党参多糖研究概况-张雪梅

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第17卷 第12期 2015 年 12 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 17 No. 12 Dec .，2015
党参为桔梗科植物党参Codonopisispilosula （Farneh.）Nan-nf，素花党参CodonoPsispilouslaNannf var.modesatN（annf）L.T.shen 或川党参（Codonopisis atngshenoliv.）的干燥根，其主要功效为补中益气、健
脾益肺。

主治脾肺虚弱、气短心悸、内热消渴等症[1]。

现代药理实验表明党参多糖是党参的主要成分之一，具有清除自由基[2]、调节机体免疫力[3]、抗衰老和
造血[4]
的功能，临床上广泛用于降血脂、降血糖、抗衰老等。

本文主要从党参多糖的提取分离、纯化、含量测定、结构分析以及药理活性方面作一系统的综述，为以后对党参多糖的进一步系统研究和开发打好基础。

1 党参多糖的提取分离纯化1.1 党参多糖的提取分离
1.1.1 提取方法
党参多糖常用的提取方法有碱水提取法和直接水提的方法，但碱水提取多糖的得率较直接水提
多糖得率少[5]
，所以一般用水提的方法。

1.1.2 分离方法
多糖的分离一般采用醇沉的方法进行分离，将上述浓缩的多糖溶液加入四倍量的乙醇溶液进行醇
沉，选择不同浓度的乙醇，以多糖的得率和活性为指标做单因素考察，得到所需的多糖[6]。

醇沉液需要在4 ℃放置过夜，然后减压抽滤或离心得到多糖沉淀，分别用95%乙醇、无水乙醇、石油醚反复洗涤，最后得到精制的党参多糖。

1.2 党参多糖的纯化分级
1.2.1 党参多糖的样品处理
（1）除蛋白：植物多糖脱蛋白常用的方法有Sevage 法、三氯乙酸沉淀法、蛋白酶水解法和三氟三
氯乙烷法[7]。

Sevage 法是除蛋白的经典方法，但是费时且样品损失较大；三氯乙酸沉淀法操作简单，但因其反应条件剧烈可能导致多糖的降解，影响多糖的活性；蛋白酶水解法专属性强，但是价格昂贵，导致成本较高；三氟三氯乙烷法效率高，但因其容易挥发，不宜大量使用。

综上，选择Sevage 法辅助酶
法来除蛋白[8]
效果较理想。

（2）脱色：植物多糖因含有酚类化合物等颜色较深，常用的脱色方法有离子交换法、吸附法、金属络合物法和氧化法。

目前应用较广的脱色剂是DEAE-纤维素。

通过离子交换柱不仅可以达到脱色的目的，还可以对多糖进行分级。

以分离出活性
党参多糖研究概况
张雪梅
（山东中医药大学，山东 济南 250011）
摘 要：
中药党参是临床上常用的治疗脾肺虚弱、气短心悸、内热消渴的药物。

而多糖类化合物是党参的主要成分之一，因此对多糖类化合物的深入研究将有利于进一步研究党参的药理活性及其应用。

通过对近年来国内外党参多糖的研究文献进行整理，该文对党参多糖的提取分离、纯化、含量测定、结构分析及药理学研究作一综述，为进一步开发利用党参多糖提供依据。

关键词：党参多糖；提取分离纯化；含量测定；结构分析；药理研究
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 12- 0085- 03
收稿日期：2015-04-12
基金项目：山东省中医药科技发展计划项目（2013-227）作者简介：张雪梅（1989-），女，山东滨州人，2013级硕士研究生，研究方向：药物新剂型与新技术。

通讯作者：张学顺（1963-），男，山东济南人，主任药师，博士，研究方向：药物新剂型与新技术。

Research Advance of Codonopsis Pilosula Polysaccharide
ZHANG Xuemei
（Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Ji'nan 250011，Shandong，China）
Abstract：Codonopsis pilosula is the Chinese traditional medicine which is commonly used in
clinical treatment of spleen and lung weaknees，shortness of breath，palpitations，internal heat diabetes.Research on Codonopsis pilosula polysaccharide which is one of the main effective component in Codonosis pilosula is good application of the chemical constituents and pharmacy activity of Codonopsis pilosula.Through the study of Codonopsis pilosula polysaccharide in recent years literature，this paper provides a comprehensive survey on research of polysaccharides from Codonopsis pilosula，introduces extraction and separation，purification，content determination，structure analysis and pharmacological research.
Key words：Codonopsis pilosula polysaccharide；extraction separation and purification；content determination；structure analysis；pharmacological research DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.12.027
辽宁中医药大学学报17卷
较高的组分[9]。

（3）透析处理：将浓缩后的党参多糖洗脱液灌入透析袋中，再用封口夹密封透析袋另一端口，24 h 自来水循环透析，以除去多糖中的色素和洗脱后残留NaCl及其他的小分子物质。

