SNP检测方法汇总
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现在SNP得常用检测方法主要有:Taqman法、质谱法、芯片法、测序法。
Taqman法:准确性高,适合于大样本、少位点,价格比较贵;质谱法:准确性高,适合于大样本、多位点(能检测25个位点);芯片法:准确性较低,适合于超多位点分析;测序法:非常准确,但就是价格也非常得高,但就是对于少样本、超多位点还就是非常好得选择。
SNP检测方法汇总
分析SNP得方法有许多种,本文收集目前还在用得方法,按通量从高到低排列:
全基因组测序
这就是最贵得方法,但也就是瞧SNP最全得方法
大概一个人样本,花2万元
外显子组测序
外显子组测序,也可以得到较全面得SNP信息
大概一个人样本,花1、5万元
随着人全基因组测序得价格降到2万元左右,外显子组测序会很快退出市场
全基因组SNP芯片
原理,核酸杂交,荧光扫描
Illumina与Affymetrix都有很著名得全基因组SNP芯片,例如:
Affymetrix: CytoScan,SNP 6、0,
Illumina: 660,中华,450K等
SNP芯片,在2000~5000元每样本,还就是比全基因组测序得2万元一个样本得价格要低质谱法
原理,精确测量PCR产物得分子量,就可以知道SNP位点上就是A/C/G/T中得哪一个Sequenome MassArray法测中等通量得SNP位点就是十分准确得
单个位点、单个样本得费用约2元人民币
无需预制芯片、预订荧光探针,只要合成常规得PCR引物就可以做实验了
如果测几十个点,到上百个点,就是很方便得方法
SNPseq法
此方法为天昊公司所创,一次测几百个位点
原理:
用Goldgate法做出针对某些位点得多重PCR片段
高通量测序,数据分析得到SNP位点结果
SNPlex
中等偏高通量得方法,一次几十个位点
原理:
用末端特异得引物做多重PCR,把模板进行扩增
基于毛细管电泳,把片段分离开,读颜色
SNaPshot
中等通量得方法
设计3'位挨着目标位点得探针
用双脱氧得荧光标记ddNTP做一个碱基得延伸
毛细管电泳,瞧延伸得这个碱基就是什么颜色
Taqman法
Taqman原理,如果要找原理,请回复“荧光”两字
Taqman方法,一次一管测一个位点
通量最低,但就是结果可靠
原理:
设计与SNP位点互补得荧光探针,其中一个标VIC(红色荧光基团),另一个标FAM(绿色荧光基团),同时分别有淬来基团吸光
Taq酶有5'-->3'得外切酶活性,如果探针粘有模板上,就被切碎
探针被切碎后,荧光基团与淬灭基团分离,发出荧光。
瞧荧光颜色,就可以知道SNP位点上就是什么碱基
ArrayTape法
基于Taqman原理
用塑料卷代替微孔板,用水浴锅代替PCR仪,提供通量费用降到0、7元/SNP/样本以下
OpenArray法
OpenArray法,基于Taqman原理
用预置了PCR引物得微孔来代替微孔板
费用可降到1元人民币/SNP/样本。