石斛多糖提取工艺的研究
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
取石斛粗粉约 50 g，加入石 油 醚 （60～90℃）250 ml，回 流 提取 1 h，脱脂，过滤，挥干溶剂，加入 80%乙醇 250 ml，回流 提取 1 h，过滤，挥干溶剂，加入蒸馏水浸提 2 次，趁热过滤， 减压浓缩至 150 ml，0.1%活性炭脱色， 过滤， 脱蛋白， 加入 95%乙 醇 使 溶 液 含 醇 为 80%，于 冰箱 中 静 置 过 夜 ，沉 淀 物 用 无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，烘干，得石斛多糖粗制品。 2.2 加水量的选择
表 3 Sevag 法与 TCA 法提取结果比较
Tab.3 Comparison between Sevag method and TCA method
方法
粗多糖得率 （%）
多 糖 质 量 分 数 （% ）
Sevag 法
1.47
22.47
TCA 法
1.62
19.85
3 讨论
3.1 石斛多糖提取前除杂质
· 临床研究 ·
检验。 P＜0.05 为有显著性差异。 2 结果
经治疗后实验组与对照组疗效、住院时间及不良反应比 较见表 1、2。
组别 实验组
表 1 两组治疗后疗效比较情况（例）
例数
显效
有效
无效
68
48
18
2
对照组 68
41
17
10
与 对 照 组 比 较 ，*P＜0.05
总 有 效 率 （%） 95.83*
仪器设备有 ESJ120-4 型万分之一天平， 电热恒温水浴 锅，RE-52A 型旋转蒸发器，755B 型紫外可见分光光度计。 1.2 试药
石斛（四川乐山市歇马乡，经成都中医药大学严铸云教 授鉴定为细茎石斛）洗净杀青后于 60℃烘干，粉碎 ，过 50 目 筛备用。 本实验所用试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 提取工艺[3-5]
· 实验研究 ·
图 1 加水量对石斛多糖提取率的影响 Fig.1 Effect on water content on the extraction rate of
polysaccharide
图 2 温度对石斛多糖提取率的影响 Fig.2 Effect on temperature on the extraction rate of polysaccharide
运 用 苯 酚 硫 酸 比 色 法 [8]进 行 粗 多 糖 含 量 测 定 。 2.6 结果 2.6.1 不同加水体积对石斛多糖得率的影响 见图 1。 2.6.2 不同浸提温度对石斛多糖得率的影响 见图 2。
40 中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
2010 年 4 月第 7 卷第 12 期
· 实验研究 ·
2010 年 4 月第 7 卷第 12 期
石斛多糖提取工艺的研究
陈蕤 （广州科技职业技术学院医药营销系，广东广州 510550）
[摘要] 目的：对石斛多糖提取工艺进行优化。 方法：比较不同浸提温度、时间和除蛋白方法对多糖得率的影响，优化
工艺。 结果：石斛多糖最佳提取工艺条件为 90℃水浸提 3～4 h，料水体积比为 1∶50，采用 Sevag 法脱蛋白，样品-Sevag
表 1 Sevag 法脱蛋白正交设计
Tab.1 Factors and their levels of the Sevag method
因素 1
A
（V 样品∶V Sevag 溶液 ） 1∶0.5
B
（V 氯仿∶V ） 正丁醇 10∶2
C （ 时 间 ，min ）
10
2
1∶1
10∶2.5
20
3
1∶1.5
(4):392-396.
[2] 王天山.鼓槌石斛中化学成分对 K562 肿瘤细胞株生长抑制作用体外
试 验[J].天 然 产 物 研 究 与 开 发 ,1997,9(2):1-3.
