临床免疫学实验诊断
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• 抗HCV IgM早期诊断。 • 确证 免疫印迹法
31
丁型肝炎免疫学检测
1）HDV抗原 2）抗HDV IgM 3）抗HDV
32
戊型肝炎免疫学检测
抗体检测
IgM型：诊断指标， ELISA法
IgG型：双份血清，流 行病学调查、既往 感染或疫苗接种效 果评价
病毒抗原
33
（二）细菌感染免疫学诊断
人感染病原体产生特异性抗体可持续一段时 间，→现症诊断，疾病追溯。
携带者
+
+
-
-
+ 急性或慢性乙型肝炎（传染性强，
“大三阳”）
+
-
-
+
+ 急性感染趋向恢复（“小三阳”）
-
-
+
+
+ 既往感染恢复期
-
-
+
+
- 既往感染恢复期
-
-
-
-
+ 既往感染或“窗口期”
-
-
+
-
- 既往感染或接种过疫苗
30
丙型肝炎免疫学检测
• 免疫学：筛选试验 ELISA、放射免疫法抗 HCV IgG或IgM。
1.血清抗链球菌溶血素“O”试验：A链 • 近期感染，活动性风湿热、风湿性关节炎、
-
+
置待测血清中，漂洗； 加酶标抗抗体，漂洗；
加底物 显色
95
68 45 12KD
120
41 24KD
22
临床应用
一 感染性疾病免疫学诊断
• （一）病毒性肝炎 • （二）细菌感染 • （三）病毒感染 • （四）真菌感染 • （五）寄生虫感染 • （六）其他
24
肝炎
• 甲型肝炎乙型肝炎 • 丙型肝炎丁型肝炎 • 戊型肝炎
应过程 • 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合
免疫检验涉及的主要技术
• 放射免疫技术 化学发光免疫技术 • 荧光免疫技术 流式细胞免疫技术 • 酶联免疫技术 免疫印迹技术 • 透/散射免疫技术 单克隆抗体技术
概述：凝集反应
12
T细胞亚群的检测——花环法（一）13
单向琼脂扩散试验
贡献
补体与溶菌活性 特异凝集反应 肥达试验 沉淀试验 补体结合反应 人类ABO血型及其抗体 梅毒补体结合反应 纯化抗体,定量沉淀反应 免疫荧光标记 凝胶内沉淀反应 双扩散沉淀反应 免疫电泳分析,Ig多样性 放射免疫标记 酶标免疫技术 杂交瘤技术与单克隆抗体
发展进程的主要阶段
• 自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应） • 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术） • 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 • 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反
实验诊断学
临床免疫学实验诊断
1
目的要求
• 病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义 • 肿瘤标志物的检测特征及其意义 • 自身免疫性疾病的特点和主要指标 • 酶联免疫吸附试验的原理，方法
• 酶免疫组化技术概念、过程及应用。 • 沉淀试验、凝集试验和标记技术原理 • 细胞因子的检测及临床应用 • T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法 • 移植排斥反应的免疫学监测 • 外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测
3
临床免疫学实验诊断
• 实验诊断学 • 临床免疫学实验诊断
临床免疫学实验诊断
• 概述 • 感染性疾病免疫学诊断 • 肿瘤免疫学诊断 • 免疫增殖和免疫缺陷病诊断 • 超敏反应性疾病免疫学诊断 • 自身免疫性疾病诊断 • 移植免疫学 • 临床免疫学检验的自动化
5
免疫与疾病 6
免疫系统功能的生理和病理表现
25
甲型肝炎免疫学检测
免疫电镜查病毒颗粒。放射免疫 (RIA) 或酶 免疫 (EIA) 测抗原。
26
甲型肝炎免疫学检测
• 抗体检测
–IgM型：常用IgM抗体捕 捉ELISA检测法
–IgG型：双份血清，用 于流行病学调查、既往 感染或疫苗效果评价
• 抗原检测
–ELISA夹心法 –难以常规开展
27
乙型肝炎免疫学检测
• 另一部分是利用免疫检测原理与技术检测 体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋 白、血液药物浓度、微量元素等。
年代
1894 1896 1896 1897 1900 1900 1906 1935 1941 1946 1948 1953 1960 1966 1975
免疫学技术发展史
学者
J. Bordet H. Durham, M. von Gruber G. Widal, A. Sicad R. Kraus J. Bordet, O. Gengou K. Landsteiner A. Wassermann M. Heidelberger, F. Kendall A. Coons J. Oudin O. Ouchterlony, S. Elek P. Grabar, C. Williams R. Yallow, S. Berson S. Avrames, J. Uriel, et al G. Kohler, C. Milstein
