党参多糖研究概况-张雪梅

85第17卷 第12期 2015 年 12 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 17 No. 12 Dec .，2015党参为桔梗科植物党参Codonopisispilosula （Farneh.）Nan-nf，素花党参CodonoPsispilouslaNannf var.modesatN（annf）L.T.shen 或川党参（Codonopisis atngshenoliv.）的干燥根，其主要功效为补中益气、健脾益肺。

主治脾肺虚弱、气短心悸、内热消渴等症[1]。

现代药理实验表明党参多糖是党参的主要成分之一，具有清除自由基[2]、调节机体免疫力[3]、抗衰老和造血[4]的功能，临床上广泛用于降血脂、降血糖、抗衰老等。

本文主要从党参多糖的提取分离、纯化、含量测定、结构分析以及药理活性方面作一系统的综述，为以后对党参多糖的进一步系统研究和开发打好基础。

1 党参多糖的提取分离纯化1.1 党参多糖的提取分离1.1.1 提取方法党参多糖常用的提取方法有碱水提取法和直接水提的方法，但碱水提取多糖的得率较直接水提多糖得率少[5]，所以一般用水提的方法。

1.1.2 分离方法多糖的分离一般采用醇沉的方法进行分离，将上述浓缩的多糖溶液加入四倍量的乙醇溶液进行醇沉，选择不同浓度的乙醇，以多糖的得率和活性为指标做单因素考察，得到所需的多糖[6]。

醇沉液需要在4 ℃放置过夜，然后减压抽滤或离心得到多糖沉淀，分别用95%乙醇、无水乙醇、石油醚反复洗涤，最后得到精制的党参多糖。

1.2 党参多糖的纯化分级1.2.1 党参多糖的样品处理（1）除蛋白：植物多糖脱蛋白常用的方法有Sevage 法、三氯乙酸沉淀法、蛋白酶水解法和三氟三氯乙烷法[7]。

Sevage 法是除蛋白的经典方法，但是费时且样品损失较大；三氯乙酸沉淀法操作简单，但因其反应条件剧烈可能导致多糖的降解，影响多糖的活性；蛋白酶水解法专属性强，但是价格昂贵，导致成本较高；三氟三氯乙烷法效率高，但因其容易挥发，不宜大量使用。

综上，选择Sevage 法辅助酶法来除蛋白[8]效果较理想。

（2）脱色：植物多糖因含有酚类化合物等颜色较深，常用的脱色方法有离子交换法、吸附法、金属络合物法和氧化法。

目前应用较广的脱色剂是DEAE-纤维素。

通过离子交换柱不仅可以达到脱色的目的，还可以对多糖进行分级。

以分离出活性党参多糖研究概况张雪梅（山东中医药大学，山东 济南 250011）摘 要：中药党参是临床上常用的治疗脾肺虚弱、气短心悸、内热消渴的药物。

而多糖类化合物是党参的主要成分之一，因此对多糖类化合物的深入研究将有利于进一步研究党参的药理活性及其应用。

通过对近年来国内外党参多糖的研究文献进行整理，该文对党参多糖的提取分离、纯化、含量测定、结构分析及药理学研究作一综述，为进一步开发利用党参多糖提供依据。

关键词：党参多糖；提取分离纯化；含量测定；结构分析；药理研究中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 12- 0085- 03收稿日期：2015-04-12基金项目：山东省中医药科技发展计划项目（2013-227）作者简介：张雪梅（1989-），女，山东滨州人，2013级硕士研究生，研究方向：药物新剂型与新技术。

通讯作者：张学顺（1963-），男，山东济南人，主任药师，博士，研究方向：药物新剂型与新技术。

Research Advance of Codonopsis Pilosula PolysaccharideZHANG Xuemei（Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Ji'nan 250011，Shandong，China）Abstract：Codonopsis pilosula is the Chinese traditional medicine which is commonly used inclinical treatment of spleen and lung weaknees，shortness of breath，palpitations，internal heat diabetes.Research on Codonopsis pilosula polysaccharide which is one of the main effective component in Codonosis pilosula is good application of the chemical constituents and pharmacy activity of Codonopsis pilosula.Through the study of Codonopsis pilosula polysaccharide in recent years literature，this paper provides a comprehensive survey on research of polysaccharides from Codonopsis pilosula，introduces extraction and separation，purification，content determination，structure analysis and pharmacological research.Key words：Codonopsis pilosula polysaccharide；extraction separation and purification；content determination；structure analysis；pharmacological research DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.12.027辽宁中医药大学学报17卷较高的组分[9]。

（3）透析处理：将浓缩后的党参多糖洗脱液灌入透析袋中，再用封口夹密封透析袋另一端口，24 h 自来水循环透析，以除去多糖中的色素和洗脱后残留NaCl及其他的小分子物质。