（下转第 43 页）
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报 41
2010 年 4 月第 7 卷第 12 期
石斛属植物具有很高的药用价值。 而多糖类成分是石斛 中 具 有 免 疫 增 强 作 用[1]和 抗 肿 瘤 作 用[2]的 活 性 成 分 ，常 以 多 糖 的含量高低来判断石斛药材质量的高低。本研究对石斛多糖 的提取工艺进行优化探讨，为其工业化生产和利用提供理论 基础。 1 仪器与试药 1.1 仪器
溶液=1∶1、氯仿-正丁醇=10∶2.5，提取时间为 30 min。 结论：此方法提取石斛多糖得率高，为理想的提取条件。
[关键词] 石斛；多糖；提取工艺
[中图分类号] R284.2
[文献标识码] A
[文章编号] 1673-7210（2010）04（c）-040－03
Extraction technology of polysaccharide in Dendrobium
原料与水体积比分别为 1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60，比较 其多糖得率。 2.3 浸提温度的选择
分别在 80、85、90、100℃条 件 下 浸 提 3～4 h，比 较 其 多 糖
得率。 2.4 蛋白去除方法的选择
本实验运用 Sevag 法、TCA 法[5-6]去 除 石 斛 多 糖 中 的 蛋白 质。 2.4.1 Sevag 法 多 糖 提 取 液 ，真 空 抽 滤 ，浓 缩 至 一 定 体 积 ， 按 比 例 加 入 氯 仿-正 丁 醇 混 合 液 ，剧 烈 振 荡 ，以 5 000 r/min 的转速离心 15 min，取上清液。 如此反复操作 3 次。 为取得 最 佳 的 实 验 效 果 ，对 提 取 条 件 设 计 了 正 交 试 验 [7]，因 素 水 平 见表 1。
从而影响多糖得率[5]。 如果加水过多的话，则以后的浓缩过程
较繁杂，所以选择原料与水的比例为 1∶50。
3.3 石斛多糖浸提温度的确定
由图 2 可知，在 90℃条件下浸提 3～4 h，可达到较多的多
糖得率。 浸提时，温度过低则导致溶剂的渗透能力和溶剂能
力降低，使多糖不能有效溶出，温度过高则使得多糖被破坏，
斛多糖中的色素。 粗多糖的干燥可采用自然干燥、高温烘干
等 。为 实 验 室 操 作 方 便 ，本 实 验 采 用 70～80℃烘 干 至 恒 重 的
方法。
本实验确定石斛多糖 最 佳 提 取 工 艺 条件 为 90℃水 浸 提
3～4 h，料水体积比为 1∶50，采用 Sevag 法脱蛋白，样品：氯仿-
85.29
表 2 两组住院时间和不良反应比较（x±s，d）
组别 实验组
例数 68
住院时间 18.2±3.5*
不良反应（例） 1*
对照组
68
24.3±2.7
4
与 对 照 组 比 较 ，*P＜0.05
3 讨论 心脏是一个机械做功的器官，这就决定了它具有高耗
能、高耗氧、高代谢率的特点[2]。 心肌的氧摄取率高达 70%，当 心肌耗氧增加时，再提高氧摄取率的潜力很小，需靠扩张冠 状动脉、增加血流量以增加氧的供给。 任何造成心脏耗氧增 加和（或）供氧减少的因素都影响心脏做功。 心肌有氧氧化的 能力强而耐低氧能力差。 正常情况下，心肌的代谢基本上全 是需氧的[3]。 所以，氧是心肌细胞活动必不可少的物质 ，而氧 是通过血液输送给细胞的。 心脏没有“氧仓库”，完全依赖心 肌血供，一旦缺血，立刻会引起低氧。 低氧的直接后果是心肌 细胞有氧代谢减弱，产能减小，使心脏活动时必需的能量供 应不足，引起心绞痛、心律失常、心功能下降。 近年来临床治 疗多倾向于中药和西药相配合，据相关研究表明中草药抗心 肌缺血效果非常显著，如葛根、丹参、人参、银杏叶等中草药 经实验研究证实有抗心肌缺血作用，其所含有效成分部分已 分 离 鉴 定 并 用 于 临 床 [4-5]。
Sevag 法脱蛋白的效果好于 TCA 法，粗多糖得率及多糖
含量均较高，所需时间较短，但 Sevag 法也存在着重复多次、
产生较多有机物质等弊端；而 TCA 步骤较简单，所用试剂较
少，色素物质能在 TCA 液中随蛋白质沉淀而部分除去 ，有利
