交叉配血的方式与选择

PEG-IAT
原理：PEG是一种水溶性的中性多聚体，当含
有抗原与相应抗体的溶液中加入PEG时，由于空 间排斥效应作用，使溶液中的抗体饱和度提高， 加速溶液中的抗原-抗体复合物的形成。
程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加4滴PEG
溶液后混匀，37℃孵育15分钟，生理盐水洗涤3 遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂， 离心后判读结果。
凝胶试验应用于血型血清学
血型实验室中的一次革命 在全世界许多发达国家已被公认为是常规 免疫血液学实验的“金标准”。
凝胶试验应用于血型血清学
1990年，卡式检测法的发明人Dr. Yves Lapierre 等用低离子强度盐水法（试管法）、聚凝胺试验（试管 法）和卡式检测法（凝胶）研究了400例已知抗体的样本。 血清与细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为： •卡式检测法检出359例（检出率为90%） •低离子强度盐水法检出243例（检出率为61%） •聚凝胺试验检出301例（检出率为75%）
LISS-IAT
原理：通过降低红细胞周围的离子氛，使抗体易于接
近抗原，促进抗体在更短的时间内致敏红细胞，再使用 抗人球蛋白试剂，使被致敏的红细胞产生凝集
程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加2-4滴LISS液后
混匀，37℃孵育15分钟，离心观察细胞的凝集情况，用 生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋 白试剂，离心后判读结果。
Fyb, JKa, JKb, Kpa, Kpb, S, s, Lua, Lub
抗人球试验 - 检测 IgG（阳性与假 阴性）
REACTION MEDIA



22% albumin decreases zeta potential by buffering allows Ab-coated cells to come closer together Low Ionic Strength Solution (LISS) decreases zeta potential serum/cells very important; increase amount of serum with caution Polyethylene glycol (PEG) removes water, concentrating Ab use monospecific AHG with anti-IgG (else, false positives) do not read aggl. microscopically (false positives)
聚凝胺凝集法： 通过多聚季氨盐溶液提供大量正电荷来中 和红细胞表面负电荷，减少红细胞间的排斥， 促进红细胞凝集，其灵敏度有较大提高。此方 法目前在国内使用较多。（Rh,Duffy）
抗人球试验 - 检测 IgG
抗人球试验： 在盐水凝集法或低离 子强度盐水法的基础上， 加入抗人球蛋白抗体，通 过抗人球蛋白抗体的特异 性桥连作用，促进红细胞 的凝集。可分为直接和间 接抗人球试验。 K, k, Fya,
天然抗体：没有可察觉的抗原刺激，而机体对抗原免
疫应答的产物。天然抗体多为IgM抗体，能与含有相应 抗原的红细胞结合，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集 反应，所以也叫盐水抗体。IgM抗体的最适反应温度为 0-25℃。
免疫抗体：抗原刺激机体而产生的。免疫抗体多为IgG
抗体，在盐水介质中只能致敏含有相应抗原的红细胞， 但不产生凝集，需要采用抗球蛋白搭桥、酶处理细胞或 聚凝胺介导等方法，才能产生凝集反应。IgG抗体的最 适反应温度为37℃。
酶试验
原理：蛋白水解酶可将红细胞表面的多肽链打断，使多
肽链带负电荷的唾液酸也一起离开红细胞表面，减少了 红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，容易 产生凝集反应
程序：2滴血清、1滴2-5%红细胞，加入2滴酶，37℃孵
育15分钟，离心看结果。 注：酶会破坏一些抗原结构，如M、N、Fya、Fyb 等
影响输血效果的免疫血清学问题
速发型输血后溶血反应 血管内溶血 主要原因: ABO血型不和 迟发型输血后溶血反应 血管外溶血 主要原因: 针对红细胞抗原的同种抗体 血型抗原的同种免疫
红细胞抗原免疫强弱依次为Rh (D > c > E > C > e )、Kell、 Duffy、Kidd
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传统方法的局限性
微柱凝胶技术(卡)
原理：微管内有凝胶颗粒和试剂。凝胶
颗粒具有分子筛作用，离心后，不凝集的 红细胞通过全程进入微管底部，而凝集的 红细胞则悬浮停留在颗粒中。
程序：按厂家说明操作
抗人球蛋白试验(Coombs试验)
