医学检验本科班分子生物学检验技术试卷

医学检验本班《分子生物学检验技术》试卷

一. 选择题（在备选答案中选择一个最佳答案,每题2分,共20分）:

1. 在核酸提取时,常需要使用氯化钠,醋酸钠等盐溶液,真正的目的是（）

A. 中和核酸的负离子,使其易于沉淀

B. 调节PH值

C. 保持核算的完整性

D. 提高核酸的浓度

E. 无特定目的

2. 在一个DNA分子中,如G所占摩尔比为17.2%,则A所占摩尔比为（）

A. 82.8%

B. 32.8%

C. 17.2%

D. 65.6%

E. 无法计算

3.下列那项不是扩增反应所必需的?（）

A. 引物和模板

B. dNTP

C. Mg++ D .DNase E. 缓冲液

4. 下列那项是分子生物学技术形成的理论基础?（）

A. 基因结构与功能的关系

B. 基因结构变异与疾病的关系

C. 病原微生物的基因结构特征

D. 基因的表达.调控与疾病的关系

E. 以上皆是

5. 分子生物学检验技术主要包括那些技术?（）

A. 核酸分子杂交技术

B. DNA测序技术

C. PCR技术

D. DNA重组技术

E. 以上全是

6. 下列哪项检测需应用分子生物学检验技术?（）

A. 肝功能检测

B.乙肝两对半检测

C. 乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测

D. 肿瘤细胞培养

E. 病原微生物培养

7. 在核酸的分离纯化过程中,为保证其一级结构的完整性,应采取（）

A. 尽量简化分离步骤,缩短提取时间

B. 适当延长提取时间

C. 在37摄氏度条件下进行

D. 加入Mg++,Ca++等二价金属离子

E. 以上全是

8. 有一核酸样品,测得A260/A280=2.0,请问该样品属于哪类核酸样品?（）

A. DNA

B. RNA

C. 是DNA,但有蛋白质污染

D. 是RNA,但有蛋白质污染

E. DNA和RNA

9. 在RNA提取和纯化过程中,为避免Rnase污染而导致RNA的降解,应采取（）

A. 在洁净的实验室里操作

B. 带手套和口罩

C. 所用器材高压消毒或DEPC处理

D. 冰浴下操作

E. 以上皆是

10. 随机引物标记法全程标记DNA时,需选用下列哪种酶?（）

A. DNA多聚酶I的Kelnow片段

B. TaqDNA聚合酶

C. 限制性内切酶

D. DNA连接酶

E. 末端转移酶

二. 判断题：(你认为下列叙述正确的请在题后括号内打√,错误的打×，每题2分,共6分)

1. 双脱氧核酸链终止法是最常用的DNA测序技术（）

2. TapDNA聚合酶的作用是催化DNA合成，但由于缺乏3’→5’外切酶活性，无校正功能，所以在复制合成新链过程中可能会发生碱基错配，导致PCR产物的错误（）

3. 采用加热煮沸法可使RNase完全失活（）

三：填空题(每空格2分,共24分):

1. 在选择核酸的分离纯化方法，应遵循的总原则是：一是保证核酸（一级结构的完整性）；二是尽可能（排除其他分子的污染，保证核酸样品的纯度）。

2. 在PCR反应中，Mg++是个至关重要的因素，浓度（过低）会降低酶的活性，浓度（过高）又会导致非特异性扩增。

3. 用于核酸杂交的普通硝酸纤维素膜最大的优点是（本底低），因而最容易检测杂交信号，缺点是（脆性大）易破裂，且队＜５００bp的核酸结合力低。

4．整个核酸杂交反应主要由（预杂交）、（杂交）和（洗脱）三个步骤组成。

5. 转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上的核酸，其与滤膜的结合是松散的，需做进一步的固定，常用的固定方法是（烘烤）、（紫外线固定）和（碱固定）。

三. 名词解释：(每题4分,共20分):

1. 融点曲线分析技术：是根据野生型序列和突变序列因不同Tm而产生不同的融点曲线而设计的。

2. 探针:指所有能与特定的靶分子发生特异性的相互作用，并可以被检测的分子。

3. Tm值：DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。

4. 转染:将外源DNA直接导入真核生物细胞的过程称为转染。

5. 转化:将重组的DNA分子导入细菌，使其在细菌体内扩增及表达的过程称为转化。

四. 问答题:（每题10分，共30分）

1. 简述限制性内切酶的定义、命名原则和分类。

答：定义：限制性内切酶是能识别和水解双链DNA分子内特异序列的核酸水解酶类。

命名：通常由3个斜体字母表示，第1个大写字母为来源微生物的属名第1个字母，第2、第3个小写子母取微生物种名的头两个字母。

分类：根据酶分子组成及裂解方式的不同，将限制性内切酶分3类，Ⅰ类和Ⅲ类限制性内切酶在同一酶分子中兼有修饰（甲基化）作用和依赖于ATP的限制水解活性，Ⅱ类限制性内切酶能识别并水解特异性的核苷酸序列是DNA重组技术中最重要的工具。

2. PCR引物的设计应遵循哪些原则。

答：1.用于PCR反应的引物需要两条，分别设在被扩增目的的片段的两端，并分别与模版正负链序列互补。

2.引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜，引物过长容易产生寡核苷酸的链内互补，形成发夹状结构，影响引物和模板之间的互补。

3.两条引物之间尤其在3’端的序列不能有互补，以免形成引物二聚体。

4.引物的碱基组成应平衡，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积。

5.PCR扩增中的退火温度是根据引物的Tm值而决定的，两条引物的Tm值不能差太大。

6.根据需要，可在合成引物时于其5’端加修饰成分。

3. 试述实时荧光PCR水解探针法的实验原理？

答：原理：PCR反应体系中除有两条引物外还需要一条荧光素标记的探针。探针的5’端和3’端分别标记荧光报告基团R和荧光淬灭基团Q，当探针完整时R基团与Q基团分别位于探针的两端，Q基团抑制R基团使其不能发射荧光。PCR过程中，TaqDNA聚合酶沿着模板移动各成新链，当移动到模板互补的探针处时，TaqDNA聚合酶同时还发挥其5’-3’外切核酸酶活性，将探针的脱氧核苷三磷酸逐个水解，R基团与Q基团随子分离。此时R基团不再受Q基团的抑制而发射荧光，仪器的检测系统便可测得荧光信号。