于层析精制 ，但 所 需时 间 较 长[10]。 因 此 ，笔 者 认 为 采 用 Sevag
正 丁 醇 =1∶1（V∶V）、氯 仿 ∶正 丁 醇 =10∶2.5 （V∶V）、 提 取 时 间 为
30 min，粗多糖得率为 1.47%，多糖质量分数为 22.47%，需要
进一步纯化精制。 本结果促进了石斛药材的规模化种植，为
药材的工业化生产和利用提供理论基础。
[参考文献]
[1] 赵永灵,王世林,李小玉.兜唇石斛多糖的研究[J].云南植物研究,1994,16
A
B
C
1
百度文库
1
1
1
2
2
1
3
3
2
1
2
2
2
3
2
3
1
3
1
3
3
2
1
3
3
2
20.19
19.51
19.22
21.26
20.86
20.71
19.72
20.80
21.24
0.79
0.76
1.04
多 糖 得 率 （% ） 18.03 20.98 21.56 20.81 22.47 20.49 19.68 19.13 20.35
石斛多糖提取前，先用石油醚或乙醚回流提取，可以除
去石斛植物中的脂溶性杂质及干扰性色素，而后用 80%乙醇
回流，除去蛋白质及氨基酸等。
3.2 石斛多糖浸提时加水量的选择
由图 1 可知，加水量影响石斛多糖得率，随着加水比的
增加，石斛多糖的提取率呈上升趋势。 若加水比例过少，在没
有达到最佳浸提时间之前， 浸出液已经变得很少甚至糊锅，
使 多 糖 得 率 降 低 [4]。
3.4 活性炭脱色
多糖成分中会存在一些残留色素，因此需要用活性炭脱
色[9]，加 入 后 应 多 保 留 几 分 钟 ，使 其 脱 色 完 全 。
3.5 多糖提取过程中脱蛋白方法的选择
可得知 A2B2C3 为最佳组合，即 V 样品∶V 氯仿-正丁醇=1∶1、V 氯仿： V 正丁 醇=10∶2.5、提 取 时 间 为 30 min 时 效 果 最 佳 ，多 糖 得 率 为 22.47%。
2.6.3 Sevag 法脱蛋白的正交试验结果 石斛多糖提取过程 中 应 用 Sevag 法 脱 蛋 白 的 正 交 试 验 结 果 见 表 2，Sevag 法 与 TCA 法比较结果见表 3。
试验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 R
表 2 正交试验结果
Tab.2 Results of the orthogonal test
CHEN Rui (Medical Promotion Profession, Guangzhou Vocational College of Science and Technology, Guangzhou 510550, China) [Abstract] Objective: To study optimum extracted -conditions of polysaccharide in Denderobiun. Methods: The most yield of polysaccharide was gotten which volume ratio of dendrobium to water, distilling temperaturethe and method of iso lating protein were used. Results: The effects was best when volume ratio of dendrobium to water was 1∶50, distilling at 90 ℃ for 3-4 hours, isolating protein by seveg method in the mixture composed of 50% sample and 50% sevag solution, the ra tio of chloroform and n-butano was 10∶2.5, the extraction technology was 30 min. Conclusion: The extraction method is perfect because the most yield of polysacchareide is gotten. [Key words] Dendrobium; Polysaccharide; Extraction technology
