人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性

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人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠深静脉血栓

《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2019)21-03392-063392www.CRTER .org·研究原著·王燕，女，1994 年生，江苏省南通市人，汉族，南通大学医学院妇产科学在读硕士，主要从事妊娠期静脉血栓栓塞症方面的研究。

通讯作者：张玉泉，博士生导师，教授，南通大学附属医院妇产科，江苏省南通市 226001文献标识码:B稿件接受：2019-02-23Wang Yan, Master candidate, Medical College of Nantong University, Nantong 226001, Jiangsu Province, ChinaCorresponding author: Zhang Yuquan, Doctoral supervisor, Professor, Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Hospital of Nantong University, Nantong 226001, Jiangsu Province, China人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠深静脉血栓王燕1，施沁2，张玉泉2 (1南通大学医学院，江苏省南通市 226001；2南通大学附属医院妇产科，江苏省南通市 226001)DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1745 ORCID: 0000-0002-2939-0036(王燕)文章快速阅读：文题释义：脐带间充质干细胞：人脐带间充质干细胞是来源于发育早期中胚层和外胚层的一类多能干细胞，具有自我增殖及多向分化、免疫调节、归巢、旁分泌、组织修复及促血管新生等特性，严格意义上其来源分4种，即华通氏胶、脐血、脐血管及脐血管周围细胞，实验采用脐带华通氏胶源性间充质干细胞。

干细胞应用安全性及其影响因素的研究

干细胞应用安全性及其影响因素的研究摘要：目前，对于干细胞的研究局限于干细胞应用引发的安全性问题，对于影响干细胞安全性因素的研究甚少，或仅局限于其中一种因素的分析。

现就干细胞应用安全性及其影响因素的研究进行综述，以综合分析各影响因素及其之间的相互作用、评估干细胞治疗技术的效果，并有望在未来拓宽干细胞应用的领域，提高其临床治疗的安全性，为疾病治疗提供更有效的治疗手段。

关键词：干细胞；安全性；致瘤性；影响因素1干细胞临床应用的安全性干细胞治疗临床应用中存在致瘤性、移植物抗宿主病(GVHD)、血栓等安全性问题，其中以致瘤性为主。

干细胞可能具有促进肿瘤发生的作用，一般可分化成畸胎瘤、畸胎癌和继发性肿瘤，干细胞在应用前多经过连续传代扩增，长期的体外培养导致细胞端粒长度变化，染色体不稳定性增加，易引发基因突变，最终导致细胞恶性转化；除致瘤性问题外，干细胞移植还会发生GVHD；此外，血栓问题也偶有发生，因为干细胞输入体内后易分布在肺、脾、肾和皮肤等血供丰富的器官，当大量干细胞在脏器内滞留时，可导致局部小血管内血栓形成。

除上述安全性问题外，变态反应、头痛、腰痛等也有发生，但一般不会对患者产生严重影响，一段时间后症状可自行消失。

2影响干细胞临床应用安全性的因素2.1干细胞种类目前广泛应用于临床的干细胞主要有间充质干细胞(MSCs)、胚胎干细胞(ESCs)、诱导多能干细胞(iPSCs)等，其中以MSCs为主。

干细胞临床应用的安全性因干细胞种类不同而有所差异，MSCs主要引发致瘤性和血栓，造血干细胞(HSCs)则主要引起GVHD，而ESCs及iPSCs主要促进畸胎瘤的发生发展。

MSCs是成体、成纤维细胞样的多能细胞，来源广泛、易于分离和扩增、免疫原性低，具有旁分泌和广泛的免疫调节能力，可从多种成人和胎儿组织(如骨髓、脂肪、脐带血、胎儿肺、胎盘、羊水)中分化而来，在疾病治疗和组织工程等方面具有广阔的应用前景。

其中，以骨髓间充质干细胞(BMSCs)，脐带间充质干细胞(UC-MSCs)及脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的临床应用最为广泛。