（4）冷冻干燥：将透析后的多糖溶液旋蒸浓缩，将浓缩后的多糖溶液装入5 mL西林小瓶中，多糖液面不可超过西林瓶高的1/4，以防止真空冷冻干燥过程中多糖的逸出，放入-8 ℃冰箱中预冷冻16 h；再放入真空冷冻干燥机冷冻24 h，得到党参多糖的干燥样品。

1.2.2 党参多糖的分级多糖的分级方法有多种，常用的有超速离心法、凝胶过滤法、高效凝胶色谱法、阴离子交换层析柱法以及近年来研究较多的超滤膜分析方法等。

以阴离子交换层析柱为例介绍，党参多糖多为中性多糖和酸性多糖，因为酸性多糖带负电荷，所以多糖的分级常用阴离子交换层析柱如DEAE-纤维素层析[10]，分别用蒸馏水、不同浓度的NaCl 水溶液洗脱多糖样品得到中性多糖和酸性多糖组分。

采用苯酚-硫酸法测定收集液中多糖含量的分布。

根据多糖分布情况收集洗脱峰，透析、浓缩、冷冻干燥，分别获得蒸馏水和NaCl水溶液洗脱组分[10]。

用凝胶过滤层析柱分析各组分的分子量分布，并进行进一步的分级处理。

应用凝胶过滤层析柱分别将酸性多糖的洗脱峰分离纯化，进一步的分级。

2 党参多糖的含量测定植物多糖的含量测定方法有多种，硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、原子吸收法[11]、HPLC法、凝胶电泳法[12]等。

常用的多糖含量的测定方法为苯酚-硫酸法[13]。

采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，先用葡聚糖制作标准曲线后，再通过多糖显色反应测定吸光度，然后根据其在曲线上的位置推算出多糖的浓度从而推算其含量。

3 党参多糖的结构分析党参多糖的结构分析包括分子量的测定和单糖组成的测定[14]。

多糖分子量的测定方法常用的有渗透压法、蒸气压渗透剂法、凝胶色谱法、HPLC法、分子筛色谱法、MALDI-TOF-MS法[15]。

以凝胶色谱法为例，测定多糖分子量。

采用Waters2695型高效液相色谱仪（自动进样器），示差折光检测器，Shodex OHPak SB-803HQ凝胶色谱柱，GPC色谱工作站。

供试分子量测定用右旋糖酐分子量标准对照品（中国药品生物制品检定所提供，D0、D1、D2、D3、D5、D6、D8、D2000分子量依次为180、2500、4600、7100、21400、41100、133800、2000000），取党参多糖适量，加流动相制成每毫升中约含10 mg 的溶液，振摇，室温放置过夜，作为供试品溶液。

取上述右旋糖酐系列对照品溶液分别进样，记录洗脱峰的保留时间，由GPC专用软件绘制标准曲线，以标准分子量的对数值为纵坐标，以相应色谱峰的保留时间为横坐标进行线性回归，得回归方程。

根据GPC专用软件绘制的标准曲线及供试品的保留时间采用GPC专用软件计算样品各组分的重均分子量及其分子量分布。

党参多糖的HPLC分析单糖的组成，对照标准品溶液色谱图，各多糖的完全酸水解产物HPLC色谱图在葡萄糖标准品保留时间均出峰，说明党参多糖均由葡萄糖聚合而成[16]。

党参多糖的GC分析单糖的组成，根据单糖对照品和样品的色谱保留时间，将CPP水解产物的硅烷化衍生物的气相色谱图与混合单糖对照品的气相色谱图对照比较，可得出CPP的单糖组成为阿拉伯糖、核糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖[16]。

杨丰榕等[17]分离得到5种党参多糖，其中CPS-3由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成。

CPS-4分子量在200万以上，纯度用面积归一化法计算达到96.43%，由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成，均为新发现的党参多糖。

任丽靖等[18]得出经DEAE-纤维素柱色谱分离得到纯化的水洗党参多糖（CPPS1）不含蛋白质，且为均一多糖。

单糖组成为阿拉伯糖、核糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖。

红外光谱显示CPPS1具有典型的多糖吸收峰；原子力显微镜（AFM）分析表明CPPS1分子具有高度分枝结构，并且糖链间形成大小不等的环状结构。

4 党参多糖的药理学研究党参为我国传统的中药，具有滋补肝肾、益精明目之功效，现代临床上广泛用于降血脂、降血糖、抗衰老等作用。

随着党参多糖的提取分离和纯化工艺的研究进展，其药理学研究方面的文献报道也有很多，主要包括调节机体免疫力的功能[19]，清除自由基和抗衰老的作用，对中枢神经系统的作用[20]和造血的功能等。

4.1调节机体免疫力的功能党参能增加组织免疫器官的重量，对巨噬细胞的细胞数量、细胞体积、吞噬活性有明显的增强作用。

YANG GUANG等[21]分别用羊红细胞和卵清蛋白为抗原给小鼠注射，灌服党参多糖，然后检测相应抗体生成水平，结果显示党参多糖对正常小鼠抗体生成有增强作用。