10∶3
30
2.4.2 TCA 法 多糖提取液，以 5 000 r/min 的转速离心 15 min， 取上清液，加入草酸调整 pH 至 pH=7，加入适量 3%的 TCA，沉 淀蛋白质，调整 pH 至 pH=7，放置过夜，以 5 000 r/min的 转 速 离心 15 min，取上清液。 如此反复操作 3 次，取平均值。 2.5 粗多糖含量的测定方法
法除去石斛多糖中的蛋白质更为合适。
3.6 多糖沉淀的分离、洗涤、干燥
经乙醇沉淀后的多糖可通滤纸过滤、 抽滤或者离心沉
淀等分离得到，滤纸表面粗糙，过滤速度慢，消耗时间多，粘
在上面的多糖不易洗脱，多糖获得率会因此降低，因此在分
离时选用离心沉淀。 粗制品烘干前用无水乙醇、乙醚涮洗，可
除去多余水分。 丙酮需加长洗涤时间、加大用量，尽量除去石
表 3 Sevag 法与 TCA 法提取结果比较
Tab.3 Comparison between Sevag method and TCA method
方法
粗多糖得率 （%）
多 糖 质 量 分 数 （% ）
Sevag 法
1.47
22.47
TCA 法
1.62
19.85
3 讨论
3.1 石斛多糖提取前除杂质
· 临床研究 ·
检验。 P＜0.05 为有显著性差异。 2 结果
经治疗后实验组与对照组疗效、住院时间及不良反应比 较见表 1、2。
组别 实验组
表 1 两组治疗后疗效比较情况（例）
例数
显效
有效
无效
68
48
18
2
对照组 68
41
17
10
与 对 照 组 比 较 ，*P＜0.05
总 有 效 率 （%） 95.83*
仪器设备有 ESJ120-4 型万分之一天平， 电热恒温水浴 锅，RE-52A 型旋转蒸发器，755B 型紫外可见分光光度计。 1.2 试药
石斛（四川乐山市歇马乡，经成都中医药大学严铸云教 授鉴定为细茎石斛）洗净杀青后于 60℃烘干，粉碎 ，过 50 目 筛备用。 本实验所用试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 提取工艺[3-5]
· 实验研究 ·
图 1 加水量对石斛多糖提取率的影响 Fig.1 Effect on water content on the extraction rate of
polysaccharide
图 2 温度对石斛多糖提取率的影响 Fig.2 Effect on temperature on the extraction rate of polysaccharide
运 用 苯 酚 硫 酸 比 色 法 [8]进 行 粗 多 糖 含 量 测 定 。 2.6 结果 2.6.1 不同加水体积对石斛多糖得率的影响 见图 1。 2.6.2 不同浸提温度对石斛多糖得率的影响 见图 2。
40 中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
2010 年 4 月第 7 卷第 12 期
· 实验研究 ·
2010 年 4 月第 7 卷第 12 期
石斛多糖提取工艺的研究
陈蕤 （广州科技职业技术学院医药营销系，广东广州 510550）
[摘要] 目的：对石斛多糖提取工艺进行优化。 方法：比较不同浸提温度、时间和除蛋白方法对多糖得率的影响，优化
工艺。 结果：石斛多糖最佳提取工艺条件为 90℃水浸提 3～4 h，料水体积比为 1∶50，采用 Sevag 法脱蛋白，样品-Sevag
表 1 Sevag 法脱蛋白正交设计
Tab.1 Factors and their levels of the Sevag method
因素 1
A
（V 样品∶V Sevag 溶液 ） 1∶0.5
B
（V 氯仿∶V ） 正丁醇 10∶2
C （ 时 间 ，min ）
10
2
1∶1
10∶2.5
20
3
1∶1.5
(4):392-396.
[2] 王天山.鼓槌石斛中化学成分对 K562 肿瘤细胞株生长抑制作用体外
试 验[J].天 然 产 物 研 究 与 开 发 ,1997,9(2):1-3.