人脐带间充质干细胞对肺气肿模型大鼠细胞因子的影响

人脐带间充质干细胞对肺气肿模型大鼠细胞因子的影响程雪松;王叶芳;王锦;韩晓燕;汪伟民【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2012(047)003【摘要】To investigate the effect of exogenous adminstration of human umbilical cord mesenchymal stem cells( HUMSC ) on cytokine levels in rat model of the porcine pancreatic elastase ( PPE ) induced emphysema. Methods Forty male adult rats were randomly divided into 4 groups: emphysema + HUMSC-treated group, emphysema + PBS-treated group, emphysema group and sham-operated group( n = 10 ). Emphysema + HUMSC-treated group was treated with 1 X 10 HUMSC cultured in 1. 0 ml PBS by tail vein. Emphysema + PBS-treated group was treated with 1. 0 ml phosphate-buffered saline( PBS ) by tail vein. Emphysema group and sham-operated group were untreated. All rats were sacrificed at day 14 post-treatment. The expression levels of IL-1 β, TNF-α and IL-10 were detected in serum and bronchoalveolar lavage fluid( BALF ) by ELJSA. Results Compared with sham-operated group, the levels of IL-1 fl, TNF-a in BALF and serum were all increased in emphysema group, emphysema + HUMSC transplantation group, emphysema + PBS transplantation group,but there were statistical significance only in BALF level of TNF-α, serum levels of IL-1 β and TNF-α. The BALF and serum levels of IL-10 in BALF and serum was significantly increased. Conclusion Thetransplantation of HUMSC have modulator effects on main cytokines of emphysema rats in vivo. HUMSC can downregulate the IL-1 β, TNF-a expression and upregulate the IL-10 expression, which may be play a potential role on intervention of emphysema and lung tissue repair.%目的研究外源性人脐带间充质干细胞(HUMSC)对肺气肿大鼠模型中细胞因子水平的影响.方法建立猪胰蛋白酶诱导的肺气肿模型,40只雄性SD大鼠随机分为HUMSC 组(经尾静脉输注1×106个HUMSC/ml)、PBS组(经尾静脉输注PBS 1 ml)、模型组(不予任何干预)、假手术组,每组10只.干预2周后处死大鼠,ELISA法检测血清及肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素10(IL-10)的表达水平.结果与假手术组比较:HUMSC、PBS、模型组血清及BALF中IL-1β、TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著降低(P<0.05);给予HUMSC干预后血清TNF-α及BALF中IL-1β、TNF-α水平较模型组、PBS组明显下降(P<0.05),而血清IL-1β未见明显改变;血清及BALF中IL-10水平均明显升高(P<0.05).结论 HUMSC干预可以影响肺气肿大鼠血清及BALF中IL-1β、TNF-α及IL-10的表达,对肺气肿大鼠炎症反应有调节作用,可能是干预肺气肿形成、修复肺组织的机制之一.【总页数】4页(P282-285)【作者】程雪松;王叶芳;王锦;韩晓燕;汪伟民【作者单位】安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥,230022【正文语种】中文【中图分类】R563.3;R392.4;R392.114【相关文献】1.人脐带间充质干细胞对新生大鼠肺纤维化细胞因子水平的影响 [J], 陈丽;吴本清;程涵蓉;涂惠英;黄进洁;丁璐2.人脐带间充质干细胞移植对缺血性脑卒中模型大鼠行为学影响的研究 [J], 张蕾;王磊;韩笑;李伟;黄传俊;成翔;杨冰;金国华;张新化3.人脐带间充质干细胞移植对大鼠流产模型妊娠结局的影响 [J], 陈肖静;杨晓清;陈薇薇;吴荣荣;谢绘绘;张玉泉4.甲泼尼龙琥珀酸钠对自身免疫性肺气肿模型大鼠氧化应激和抗内皮细胞抗体的影响Δ [J], 李佳艺; 张程; 李本雪; 张野; 张湘燕5.芪蛭皱肺胶囊对肺气肿豚鼠模型血细胞因子及血氧分压、二氧化碳分压的影响[J], 李金田;刘永琦;李娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脐带血干细胞的临床应用

胚胎干细胞：致瘤性是瓶颈，还未满足安全性旳要求。
间充质干细胞：无致瘤性、不引起免疫排斥反应、能够在体外安全旳扩增到一定数量，能够满足临床应用旳安全性要求。
脐血干细胞：技术比较成熟，能够满足临床应用旳安全性要求。
神经干细胞: 无致瘤性、能够在体外安全旳扩增，同步其特殊旳应用环境确保了其临床应用安全性。
伴随干细胞技术旳逐渐成熟，开始出现了真正意义上干细胞移植旳临床研究。
例如：2023年德国 Dusseldorf大学旳Bodo
随即，类似旳干细胞治疗在全世界迅速开展起来，虽然仍存在某些争论，但毕竟在应用于临床、真正治疗人类旳疾病上迈出了崭新旳步伐。
目前普遍以为干细胞移植治疗可广泛应用于神经系统疾病(如帕金森病)、心血管系统疾病(如心肌梗死)、血液病、糖尿病以及某些本身免疫系统疾病等。
潜在旳风险性－－有害微生物
• 因为目前干细胞移植治疗常用旳方式都要对干细胞进行一定时间旳培养保存，为确保临床使用旳人类干细胞旳安全、可靠、严格控制旳原则化程序操作显得尤为主要
• 原则化程序操作 • 严格微生物检验
问题旳处理
• 对于异源性有害基因旳导入问题，因为其主要针对核移植技术，尚处于试验阶段，所以尚不构成干细胞技术应用旳主要风险。
• 对于外界有害微生物旳带入问题能够经过原则化操作程序以及质控程序予以处理。
• 然而，干细胞旳致瘤性、免疫排斥可能性以及细胞在体外培养后旳遗传稳定性问题是由干细胞本身旳特征决定旳。干细胞旳种类不同，以上风险性旳体现也各不相同
• 问题：是不是目前全部干细胞均合用与临床治疗？
五、几种干细胞安全性比较
脐带血干细胞的临床应用
一、干细胞旳基本概念
干细胞（stem cell）：干细胞是具有自我更新、高度增殖和

