法在保存动物精子时，观察视野不清晰、易污染、存活时间短和不规范使用抗生素以致超级细菌产生的问题。
申请人：许红喜
地址：150000 黑龙江省哈尔滨市木材东街瑞城小区A6栋1单元205室
国籍：CN
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小鼠精子冻存方法及步骤
小鼠精子冻存方法及步骤随着近年来CRISPR/Cas9的火热及强大的基因编辑功能，科学家们利用基因编辑技术在大小鼠上面的运用也越来越多。
在最近2个月，我们也一直在学习基因编辑鼠的构建，相信大家也了解到如果顺利构建一只基因敲除鼠也需要4-6个月，可见操作的繁琐和周期的冗长。
那么如何简单快捷地将这些基因型小鼠长期保存呢？不着急，下面就跟着小编一起来学学如何保种。
基因种质资源的保存主要采取冷冻的方式，可以冷冻精子、胚胎、附睾、卵巢等，目前冷冻精子和胚胎比较常见。
其中，冷冻保存大小鼠的精子和胚胎与单纯饲养活体动物保存种质资源相比，可以大大降低饲养动物所占用的经费、时间和空间，同时可避免饲养过程中基因的丢失。
C57BL／6J小鼠为近交系小鼠，具有遗传信息稳定等特点，近年来，基因工程小鼠多以C57BL／6J 小鼠为遗传背景。
现以小鼠为例介绍下C57BL／6J小鼠的精子冻存和胚胎冻存。
小鼠精子冻存主要步骤：脱颈椎处死10-12w雄鼠，无菌取出其附睾；将附睾放入1ml小鼠精子冻存液中，剪碎附睾，使精子充分游离出来。
游离的精子示意图取出脉管，将含有精子的冻存液吸入脉管，封闭脉管两端，贴上标示有基因型的标签；将脉管放在液氮蒸汽中预冷冻10min后投入液氮，可长期保存精子。
小鼠胚胎冻存主要步骤取4-5w雌鼠，下午1-2点腹腔注射5.0 IU（国际单位）的PMSG （孕马血清促性腺激素），48h后注射5.0 IU的HCG（人绒毛膜促性腺激素）。
将注射过HCG的雌鼠和10-12w雄鼠合笼；次日早晨，检查雌鼠是否有阴栓，处死有阴栓的雌鼠，取输卵管，用DPBS清洗血渍；将输卵管放入透明质酸酶中，挑出输卵管膨大处的“云雾团”，几分钟后“云雾团”脱掉颗粒细胞，将胚胎挑出，用M2培养液清洗干净，放入KSOM培养液培养待用；下午3点之后，在倒置显微镜下将显现有原核的胚胎挑出，用于冻存；将20个胚胎放入低浓度冻存液中脱水3min，然后将胚胎放入高浓度冻存液中脱水1min；然后将胚胎连同高浓度冻存液吸入脉管，封闭两端，把脉管放于液氮蒸汽中预冷冻1min后，投入液氮，可长期保存胚胎。
精子冷冻贮存
精子冷冻贮存6.1 引言精子冷冻保存是男科实验室工作中的一个重要组成部分，特别对不孕不育门诊的男科实验室来说。
从19世纪40年代末起，人类就开始研究精子低温生物学。
发现甘油能保护精子免受冷冻损伤，可以将人类精子冷藏在–79℃的干冰上(Polge et al., 1949; Bunge &herman, 1953; Bunge et al., 1954)。
随着液氮广泛应用，人类精子冷冻贮存技术取得快速发展，在许多国家建立起商业用途的精子库和国际间合作服务项目(Perloff et al., 1964; David et al., 1980; Clarke et al., 1997; Leibo et al., 2002)。
由于采用不同的冷冻保护剂和不同冷冻程序，出现许多冷冻贮存实验设计方案。
冻融后细胞存活率主要取决于细胞内冰晶形成量能降低至何种程度，通过选择恰当的冷冻保护剂和采用最适冷冻速率和复融速率来减少细胞内水形成冰晶提高细胞的存活率(Sherman, 1990; Keel & Webster, 1993; Watson, 1995)。
特别在复融过程中，当精子处于–130℃（玻璃化转化状态的关键温度）以上时间太长，细胞内有害的冰晶增多发生重结晶。
人类精子能够耐受一定范围内的冷冻和复融率。
它们对快速冷冻（冷体克）产生损伤不敏感，主要原因可能是精子细胞膜中脂质双分子层结构的不饱和脂肪酸增加细胞膜流动性。
而且因为细胞内水分含量少（约为50%），精子比其它细胞更能耐受低温导致损伤。
但是低温仍对精子功能仍产生不良影响，特别是对精子活力影响比较大。
一般而言，只有大约50%的活动精子能在冻存后复苏保持活力(Keel & Webster, 1993)。
优化精子冷冻保存方法减低对活动精子的损害从而提高妊娠率(Woodset al., 2004)。
影响供精人工授精的妊娠率的因素包括复融后精子质量、人工授精的时机，而最为关键的是受方因素如年龄，前次供精妊娠情况以及与排卵、子宫输卵管相关疾病(Le Lannou & Lansac, 1993)。
公牛精液的冷冻方法
公牛精液的冷冻方法稀释后的精液，采用逐渐降温法在1-1.5小时内，使稀释的精液温度降到4-5℃，然后在这个温度下静置平衡2-4小时。
细管冻精采用与细管配套的器具进行。
颗粒冻精采用氟板、铜纱网、尼龙网或铝板均可。
安瓿冻精采用净容量为0.5毫升的硅酸盐中性玻璃安瓿。
以上各种用具，在冻精时，精液容器与液氮面的距离一般保持1-1.5厘米，初冻温度零下80-零下120℃。
精液在冷冻前，应充分混匀，并检查精子活力。
细管精液不论是用聚乙醇、钢珠封口，还是超声波塑料热合，都必须将瓶口封严。
颗粒精液，每毫升稀释精液滴冻10plusmn;1粒，滴管应事先预冷，与平衡温度一致。
操作要准确，颗粒大小要均匀，每滴完一头公牛精液后，必须更换滴管、氟板等用具。
安瓿精液，用酒精喷灯火焰封口。
在制作冻精时，防止在操作过程中精液温度回升。
每冻完一批（头）精液，应立即放入液氮中浸泡，并计数、取样检查和包装。
采后的精液经检查合格后，要尽快稀释。
冷冻保存稀释液具有保护精于免受或减少冻害的作用。
配制冻精用的稀释保护剂，必须用新鲜的双重蒸馏水和卵黄，二级品以上的化学试剂。
所用器具必须保证清洁、无菌。
稀释比例，按采得精液的密度和活力确定，以保证解冻后每个输精剂量所含的直线前进的精子数不低于标准要求。
稀释保护荆应现配现用，或配后放入4-5℃冰箱中备用，但时间不应超过1周。
1．细管用稀释液保护剂。
配方为：第一液：蒸馏水100毫升，柠檬酸钠2.97克，卵黄10毫升。
第二液：取第一液41.75毫升，加入果糖2.5克，甘油7毫升。
或者使用：脱脂奶82毫升，卵黄10毫升，甘油8毫升。
2．颗粒用冻精稀释保护液。
配方为：12%蔗糖液75毫升，卵黄20毫升，甘油5毫升。
或者用：12%乳糖液75毫升，卵黄20毫升，甘油5毫升。
或者用：2.9%柠檬酸钠液73毫升，卵黄20毫升，甘油7毫升。
上述各类稀释保护剂，在每100毫升中应加青霉素、链霉素各5-10万国际单位。