石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究

目录

1、综述 (2)

1.1 铁皮石斛简介 (2)

1.2 铁皮石斛国内外研究的进展 (3)

1.3 铁皮石斛的育种与繁殖 (4)

1.4 本文研究的意义 (5)

2、铁皮石斛的水分测定及其多糖的提取 (5)

2.1水分的测定 (5)

2.2多糖的提取 (6)

3、铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物质抗氧化性的研究 (6)

3．1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制 (6)

3.2 实验测定原理及方法 (8)

3.2.1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定 (8)

3.2.2 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（.OH）的测定 (8)

-）的测定

3.2.3 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（·O

2 (9)

3.2.4 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还原能力的测定 (10)

4、结果与讨论 (10)

4.1 对DPPH自由基的清除能力 (10)

4.2 对羟基自由基（.OH）的清除能力 (11)

-）的清除能力 (12)

4.3 对超氧阴离子自由基（·O

2

4.3 还原能力的测定 (13)

5、结论 (13)

参考文献： (14)

铁皮石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究

专业：环境科学学号：200911201066 姓名：许永佳指导老师：苏小建

内容摘要：石斛多达五十余种，是市场上常见的名贵中草药和保健品。研究表明，植物的多糖及多酚含量很大程度决定了它的功效。本次实验，我们主要用铁皮石斛为主原料，选取水提醇沉法来提取它的多糖并测其含量。然后用极性较大的乙酸乙酯来萃取获得多酚物质，通过其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用以及其还原能力的测定，探讨铁皮石斛多酚物质的抗氧化活性，并与人工合成抗氧化剂BHT对自由基清除能力及还原能力进行比较。实验结果表明：石斛的多糖含量为4.73%，它的多酚物质具有很强的抗氧化性，优于合成物BHT。

关键词：铁皮石斛；多糖；抗氧化性；自由基； BHT

1、综述

1.1 铁皮石斛简介

铁皮石斛[D-officinale]，俗称吊兰,是兰科石斛属植物。茎，直立，圆柱形，节间披有白色的膜质鞘；叶，纸质，长圆状披针形，尖端钝并钩转，基部有抱茎的鞘；花，白色，生于老茎上部节间，唇瓣菱形，喉部有一紫红色的斑块。铁皮石斛为名贵草药，药名为黑节草，拥有滋阴润肺、养胃生津、明目清热、增强免疫力、医治失音沙哑、抗衰老等功效。野生铁皮石斛生于海拔100——3000米之间的山地半阴湿岩石、树皮上，喜温暖湿润气候和半阴湿的环境，不耐寒。铁皮石斛的鲜茎可直接食用，可炖汤，可泡茶，可浸酒[1]，通常加工成制成药品或饮料，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等。近年来以其为原料生产的高级保健品远销欧美和东南亚沿海发达地区。

早在1400多年前的《神农本草经》和400多年前的《本草纲目》等古典中药书籍中，就将铁皮石斛列为药材中的上品。《道藏》则称：“铁皮石斛、天山雪莲、三两人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、肉苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草为九大仙草”。由于铁皮石斛的生长环境特殊及其自身繁殖慢等原因，野生铁皮石斛资源稀缺。目前铁皮石斛主要生长于在中国安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。

1.2 铁皮石斛国内外研究的进展

通过对有关铁皮石斛的文献资料进行统计（图一），我们可以清楚的发现：2004年基本是铁皮石斛研究的拐点，在1995—2003这9年中，文献较少，年平均产量为23篇左右；但是在2004—2012这9年中，文献资料竟达到了2051篇之多，年平均产量为228篇左右，后9年的平均产量是前9年的平均产量的近10倍。另外， 1995年前关于铁皮石斛的文献资料是非常少的，基本可以忽略不

图一铁皮石斛文献年增长趋势图

表1 铁皮石斛的研究内容

研究内容1989—1993

篇（%）

1994—1998

篇（%）

1999—2003

篇（%）

2004—2009

篇（%）共计

组织培养5（62.5%）5（50%）11（30.6%）80（40.2%）101（39.9%）人工种植0 0 9（25%）26（13.1%）35（13.8%）种源鉴定2（25%）0 5（13.9%）28（14.1%）35（13.8%）化学成分0 2（20%）1（2.8%）26（13.1%）29（11.5%）内生菌1（12.5%）0 6（16.7%）20（10.1%）27（10.7%）药理作用0 3（30%）4（11.1%）16（8%）23（9.1%）综述0 0 0 3（1.5%）3（1.2%）共计8（3.2%）10（4%）36（14.2%）199（78.7%）253（100%）

由表1我们可以知道：对于铁皮石斛的研究大多在它的种植方面，并且这方面效果明显（因为铁皮石斛在种源鉴定方面的论文增长明显）。此外，在化学成分方面的研究[2—3]为后面相当一段时间内的大趋势，这个在未来是研究的重点。我们再和图一进行比较，2004年是研究铁皮石斛的大拐点，从这以后的研究基本直线增长。

我国对铁皮石斛的研究基本在它的药理、药性及保健功效方面。但是，由于近年来科技突飞猛进，我们对铁皮石斛的研究开始涉及到化学、生物等各个方面。例如：铁皮石斛生物碱提取纯化研究[4]、铁皮石斛种质资源研究中的DNA条形码初探[5]等。对于铁皮石斛，它已经超出一般意义上的药物和保健品。它的化学成分正一步一步被人们所熟知，我们提取它的主要成分用于各个研究领域。

1.3 铁皮石斛的育种与繁殖

铁皮石斛现在属于频临灭绝的物种，我们首要的还是要研究它的育种与繁殖问题。如今，在这方面的研究我们是成果颇丰的，铁皮石斛已经基本转为人工种植了。

我们主要以种子为实验体来进行组织培养，包括种子萌发、原球茎增殖、原球茎分化、生根与壮苗四个步骤。叶秀麟等[6]取用2——6个月种龄的种子进行组织培养实验后发现，种龄越长，萌发率越高。当把六个月的种子接入改良后的