人脐带间充质干细胞移植治疗Graves病小鼠的疗效

的（２５．６± ３．４）ｇ，Ｐ均＜０．０５。２６周龄时，白细胞Ｇ２组（６．７－１４．４）ｘ１０几、Ｇ３组（７．３±１．２） ×１０几，高于Ｇ０组的（４．２－４０．６） ×１０／Ｌ、Ｇ１组的（４．３±１．１）ｘ１０／Ｌ，Ｐ均＜０．０５；ＧＰＴＧ２组（３４．８－１４２．５）Ｕ／Ｌ、Ｇ３组（３６．７－１４４．７）Ｕ／
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１３．３６．００６
中图分类号：Ｒ５８１．１
文献标志码：Ａ
文章编号：１００２ — ２６６Ｘ（２０ｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｉｃｆａｃｙｏｆｕｍｂｉｌｉｃａｌ — ｃｏｒｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ＵＣ－ＭＳＣ）ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａ — ｔｉｏｎｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍｉｃｅｗｉｔｈＧｒａｖｅｓｄｉｓｅａｓｅ（ＧＤ）．ＭｅｔｈｏｄｓＦｏｒｔｙ — ｅｉｇｈｔ１８一ｗｅｅｋ — ｏｌｄＧＤｆｅｍａｌｅｍｉｃｅｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ：ｇｒｏｕｐ１（Ｇ１）ｗａｓｔｒｅａｔｅｄｉｔｗｈｐｒｏｐｙｈｈｉｏｕｒａｃｉｌ（ＰＴＵ）（５０ｍｇｘ６０ｄ），ｒｏｇｕｐ２（Ｇ２）ｗａｓｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ

脐带源间充质干细胞移植治疗肝纤维化及肝硬化的相关机制

脐带源间充质干细胞移植治疗肝纤维化及肝硬化的相关机制孙慧聪;张国尊;郭金波;冯燕;郑力搏;张晓岚【摘要】背景：肝硬化是多种原因引起的肝脏慢性病变，目前尚没有有效的治疗方法，很多研究表明，间充质干细胞对肝纤维化及肝硬化有一定的治疗作用。

目的：研究人脐带源间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化及肝硬化的治疗作用及其作用机制。

方法：应用CCl4诱导制备肝纤维化及肝硬化模型，造模后经尾静脉注射人脐带间充质干细胞。

细胞移植后采用Beckman Coulter analyzer检测人脐带源间充质干细胞移植对大鼠肝功能的影响；采用天狼猩红染色检测肝组织病理改变；应用免疫组织化学染色、Western blot和real-time Q-PCR方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶抑制剂2蛋白与mRNA在大鼠肝组织中的表达。

结果与结论：人脐带源间充质干细胞移植可以改善肝纤维化及肝硬化大鼠的肝功能。

人脐带源间充质干细胞移植后，除肝纤维化细胞移植1周组与对应模型组相比差异无显著性意义外，其余各细胞移植组肝脏组织中基质金属蛋白酶2 mRNA及蛋白表达水平明显升高，而Ⅰ、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶抑制剂2表达水平明显降低。

人脐带源间充质干细胞通过上调基质金属蛋白酶2表达，下调基质金属蛋白酶抑制剂2表达，对肝纤维化及肝硬化起到治疗作用；在致病因素持续存在的情况下，人脐带源间充质干细胞移植并不能逆转肝纤维化或者肝硬化，只能延缓肝纤维化或肝硬化的进程。