（4）冷冻干燥：将透析后的多糖溶液旋蒸浓缩，将浓缩后的多糖溶液装入5 mL西林小瓶中，多糖液面不可超过西林瓶高的1/4，以防止真空冷冻干燥过程中多糖的逸出，放入-8 ℃冰箱中预冷冻16 h；再放入真空冷冻干燥机冷冻24 h，得到党参多糖的干燥样品。

1.2.2 党参多糖的分级
多糖的分级方法有多种，常用的有超速离心法、凝胶过滤法、高效凝胶色谱法、阴离子交换层析柱法以及近年来研究较多的超滤膜分析方法等。

以阴离子交换层析柱为例介绍，党参多糖多为中性多糖和酸性多糖，因为酸性多糖带负电荷，所以多糖的分级常用阴离子交换层析柱如DEAE-纤维素层析[10]，分别用蒸馏水、不同浓度的NaCl 水溶液洗脱多糖样品得到中性多糖和酸性多糖组分。

采用苯酚-硫酸法测定收集液中多糖含量的分布。

根据多糖分布情况收集洗脱峰，透析、浓缩、冷冻干燥，分别获得蒸馏水和NaCl水溶液洗脱组分[10]。

用凝胶过滤层析柱分析各组分的分子量分布，并进行进一步的分级处理。

应用凝胶过滤层析柱分别将酸性多糖的洗脱峰分离纯化，进一步的分级。

2 党参多糖的含量测定
植物多糖的含量测定方法有多种，硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、原子吸收法[11]、HPLC法、凝胶电泳法[12]等。

常用的多糖含量的测定方法为苯酚-硫酸法[13]。

采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，先用葡聚糖制作标准曲线后，再通过多糖显色反应测定吸光度，然后根据其在曲线上的位置推算出多糖的浓度从而推算其含量。

3 党参多糖的结构分析
党参多糖的结构分析包括分子量的测定和单糖组成的测定[14]。

多糖分子量的测定方法常用的有渗透压法、蒸气压渗透剂法、凝胶色谱法、HPLC法、分子筛色谱法、MALDI-TOF-MS法[15]。

以凝胶色谱法为例，测定多糖分子量。

采用Waters2695型高效液相色谱仪（自动进样器），示差折光检测器，Shodex OHPak SB-803HQ凝胶色谱柱，GPC色谱工作站。

供试分子量测定用右旋糖酐分子量标准对照品（中国药品生物制品检定所提供，D0、D1、D2、D3、D5、D6、D8、D2000分子量依次为180、2500、4600、7100、21400、41100、133800、2000000），取党参多糖适量，加流动相制成每毫升中约含10 mg 的溶液，振摇，室温放置过夜，作为供试品溶液。

取上述右旋糖酐系列对照品溶液分别进样，记录洗脱峰的保留时间，由GPC专用软件绘制标准曲线，以标准分子量的对数值为纵坐标，以相应色谱峰的保留时间为横坐标进行线性回归，得回归方程。

根据GPC专用软件绘制的标准曲线及供试品的保留时间采用GPC专用软件计算样品各组分的重均分子量
及其分子量分布。

党参多糖的HPLC分析单糖的组成，对照标准品溶液色谱图，各多糖的完全酸水解产物HPLC色谱图在葡萄糖标准品保留时间均出峰，说明党参多糖均由葡萄糖聚合而成[16]。

党参多糖的GC分析单糖的组成，根据单糖对照品和样品的色谱保留时间，将CPP水解产物的硅烷化衍生物的气相色谱图与混合单糖对照品的气相色谱图对照比较，可得出CPP的单糖组成为阿拉伯糖、核糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖[16]。

杨丰榕等[17]分离得到5种党参多糖，其中CPS-3由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成。

CPS-4分子量在200万以上，纯度用面积归一化法计算达到96.43%，由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成，均为新发现的党参多糖。

任丽靖等[18]得出经DEAE-纤维素柱色谱分离得到纯化的水洗党参多糖（CPPS1）不含蛋白质，且为均一多糖。

单糖组成为阿拉伯糖、核糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖。

红外光谱显示CPPS1具有典型的多糖吸收峰；原子力显微镜（AFM）分析表明CPPS1分子具有高度分枝结构，并且糖链间形成大小不等的环状结构。

4 党参多糖的药理学研究
党参为我国传统的中药，具有滋补肝肾、益精明目之功效，现代临床上广泛用于降血脂、降血糖、抗衰老等作用。

随着党参多糖的提取分离和纯化工艺的研究进展，其药理学研究方面的文献报道也有很多，主要包括调节机体免疫力的功能[19]，清除自由基和抗衰老的作用，对中枢神经系统的作用[20]和造血的功能等。