功能名称
生理功能
病理表现
免疫防御 清除病原微生物及其它抗 超敏反应（强）
原性异物
免疫缺陷病（弱）
免疫自稳 清除损伤或衰老细胞
自身免疫性疾病
免疫监视 清除突变或畸变细胞，防 肿瘤或病毒持续性感 止肿瘤发生、杀伤病毒感 染 染细胞
临床免疫学与免疫检验
• 免疫检验可分为两部分：
• 一部分为利用免疫检测原理与技术检测免 疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因 子、细胞粘附分子等免疫相关物质；
14
免疫比浊法原理
抗体 抗原
免疫复合物的 浓度与透射光 的衰减呈正相 关
测吸光度 计算抗原 或抗体的 含量
15
概述：标记免疫技术
概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体 或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术。
免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检 测技术等。
特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、 定位。
• 乙肝患者最多国家。发病前五：死亡前五：
28
实验室检查
蛋白质代谢功能检查 胆红素代谢检查 常用的血清酶及同工酶检查 肝纤维化常用标志物检测
29
乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测结果分析
HBsAg HBeAg 抗-HBs 抗-HBe 抗-HBc
结果分析
+
-
-
-
Fra Baidu bibliotek
- HBV感染或无症状携带者
+
+
-
-
- 急性或慢性乙型肝炎，或无症状
16
免疫荧光技术
17
酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法1)8
斑点金免疫渗滤试验
A
加尿样
B
除去滤器
C
D
加胶体金标记抗体
加洗涤液
阴性（未怀孕）
19
斑点金免疫层析试验
质控线 测试线
尿样
阳性 弱阳性 阴性 无效
20
化学发光/电化学发光技术
免疫印迹法图解
电转印至NC膜上
SDS裂解 病毒
聚丙酰胺凝胶电泳
31
丁型肝炎免疫学检测
1）HDV抗原 2）抗HDV IgM 3）抗HDV
32
戊型肝炎免疫学检测
抗体检测
IgM型：诊断指标， ELISA法
IgG型：双份血清，流 行病学调查、既往 感染或疫苗接种效 果评价
病毒抗原
33
（二）细菌感染免疫学诊断
人感染病原体产生特异性抗体可持续一段时 间，→现症诊断，疾病追溯。
携带者
+
+
-
-
+ 急性或慢性乙型肝炎（传染性强，
“大三阳”）
+
-
-
+
+ 急性感染趋向恢复（“小三阳”）
-
-
+
+
+ 既往感染恢复期
-
-
+
+
- 既往感染恢复期
-
-
-
-
+ 既往感染或“窗口期”
-
-
+
-
- 既往感染或接种过疫苗
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丙型肝炎免疫学检测
• 免疫学：筛选试验 ELISA、放射免疫法抗 HCV IgG或IgM。
1.血清抗链球菌溶血素“O”试验：A链 • 近期感染，活动性风湿热、风湿性关节炎、
-
+
置待测血清中，漂洗； 加酶标抗抗体，漂洗；
加底物 显色
95
68 45 12KD
120
41 24KD
22
临床应用
一 感染性疾病免疫学诊断
• （一）病毒性肝炎 • （二）细菌感染 • （三）病毒感染 • （四）真菌感染 • （五）寄生虫感染 • （六）其他
24
肝炎
• 甲型肝炎乙型肝炎 • 丙型肝炎丁型肝炎 • 戊型肝炎
应过程 • 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合
免疫检验涉及的主要技术
• 放射免疫技术 化学发光免疫技术 • 荧光免疫技术 流式细胞免疫技术 • 酶联免疫技术 免疫印迹技术 • 透/散射免疫技术 单克隆抗体技术
概述：凝集反应
12
T细胞亚群的检测——花环法（一）13
单向琼脂扩散试验
贡献
补体与溶菌活性 特异凝集反应 肥达试验 沉淀试验 补体结合反应 人类ABO血型及其抗体 梅毒补体结合反应 纯化抗体,定量沉淀反应 免疫荧光标记 凝胶内沉淀反应 双扩散沉淀反应 免疫电泳分析,Ig多样性 放射免疫标记 酶标免疫技术 杂交瘤技术与单克隆抗体
发展进程的主要阶段
• 自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应） • 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术） • 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 • 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反
实验诊断学
临床免疫学实验诊断
1
目的要求