%BACKGROUND:Cirrhosis is a long-term consequence of chronic hepatic injury, which has no effective therapy. Mesenchymal stem cels have been shown to play a potential role in the treatment of liver fibrosis/cirrhosis. OBJECTIVE:To investigate the therapeutic effect and mechanism of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cels on CCl4 induced liver fibrosis/cirrhosis in rats.METHODS:A CCl4-induced liver fibrotic/cirrhotic rat model was used, and human umbilical cord-derived mesenchymal stem cels were injectedvia the tail vein after modeling. Liver biochemical profile was measured by Beckman Coulter analyzer. Histopathological changes were assessed by Sirius red staining. The expressions of colagen type I, colagen type III, matrix metaloproteinases-2 and tissue inhibitor of matrix metaloproteinases-2 protein and mRNA in liver tissues were observed by immunohistochemistry, western blot and real-time PCR, respectively. RESULTS AND CONCLUSION:Liver biochemical profile indicated the transplantation of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cels could improve the liver function of rats with liver fibrosis and cirrhosis. After cel transplantation, except 1-week cel transplantation group, the expressions of the matrix metaloproteinases-2 mRNA and protein were significantly increased, while the expressions of colagen type I, colagen type III and tissue inhibitor of matrix metaloproteinases-2 mRNA and protein significantly decreased, compared with the corresponding model groups. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cels play a role in the treatment of liver fibrosis and cirrhosis through upregulating the expression of matrix metaloproteinases-2 and lowering the expression of inhibitor of matrix metaloproteinases-2. With the continued presence of pathogenic factors, human umbilical cord-derived mesenchymal stem cel transplantation cannot reverse liver fibrosis or cirrhosis, and only delay the process of liver fibrosis or cirrhosis.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)041【总页数】8页(P6638-6645)【关键词】干细胞;移植;肝纤维化;肝硬化;脐带间充质干细胞;Ⅰ型胶原;Ⅲ型胶原;MMP-2;TIMP-2【作者】孙慧聪;张国尊;郭金波;冯燕;郑力搏;张晓岚【作者单位】河北医科大学第二医院东院消化科，河北省石家庄市 050000;河北医科大学第二医院东院消化科，河北省石家庄市 050000;河北医科大学第二医院东院消化科，河北省石家庄市 050000;河北医科大学第二医院东院消化科，河北省石家庄市 050000;河北医科大学第二医院东院消化科，河北省石家庄市 050000;河北医科大学第二医院东院消化科，河北省石家庄市 050000【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章亮点：1人脐带源间充质干细胞是一种天然生物资源，具有低抗原性、增殖能力强、产率高、易产业化和临床应用等优点，是一种极佳的间充质干细胞，而目前人脐带源间充质干细胞移植治疗肝硬化鲜有研究。

人脐带间充质干细胞移植治疗小鼠慢性输卵管炎

第３５卷
２０１ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ４年
第１期
１月
中山大学学报（医学科学版）
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＵＮＹＡＴ－ＳＥＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ）
Ｖｏ１．３５Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１４
人脐带问充质干细胞移植治疗小鼠慢性输卵管炎
李田Ｈ，李小毛，张琪，何丹，潘藜捷
（中山大学附属第三医院１．妇产科；２．肝移植中心；３．病理科；４．疫苗研究所，广东广州５１０６３０）
移植组输卵管病理切片显示，输卵管周围炎症细胞浸润较少。【结论】ｈＵＣ — ＭＳＣ移植可明显减少小鼠慢性输卵管炎的发生
和减轻其炎症程度，有可能为输卵管性不孕的临床治疗提供新的途径。关键词：间充质干细胞；脐带；输卵管炎。
中图分类号：Ｒ７１１．３文献标志码：Ａ文章编号：１６７２ — ３５５４（２０１４）０１ — ００２５ — ０７
塞、积水等慢性输卵管炎表现，病理切片观察组织形态学改变。【结果】分离培养的人脐带间充质干细胞符合间充质干细胞
的一般生物学特性。感染后８周，对照组小鼠均出现输卵管阻塞、积水等慢性输卵管炎表现，而ｈＵＣ — ＭＳＣ移植组仅２例出现输卵管阻塞及积水，对照组小鼠慢性输卵管炎的发生率明显高于ｈＵＣ — ＭＳＣ移植组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。ｈＵＣ — ＭＳＣ