（下转第 43 页）
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报 41
2010 年 4 月第 7 卷第 12 期
石斛属植物具有很高的药用价值。 而多糖类成分是石斛 中 具 有 免 疫 增 强 作 用[1]和 抗 肿 瘤 作 用[2]的 活 性 成 分 ，常 以 多 糖 的含量高低来判断石斛药材质量的高低。本研究对石斛多糖 的提取工艺进行优化探讨，为其工业化生产和利用提供理论 基础。 1 仪器与试药 1.1 仪器
溶液=1∶1、氯仿-正丁醇=10∶2.5，提取时间为 30 min。 结论：此方法提取石斛多糖得率高，为理想的提取条件。
[关键词] 石斛；多糖；提取工艺
[中图分类号] R284.2
[文献标识码] A
[文章编号] 1673-7210（2010）04（c）-040－03
Extraction technology of polysaccharide in Dendrobium
原料与水体积比分别为 1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60，比较 其多糖得率。 2.3 浸提温度的选择
分别在 80、85、90、100℃条 件 下 浸 提 3～4 h，比 较 其 多 糖
得率。 2.4 蛋白去除方法的选择
本实验运用 Sevag 法、TCA 法[5-6]去 除 石 斛 多 糖 中 的 蛋白 质。 2.4.1 Sevag 法 多 糖 提 取 液 ，真 空 抽 滤 ，浓 缩 至 一 定 体 积 ， 按 比 例 加 入 氯 仿-正 丁 醇 混 合 液 ，剧 烈 振 荡 ，以 5 000 r/min 的转速离心 15 min，取上清液。 如此反复操作 3 次。 为取得 最 佳 的 实 验 效 果 ，对 提 取 条 件 设 计 了 正 交 试 验 [7]，因 素 水 平 见表 1。
从而影响多糖得率[5]。 如果加水过多的话，则以后的浓缩过程
较繁杂，所以选择原料与水的比例为 1∶50。
3.3 石斛多糖浸提温度的确定
由图 2 可知，在 90℃条件下浸提 3～4 h，可达到较多的多
糖得率。 浸提时，温度过低则导致溶剂的渗透能力和溶剂能
力降低，使多糖不能有效溶出，温度过高则使得多糖被破坏，
斛多糖中的色素。 粗多糖的干燥可采用自然干燥、高温烘干
等 。为 实 验 室 操 作 方 便 ，本 实 验 采 用 70～80℃烘 干 至 恒 重 的
方法。
本实验确定石斛多糖 最 佳 提 取 工 艺 条件 为 90℃水 浸 提
3～4 h，料水体积比为 1∶50，采用 Sevag 法脱蛋白，样品：氯仿-
85.29
表 2 两组住院时间和不良反应比较（x±s，d）
组别 实验组
例数 68
住院时间 18.2±3.5*
不良反应（例） 1*
对照组
68
24.3±2.7
4
与 对 照 组 比 较 ，*P＜0.05
3 讨论 心脏是一个机械做功的器官，这就决定了它具有高耗
能、高耗氧、高代谢率的特点[2]。 心肌的氧摄取率高达 70%，当 心肌耗氧增加时，再提高氧摄取率的潜力很小，需靠扩张冠 状动脉、增加血流量以增加氧的供给。 任何造成心脏耗氧增 加和（或）供氧减少的因素都影响心脏做功。 心肌有氧氧化的 能力强而耐低氧能力差。 正常情况下，心肌的代谢基本上全 是需氧的[3]。 所以，氧是心肌细胞活动必不可少的物质 ，而氧 是通过血液输送给细胞的。 心脏没有“氧仓库”，完全依赖心 肌血供，一旦缺血，立刻会引起低氧。 低氧的直接后果是心肌 细胞有氧代谢减弱，产能减小，使心脏活动时必需的能量供 应不足，引起心绞痛、心律失常、心功能下降。 近年来临床治 疗多倾向于中药和西药相配合，据相关研究表明中草药抗心 肌缺血效果非常显著，如葛根、丹参、人参、银杏叶等中草药 经实验研究证实有抗心肌缺血作用，其所含有效成分部分已 分 离 鉴 定 并 用 于 临 床 [4-5]。
Sevag 法脱蛋白的效果好于 TCA 法，粗多糖得率及多糖
含量均较高，所需时间较短，但 Sevag 法也存在着重复多次、
产生较多有机物质等弊端；而 TCA 步骤较简单，所用试剂较
少，色素物质能在 TCA 液中随蛋白质沉淀而部分除去 ，有利
于层析精制 ，但 所 需时 间 较 长[10]。 因 此 ，笔 者 认 为 采 用 Sevag
正 丁 醇 =1∶1（V∶V）、氯 仿 ∶正 丁 醇 =10∶2.5 （V∶V）、 提 取 时 间 为
30 min，粗多糖得率为 1.47%，多糖质量分数为 22.47%，需要
进一步纯化精制。 本结果促进了石斛药材的规模化种植，为
药材的工业化生产和利用提供理论基础。
[参考文献]