直接抗人球蛋白试验(DAT) 检测红细胞是否在体内被抗体或补体致敏,用于 检测自身免疫溶血性贫血、药物引起的溶血、 新生儿溶血病、溶血性输血反应 间接抗人球蛋白试验(IAT) 在体外抗体致敏红细胞,用于抗体筛选和鉴定、 交叉配血、血型鉴定
间接抗人球蛋白试验(IAT)
经典IAT LISS-IAT:试管法 卡 PEG-IAT 酶－IAT 聚凝胺－IAT
经典IAT
程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，
37℃孵育45-60分钟，生理盐水洗涤3遍 后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白 试剂，离心后判读结果。用抗体致敏的 红细胞检测试验结果的正确性。
交叉配血的方式与选择 骆群
交叉配血：确保输血配型相符的正确方法
有同种抗体的病人：- 进行间接抗人球试验 无同种抗体的病人：- 进行盐水试验 由于绝大多数储存血都作了成分处理，若只输入储 存红细胞，则不做次侧配血。
红细胞抗原
血型系统（Blood group systems）29 245 血型集合（ Blood group collections）6 12 血型系列（series）： 低频率系列（700 series，low-incidence antigens) 19 高频率系列 (901 serise,high-incidence antigens) 9
免疫血液学的传统方法
凝集实验和溶血实验 玻片法/试管法/微孔板法 抗人球实验（冲洗）
在抗原抗体反应中的去离子和低离子
盐水凝集法： 例如，ABO血型鉴定试验 包括玻片法、试管 法和微孔法
但灵敏度相对较低，只在 一些基层医院血库使用 低离子强度盐水法： 通过降低介质溶液离子强 度，减少红细胞膜外围的离 子云，促进红细胞凝集，因 而其灵敏度有所提高。
不利于标准化管理 重复性较差 要求操作者的经验丰富 难以实现自动化操作
凝胶凝集试验
凝胶凝集试验 - 原理 (1)
通过离心使红细胞被挤过装有过滤介质的小柱 凝集的红细胞被阻挡在小柱中过滤介质的顶部或 中央， 而未凝集的红细胞则到达小柱的底部 血型或AHG试剂被加入到过滤介质 由于红细胞和血清成分以不同的速度通过小柱 （重力加速度不同），从而消除了血清中未结合 的球蛋白中和AHG的可能性，因而，在抗人球试 验中，不用清洗红细胞
聚凝胺试验
原理：聚凝胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，
溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表 面的负电荷，使红细胞之间距离减小，能引起 正常红细胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗 体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集不可逆； 无抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集解 散。
程序：按试剂盒说明书操作。
凝胶试验应用于血型血清学
结 果 判 断 模 式
卡式血型/配血系统
系统特点：
•灵敏度高 •特异性高 •重复性好 •客观性强
•不需洗涤细胞
•结果可保留一周 •节约样品和试剂
•易于标准化
•易于自动化 •ISO9000/CE认证
自动化配血系统
自动化配血系统
谢谢
Thank you
凝胶酶试验
酶法： 利用木瓜酶或菠萝酶来破坏红细胞表面的唾液酸， 使细胞膜表面失去电荷，减少红细胞间的排斥；同时暴 露某些隐蔽抗原，增强凝集反应。主要用于一些不完全 抗体的检测。
凝胶凝集试验 - 原理(2)
标准化的孵育时间 标准化的离心时间 标准化的判读 - 消除主观因素对弱反应结果 的判读 结果稳定保存
凝胶试验方法的历史
1984 - 发明建立 (Dr. Y. Lapierre, Lyon, France) 1985 - 申请专利 1988 - 提供商品化试剂盒
市场上的凝胶检测系统： Diana System (Grifols) … 葡聚糖100凝胶, 多种大小 颗粒 DiaMed ID -葡聚糖100凝胶 Ortho BioVue - 玻璃珠 Pasteur ScanGel -葡聚糖凝胶 Gamma REAct - 蛋白G和蛋白A凝胶
凝胶凝集试验
凝胶抗人球试验
新技术——卡式检测法： 1986年法国Dr.Yves Lappierre发明了用于分离 凝集红细胞的凝胶卡式检测法。经过不断改进和临床 的大量应用，目前在发达国家已作为临床常规的红细 胞血型血清学检测新技术。 1994年凝胶卡式检测法用于临床常规的红细胞血 型血清学检测，已得到美国FDA权威机构的认证。
红细胞抗体(1)
预期抗体：若已知红细胞ABO血型，按
Landsteiner´s法则可预知的ABO血型 抗体，即抗-A和抗-B。 预期抗体也叫做规则抗体
意外抗体：抗-A或抗-B以外的抗体。在ABO亚型
中，变异的抗-A1或某种抗-B等抗体， 也称为意外抗体。 意外抗体过去也叫做不规则抗体
红细胞抗体(2)