移植途径对人脐带间充质干细胞治疗小鼠糖尿病效果的影响

移植途径对人脐带间充质干细胞治疗小鼠糖尿病效果的影响蒋豆蔻;李青;杨晓菲;李阳;李富荣【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(000)004【摘要】目的: 观察不同途径移植人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对小鼠糖尿病的治疗效果.方法: 利用增强绿色荧光蛋白和萤光素酶报告系统(EGFP/Luc)标记hUCMSCs,通过胰腺包膜下途径或尾静脉途径将携带萤光标记的hUCMSCs移植到链脲霉素诱导的糖尿病模型小鼠体内.移植后利用萤光素酶报告基因追踪hUCMSCs在活体内的迁移和定位;组织学检测小鼠胰岛形态变化;功能学实验动态检测小鼠血糖、血清胰岛素水平和糖耐量.结果: 活体生物发光成像显示胰腺包膜下途径移植的hUCMSCs主要定位于胰腺,尾静脉途径移植的hUCMSCs主要定位于肺,仅少量细胞向胰腺部位迁移.组织学检测发现,胰腺包膜下途径移植的小鼠胰岛边界清晰,无炎症细胞浸润;而尾静脉途径移植的小鼠胰腺组织有少量炎症细胞浸润和纤维化形成.功能学检测发现胰腺包膜下移植较尾静脉移植降低小鼠血糖作用显著,血糖可降至接近正常水平,且血清胰岛素水平明显升高,葡萄糖的调节能力显著增强.结论: 移植途径对 hUCMSCs治疗糖尿病的效果有影响.胰腺包膜下移植在降低小鼠血糖、升高胰岛素水平及改善胰岛功能方面均优于尾静脉移植.【总页数】8页(P612-619)【作者】蒋豆蔻;李青;杨晓菲;李阳;李富荣【作者单位】暨南大学第二临床医学院,深圳市人民医院,干细胞与细胞治疗重点实验室,广东深圳 518020;暨南大学医学院病理生理学系,广东广州 510632;暨南大学第二临床医学院,深圳市人民医院,干细胞与细胞治疗重点实验室,广东深圳518020;暨南大学第二临床医学院,深圳市人民医院,干细胞与细胞治疗重点实验室,广东深圳 518020;暨南大学医学院病理生理学系,广东广州 510632;暨南大学第二临床医学院,深圳市人民医院,干细胞与细胞治疗重点实验室,广东深圳 518020;暨南大学第二临床医学院,深圳市人民医院,干细胞与细胞治疗重点实验室,广东深圳518020【正文语种】中文【中图分类】R587.1;R363【相关文献】1.不同途径移植人脐带间充质干细胞治疗糖尿病大鼠 [J], 张迪;翁孝刚;王涛;陈雪辉2.人脐带间充质干细胞移植治疗小鼠复发性自然流产效果及其机制探讨 [J], 吴荣荣;张玉泉;徐云钊;陈肖静;高小月;杨晓清3.不同途径移植人脐带间充质干细胞在糖尿病大鼠胰腺组织中的定植效果比较 [J], 王宪华;连杰;翁孝刚;王涛;王晓琳;胡俊鹏4.人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠 [J], 郭璇;解军;索金荣;李英蕊;黄磊;马牧南;李静静;傅松涛5.人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠 [J], 郭璇;解军;索金荣;李英蕊;黄磊;马牧南;李静静;傅松涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人脐带间充质干细胞移植治疗CCl_4致肝硬化大鼠的病理变化

人脐带间充质干细胞移植治疗CCl4致肝硬化大鼠的病理变化高象民1，金旭鹏2，李晓飞3(1.辽宁省锦州市义县人民医院，辽宁锦州 121001；2.辽宁医学院免疫与微生物学教研室，辽宁锦州 121001；3.辽宁医学院附属第一医院消化内科，中国锦州 121001)摘要:目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，HU-MSCs)移植至CCl4所致的肝硬化大鼠体内后，肝组织的病理变化。

方法随机选取健康雄性SD大鼠35只，于其中随机选取8只作为正常组，另同样方法选取27只SD大鼠给予40%CCl4溶液每周2次腹部皮下注射，用来制备肝硬化大鼠模型，造模成功后，随机分为肝硬化组和HU-MSCs移植组，HU-MSCs移植组给予HU-MSCs 1×107经尾静脉移植，移植后3周处死所有大鼠，进行肝组织病理学检测并定量分析肝纤维化改变情况。

结果正常组和肝硬化组中均未发现阳性表达的抗人EGF-R存在，HU-MSCs 移植组中发现较多抗人内皮生长因子受体(EGF-R)的表达；三组中肝纤维化含量均具有差异性，肝硬化组含量明显增加，移植组纤维化含量较肝硬化组降低。

结论 HU-MSCs移植到肝硬化大鼠体内，能够长期存活，并改善肝组织的纤维化程度。

关键词:肝硬化；人脐带间充质干细胞；大鼠；病理中图分类号:R 555 文献标识码:B肝硬化是在各种慢性损伤因素作用下逐渐进展的肝纤维化终末阶段，临床上不可逆转[1-2]，人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，HU-MSCs)是来源于人脐带Wharton胶的原始细胞，具有多向分化和大量增殖的能力[3-4]，本研究通过对HU-MSCs移植入肝硬化模型大鼠体内，通过检测肝组织病理变化观察大鼠的改善情况，为临床治疗肝硬化提供病理学依据。