4.1调节机体免疫力的功能
党参能增加组织免疫器官的重量，对巨噬细胞的细胞数量、细胞体积、吞噬活性有明显的增强作用。

YANG GUANG等[21]分别用羊红细胞和卵清蛋白为抗原给小鼠注射，灌服党参多糖，然后检测相应抗体生成水平，结果显示党参多糖对正常小鼠抗体生成有增强作用。

胡祖光等用党参水煎液灌胃[22]、腹腔注射、肌肉注射或静脉注射，亦能使小鼠的巨噬细胞数量大大增加、体积增大、伪足增多、吞噬能力增强。

同时细胞内的DNA、RNA、糖类、ACP酶、ATP酶、酸性脂酶及琥珀酸脱氢酶的活性均有显著增强。

CAO LI等[23]探讨了党参多糖对正常脾淋巴细胞增殖的作用，发现有促进作用，还发现党参多糖对刀豆蛋白A刺激的淋巴细胞同样有明显的促进增殖作用，这种作用在一定浓度内与剂量成正比。

免疫过程中的抗体水平也是反应免疫调节作用的一个方面。

党参影响多向性转录调控的蛋白质分子NF-KB结合活性。

明党参多糖在不同剂量下给药，均可降低内毒素组（LPS）刺激引起的NF-KB结合活性。

进一步验证了明党参多糖的免疫调节作用[24]。

4.2清除自由基和抗衰老的作用
党参正丁醇部分、乙酸乙酯部分和多糖均有明显增强SOD对O2-自由基的清除作用，从而达到延缓衰老、抗辐射损伤的目的[25]。

许爱霞等[26]用Ｄ-半乳糖致衰老模型小鼠，用党参多糖灌胃8周，观察其对衰老模型小鼠器官及系统功能的影响，结果表
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明党参多糖能使衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏指数升高，血清和肝组织中MDA明显下降及SOD活力明显上升，脑组织中LF明显下降，肾组织中GSH-PX 活力及NOS活力明显升高。

表明党参多糖有抗衰老作用，其机制可能与增强机体免疫功能、清除自由基及抗脂质过氧化有关。

李贵荣等和熊元君等采用不同的反应体系分别测定并证明了党参多糖和新疆党参多糖对超氧阴离子自由基的清除作用，后者还发现新疆党参多糖在体内可以增加SOD活性，进一步说明了新疆党参多糖的清除超氧阴离子自由基的作用[27-28]。

党参可直接促进和机体糖异生有关的生化过程，并间接促进机体抗寒能力。

20%党参水煎液浸泡桑叶后喂蚕，可使蚕的卵虫期及全虫生长期明显延长，并且体重增加。

故认为有党参抗衰老作用。

4.3对中枢神经系统的作用
党参水溶部分与正丁醇部分能与小剂量的中枢抑制剂产生协同作用，但对大剂量抑制剂则产生拮抗作用，呈现双向调节作用，党参多糖和甾类、三萜成分是产生中枢抑制作用的主要有效成分或部位[29-31]。

党参总碱能改善东食若碱（soop）引起的记忆障碍，并能对抗scop所致小鼠脑内乙酞胆碱浓度下降及胆碱乙酞化酶活性的降低[32]。

党参多糖对淋巴细胞膜相cR活性有增强作用。

刘景田等[33]观察党参等中药多糖增强淋巴细胞免疫效应及其机制。

将党参多糖作用于30例恶性肿瘤患者的淋巴细胞，党参多糖对淋巴细胞膜相醛糖还原酶（CR）活性有增强作用，其增强机制与淋巴细胞膜相分化抗原簇CD35的活性有关。

4.4对造血功能的影响
张晓君等研究了党参多糖对溶血性血虚小鼠血红蛋白含量、辐射损伤小鼠内源性脾结节、骨髓有核细胞DNA合成的影响，结果发现党参多糖4倍量给药有升高外周血血红蛋白，缓解贫血症状的作用，8倍量给药能显著增加内源性脾结节数，但不能显著提高3H-TRd掺人骨髓细胞DNA率，提示党参多糖对脾脏代偿造血功能有促进作用，对骨髓造血功能无明显增强作用。

5 展望
目前对党参多糖的研究主要集中在总多糖的含量测定和其药理作用上，对于党参多糖的化学结构和作用机制还有待于进一步的研究。

另外，在研究中还存在以下问题：多糖的纯化和分级需要有更加适当的方法，得到纯化均一的组分，有利于以后的研究；多糖的结构分析还需借助更加先进的技术，以确定其分子结构；党参多糖在临床上的应用和作用机制还需进一步的实验验证。

我们还需借助化学、分子生物学技术等先进技术使党参多糖从一般的药理学研究进入临床研究，为其他植物多糖的研究奠定基础。

◆
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