[1] 赵永灵,王世林,李小玉.兜唇石斛多糖的研究[J].云南植物研究,1994,16
A
B
C
1
百度文库
1
1
1
2
2
1
3
3
2
1
2
2
2
3
2
3
1
3
1
3
3
2
1
3
3
2
20.19
19.51
19.22
21.26
20.86
20.71
19.72
20.80
21.24
0.79
0.76
1.04
多 糖 得 率 （% ） 18.03 20.98 21.56 20.81 22.47 20.49 19.68 19.13 20.35
石斛多糖提取前，先用石油醚或乙醚回流提取，可以除
去石斛植物中的脂溶性杂质及干扰性色素，而后用 80%乙醇
回流，除去蛋白质及氨基酸等。
3.2 石斛多糖浸提时加水量的选择
由图 1 可知，加水量影响石斛多糖得率，随着加水比的
增加，石斛多糖的提取率呈上升趋势。 若加水比例过少，在没
有达到最佳浸提时间之前， 浸出液已经变得很少甚至糊锅，
使 多 糖 得 率 降 低 [4]。
3.4 活性炭脱色
多糖成分中会存在一些残留色素，因此需要用活性炭脱
色[9]，加 入 后 应 多 保 留 几 分 钟 ，使 其 脱 色 完 全 。
3.5 多糖提取过程中脱蛋白方法的选择
可得知 A2B2C3 为最佳组合，即 V 样品∶V 氯仿-正丁醇=1∶1、V 氯仿： V 正丁 醇=10∶2.5、提 取 时 间 为 30 min 时 效 果 最 佳 ，多 糖 得 率 为 22.47%。
2.6.3 Sevag 法脱蛋白的正交试验结果 石斛多糖提取过程 中 应 用 Sevag 法 脱 蛋 白 的 正 交 试 验 结 果 见 表 2，Sevag 法 与 TCA 法比较结果见表 3。
试验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 R
表 2 正交试验结果
Tab.2 Results of the orthogonal test
CHEN Rui (Medical Promotion Profession, Guangzhou Vocational College of Science and Technology, Guangzhou 510550, China) [Abstract] Objective: To study optimum extracted -conditions of polysaccharide in Denderobiun. Methods: The most yield of polysaccharide was gotten which volume ratio of dendrobium to water, distilling temperaturethe and method of iso lating protein were used. Results: The effects was best when volume ratio of dendrobium to water was 1∶50, distilling at 90 ℃ for 3-4 hours, isolating protein by seveg method in the mixture composed of 50% sample and 50% sevag solution, the ra tio of chloroform and n-butano was 10∶2.5, the extraction technology was 30 min. Conclusion: The extraction method is perfect because the most yield of polysacchareide is gotten. [Key words] Dendrobium; Polysaccharide; Extraction technology
10∶3
30
2.4.2 TCA 法 多糖提取液，以 5 000 r/min 的转速离心 15 min， 取上清液，加入草酸调整 pH 至 pH=7，加入适量 3%的 TCA，沉 淀蛋白质，调整 pH 至 pH=7，放置过夜，以 5 000 r/min的 转 速 离心 15 min，取上清液。 如此反复操作 3 次，取平均值。 2.5 粗多糖含量的测定方法
法除去石斛多糖中的蛋白质更为合适。
3.6 多糖沉淀的分离、洗涤、干燥
经乙醇沉淀后的多糖可通滤纸过滤、 抽滤或者离心沉
淀等分离得到，滤纸表面粗糙，过滤速度慢，消耗时间多，粘
在上面的多糖不易洗脱，多糖获得率会因此降低，因此在分
离时选用离心沉淀。 粗制品烘干前用无水乙醇、乙醚涮洗，可
除去多余水分。 丙酮需加长洗涤时间、加大用量，尽量除去石