间充质干细胞移植对小鼠CD4CD25调节性T细胞表达的影响

ＣＩ）４ＣＩ）２５调节性Ｔ细胞增殖反应下降；上清液中转化生长因子８和白细胞介素】０浓度显著升高，干扰素丫浓度显著下降，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；Ｎｅｇ组与Ｐｏｓ组比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论ＭＳＣ移植能上调ａｐｏＥ小鼠ＣＤ４ＣＤ２５调节性Ｔ细胞数目并增强其功能，抑制动脉硬化炎性反应和抗动脉硬化作用。
ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＤ４ＣＤ２５ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓｉｎａｐｏｌｉｐｒｏｔｅｉｎ（ａｐｏ）Ｅｋｎｏｃｋ — ｏｕｔｍｉｃｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＢｏｎｅ
ｏｆＣＤ４ＣＤ２５ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓｉｎｍｉｃｅ
ＷＡＮＧＺｈｉ — ｘｉａｏ，ＨＥＱｉａｎ，Ｃ：ＡＩＣｈａｏ，ｅｔａｌ
‘ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｌＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ＴａｉｈｅＨｏｓｐｉｔａｌ，ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ＭＳＣｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｃａｕｄａｌｖｅｉｎ．ＴｈｅｎｕｍｂｅｒａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＣＤ４ＣＤ２５ｒｅｇｕ —

hUCMSCs对半乳糖致衰老小鼠心脏保护作用

hUCMSCs对半乳糖致衰老小鼠心脏保护作用作者：刘建亚冯文静牟婕安妮娜王仁萍毛拥军来源：《青岛大学学报（医学版）》2018年第02期[摘要]目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）对D半乳糖（Dgal）诱导的衰老小鼠的心脏保护作用及其可能的机制。

方法将24只8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和干细胞组，每组8只。

对照组颈背部皮下注射灭菌注射用水（5 mL·kg-1·d-1）8周，模型组和干细胞组颈背部皮下注射Dgal（150 mg·kg-1·d-1）8周，至Dgal注射第5周和第7周时，干细胞组分别尾静脉注射1×106个hUCMSCs，对照组和模型组尾静脉注射1×PBS（每只0.2 mL）。

采用苏木精伊红染色观察心肌组织病理改变，Western Blot检测热休克蛋白70（HSP70）和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平，RTPCR检测炎症小体相关基因NOD样受体蛋白3（NLRP3）、白细胞介素18（IL18）、白细胞介素1β（IL1β）mRNA的表达。

结果病理学检查显示，模型组出现心肌组织退行性改变，而对照组和干细胞组无相应改变。

模型组心肌组织HSP70和VEGF蛋白表达较对照组显著下降，干细胞组HSP70和VEGF 蛋白表达较模型组显著升高（F=9.76、43.87，P<0.05）。

模型组心肌组织中炎症小体相关基因NLRP3、IL18、IL1β mRNA表达较对照组显著增加，干细胞组心肌组织中炎症小体相关基因表达较模型组显著下降（F=30.04～44.45，P<0.05）。

结论hUCMSCs能有效缓解Dgal诱导的心脏老化，其机制可能与促进血管新生和抑制NLRP3炎症小体通路有关。

[关键词]间充质基质细胞;脐带;心脏;衰老;NLR家族，热蛋白结构域包含蛋白3;半乳糖[中图分类号]R329.3[文献标志码]A[文章编号] 20965532（2018）02018905衰老是一种正常的生理现象，随着年龄增长，机体出现一系列退行性改变，从而引起一系列疾病，如心血管疾病。

间充质干细胞外泌体改善衰老小鼠肝脏脂代谢及铜死亡在NAFLD中的作用研究演示稿件

最后，本研究仅关注了间充质干细胞外泌体对衰老小鼠的作用，未来可以探讨其在其他年龄段小鼠中的作用效果和机制，以便更好地应用于临床治疗。
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实验动物与分组
实验动物
选择12月龄的老年小鼠和3月龄的年轻小鼠，分别作为衰老和年轻对照组。
分组
将实验小鼠随机分为4组，分别为衰老对照组、年轻对照组、衰老+间充质干细胞外泌体组和年轻+间充质干细胞外泌体组。
实验处理与干预措施
实验处理
对实验小鼠进行高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型建立。
通过研究MSC-exosome对衰老小鼠肝脏脂代谢的影响，为NAFLD的治疗提供新的思路和方法。
研究意义
本研究对于深入了解NAFLD的发病机制和寻找新的治疗策略具有重要意义。
MSC-exosome作为一种新型的生物治疗方法，有望为NAFLD患者带来更好的治疗效果和生活质量。
本研究还将为干细胞外泌体在衰老相关疾病治疗领域的研究提供有益的参考和借鉴。
铜死亡在NAFLD中的研究现状
01
目前，铜死亡在NAFLD中的作用机制尚不完全清楚
，需要进一步深入研究。
02
针对铜死亡的治疗策略仍处于探索阶段，尚未有有效
的治疗方法应用于临床。
研究铜死亡在NAFLD中的作用有助于深入了解
03
NAFLD的发病机制，为开发新的治疗策略提供思路
。
04
研究方法与实验设计
间充质干细胞外泌体改善衰老小鼠肝脏脂代谢及铜死亡
在NAFLD中的作用研究
汇报人：XXX
2024-01-05
目录
• 研究背景与目的 • 间充质干细胞外泌体概述 • 铜死亡在NAFLD中的作用 • 研究方法与实验设计 • 结果与分析 • 结论与讨论