• 病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义 • 肿瘤标志物的检测特征及其意义 • 自身免疫性疾病的特点和主要指标 • 酶联免疫吸附试验的原理，方法
• 酶免疫组化技术概念、过程及应用。 • 沉淀试验、凝集试验和标记技术原理 • 细胞因子的检测及临床应用 • T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法 • 移植排斥反应的免疫学监测 • 外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测
3
临床免疫学实验诊断
• 实验诊断学 • 临床免疫学实验诊断
临床免疫学实验诊断
• 概述 • 感染性疾病免疫学诊断 • 肿瘤免疫学诊断 • 免疫增殖和免疫缺陷病诊断 • 超敏反应性疾病免疫学诊断 • 自身免疫性疾病诊断 • 移植免疫学 • 临床免疫学检验的自动化
5
免疫与疾病 6
免疫系统功能的生理和病理表现
25
甲型肝炎免疫学检测
免疫电镜查病毒颗粒。放射免疫 (RIA) 或酶 免疫 (EIA) 测抗原。
26
甲型肝炎免疫学检测
• 抗体检测
–IgM型：常用IgM抗体捕 捉ELISA检测法
–IgG型：双份血清，用 于流行病学调查、既往 感染或疫苗效果评价
• 抗原检测
–ELISA夹心法 –难以常规开展
27
乙型肝炎免疫学检测
• 另一部分是利用免疫检测原理与技术检测 体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋 白、血液药物浓度、微量元素等。
年代
1894 1896 1896 1897 1900 1900 1906 1935 1941 1946 1948 1953 1960 1966 1975
免疫学技术发展史
学者
J. Bordet H. Durham, M. von Gruber G. Widal, A. Sicad R. Kraus J. Bordet, O. Gengou K. Landsteiner A. Wassermann M. Heidelberger, F. Kendall A. Coons J. Oudin O. Ouchterlony, S. Elek P. Grabar, C. Williams R. Yallow, S. Berson S. Avrames, J. Uriel, et al G. Kohler, C. Milstein
功能名称
生理功能
病理表现
免疫防御 清除病原微生物及其它抗 超敏反应（强）
原性异物
免疫缺陷病（弱）
免疫自稳 清除损伤或衰老细胞
自身免疫性疾病
免疫监视 清除突变或畸变细胞，防 肿瘤或病毒持续性感 止肿瘤发生、杀伤病毒感 染 染细胞
临床免疫学与免疫检验
• 免疫检验可分为两部分：
• 一部分为利用免疫检测原理与技术检测免 疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因 子、细胞粘附分子等免疫相关物质；
14
免疫比浊法原理
抗体 抗原
免疫复合物的 浓度与透射光 的衰减呈正相 关
测吸光度 计算抗原 或抗体的 含量
15
概述：标记免疫技术
概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体 或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术。
免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检 测技术等。
特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、 定位。
• 乙肝患者最多国家。发病前五：死亡前五：
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实验室检查
蛋白质代谢功能检查 胆红素代谢检查 常用的血清酶及同工酶检查 肝纤维化常用标志物检测
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乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测结果分析
HBsAg HBeAg 抗-HBs 抗-HBe 抗-HBc
结果分析
+
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-
-
Fra Baidu bibliotek
- HBV感染或无症状携带者
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-
- 急性或慢性乙型肝炎，或无症状
16
免疫荧光技术
17
酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法1)8
斑点金免疫渗滤试验
A
加尿样
B
除去滤器
C
D
加胶体金标记抗体
加洗涤液
阴性（未怀孕）
19
斑点金免疫层析试验
质控线 测试线
尿样
阳性 弱阳性 阴性 无效
20
化学发光/电化学发光技术
免疫印迹法图解
电转印至NC膜上
SDS裂解 病毒
聚丙酰胺凝胶电泳