大鼠静脉注射人脐带胶样组织来源间充质干细胞的安全性研究

ＡｎｚｈｅｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＢｅｉｔｌｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ＆ＢｌｏｏｄＶｅｓｓｅｌＤｉｓｅａｓｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｔｒａ — ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙｏｆｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉ —
心、肺、肝及肾的大小和形态，病理学检查与对照组相比无明显改变。结论：一次大剂量尾静脉注射
ＨＵＭＳＣｓ，没有引起大鼠异常毒性反应。［关键词］人脐带胶样组织间充质干细胞；异常毒性；动物实验，大鼠［中图分类号］Ｒ４４６．７（文献标识码］Ａ［文章编号］１００７・５０６２（２０１３）０６－７８３－００６
（摘要］目的：观察大鼠静脉输注人脐带胶样组织间充质干细胞（ＨＵＭＳＣｓ）的异常毒性。方法： ① 贴块法培养男婴脐带间充质干细胞；流式细胞仪鉴定第４代ＨＵＭＳＣｓ表面抗原的表达；标准试剂盒鉴定第４代ＨＵＭＳＣｓ向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能； ②ＳＤ大鼠，１８０—１９０ｇ，１６只，分为对照组和实验

人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性

人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性何君1,2，李洋1,2，陈威1,2，郝好杰3，李名烁1,2，韩瑞红1,2，武鑫1,2，卢星辰1,2，金翠英1,2，郭珣1,2，易辉1,2，李晓岑1,2，赵颖1,2，武岩1,2，徐玉环1,21.中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，北京，1000212.中国医学科学院糖尿病研究中心，北京，1000053.解放军总医院生命科学院基础医学所，北京，100853【摘要】目的探讨C57/BL6J小鼠重复多次尾静脉输注人脐带间充质干细胞后的免疫反应和毒性。

方法将SPF级别的32只C57/BL6J小鼠随机分为阴性对照组、细胞移植组，每组16 只，雌雄各半，细胞移植组小鼠尾静脉注射分离培养的第5代人脐带间充质干细胞，一次5×106/只，每周注射一次，连续注射4周；阴性对照组每次注射相同容积的PBS。

注射后后观察小鼠的一般症状，末次注射后1周、4周进行血细胞计数、血生化、免疫反应指标、脏器质量测定和组织病理学检查。

结果细胞移植组小鼠血细胞计数、血生化、脏器重量和脏器系数与对照组无显著性差异（P > 0.05），脏器组织病理学在光镜下检查结果与对照组无形态学差别，以及免疫结果测定（T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+）与对照组无显著性差异( P> 0.05)，较对照组有显著性差异（P 0.01）。

结论人脐带间充质干细胞重复多次尾静脉输注C57/BL6J小鼠是安全可行的，对受者无明显免疫反应和毒副作用。

【关键词】人脐带间充质干细胞；静脉输注；重复多次【中图分类号】R332A safety study of intravenous injection of human umbilical cord mesenchymal stem cells in miceHE Jun1,2, LI Yang1,2, CHEN Wei1,2, HAO Hao-jie3, LI Ming-shuo1,2, HAN Rui-hong1,2, WU Xin1,2, LU Xing-chen1,2, JIN Cui-ying1,2, GUO Xun1,2, YI Hui1,2, LI Xiao-cen1,2, ZHAO Ying1,2, WU Yan1,2, XU Yu-huan1,2,1.Institute of Laboratory Animal Science，Chinese Academy of Medical Science，Beijing 100021，China2.Diabetes research center，Chinese Academy of Medical Science，Beijing 100005，China3.Institute of Basic Medicine Science, College of Life Science, Chinese PLA General Hospital，Beijing 100853，China[Abstract]Objective: To study the toxicity of intravenous injection of human umbilical cord mesenchymal stem cells in C57/BL6J mice with repeated administrations. Methods: 32 SPF C57/BL6J mice were randomly divided into negative control group and HUMSC transplantation group, of equal gender. HUMSCs were isolated and subsequently cultured through 5 passages invitro. 2×106 HUMSCs were injected each mice of transplantation group via tail vein once 1 week for 4 weeks, and the equal quantity PBS were injected to control group mice. Mice were euthanatized on the day of 1 week (8 mice per group) and 4 weeks(all survived mice) after the last treatment following the schedule. Toxicity was evaluated by clinical observations, pathology (blood cell counts, clinical biochemistry), immunologic consequences, visceral organs weight and anatomic pathology. Results:No significant difference in hematological and biochemical parameters between HUMSC transplantation group and control group (P> 0.05). There was also no significant change in organ weight or organ coefficient between the two groups(P > 0.05). There was no significant change in the subpopulation of T-cells (the percentage of CD3, CD4, CD8 T cells, and the ratio of CD4 and CD8 T cells). HUMSC transplantation group did not show any histopathological change in the viscera organs compared to control group. Conclusion:Results have suggested that intravenous injection of HUMSCs in C57/BL6J mice with repeated administrations is safe and feasible. No side effects and immune response were found in recipients.[Key words]Human umbilical cord mesenchymal stem cell, Intravenous injection, Repeated administrations【作者简介】何君（1969-），女，副研究员，博士，研究方向：药理学和毒理学【基金项目】科技部863课题“干细胞治疗糖尿病的临床前方案优化及临床应用研究”（2011AA020113和2013AA020105），十一五重大新药创制专项(2009ZX09303-008) 863 project of stem cells to treat diabetes clinical scheme optimization and clinical application research of the ministry of science and technology（2011AA020113 and 2013AA020105）, The 11th five-year fund of drug discovery projects(2009ZX09303-008)脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）具有多种作为种子细胞的优良特性，如在不同的诱导条件下可以向胰岛样细胞、肝样细胞、神经元样细胞、内皮细胞等进行分化[1-5]，连续传代培养和低温冻存后仍具有多向分化潜能，能造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制，并且干细胞来源丰富、容易获得、增殖能力强,因此人脐带间充质干细胞被认为最具临床应用前途[6-11]。

负载人脐带间充质干细胞的水凝胶对糖尿病小鼠皮肤创面愈合的疗效

负载人脐带间充质干细胞的水凝胶对糖尿病小鼠皮肤创面愈合的疗效刘司麒;吴明芮;乔铃然;颉丽英;陈思宇;韩之波;左琳【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2023(27)1【摘要】背景:目前,缺乏有效的治疗方法促进糖尿病患者的皮肤创面愈合。

人脐带间充质干细胞已被证明对皮肤再生具有多种治疗作用,可注射水凝胶具有良好的生物相容性和可调节性,可以提高干细胞治疗的效果。

目的:以负载人脐带间充质干细胞的水凝胶为切入点,观察其对小鼠糖尿病皮肤创面的疗效,并探索可能的作用机制。

方法:①链脲佐菌素溶液连续腹腔注射5 d构建C57BL/6J小鼠糖尿病模型,经尾静脉采血测血糖值评估模型是否建立成功。

②造模成功后,利用打孔器建立小鼠背部皮肤损伤模型,水凝胶组给予纯水凝胶敷胶治疗,复合水凝胶组给予负载有人脐带间充质干细胞的水凝胶治疗,对照组给予等量生理盐水治疗,治疗第7,14天观察创面愈合情况。

结果与结论:①敷胶后的14 d内,水凝胶组、复合水凝胶组小鼠皮肤创面面积明显低于对照组(P<0.05),复合水凝胶组的皮肤创面面积明显低于水凝胶组(P<0.05);②苏木精-伊红染色结果显示:复合水凝胶组创面肉芽组织新生率明显高于水凝胶组和对照组(P<0.05);③Masson染色结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织胶原沉积率明显增加(P<0.05);④免疫组化CD31染色结果显示:复合水凝胶组创面组织中新生微血管数量明显高于水凝胶组和对照组(P<0.05);⑤免疫组化CD45染色结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织中炎症面积明显减少(P<0.05);⑥免疫荧光染色和qRT-PCR结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织中M2巨噬细胞及其标志性因子白细胞介素10表达显著升高,且M1巨噬细胞及其标志性因子白细胞介素6表达明显降低(P<0.05);⑦上述结果提示:负载人脐带间充质干细胞的氯化壳聚糖-β-甘油磷酸钠复合水凝胶通过促进糖尿病创面肉芽组织和微血管形成,减轻炎症反应,从而促进创面愈合。

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注射后后观察小鼠的一般症状，末次注射后1周、4周进行血细胞计数、血生化、免疫反应指标、脏器质量测定和组织病理学检查。

结论人脐带间充质干细胞重复多次尾静脉输注C57/BL6J小鼠是安全可行的，对受者无明显免疫反应和毒副作用。

有文献报道将人脐带间充质干细胞移植大鼠和食蟹猴未见明显毒性反应，认为人脐带间充质干细胞异种移植是安全可行的[12-14]，但未见有移植到小鼠体内的安全性详细研究，因此本实验对C57/BL6J小鼠采用尾静脉多次重复输注人脐带间充质干细胞，通过检测输注后不同时间点小鼠的各项生化和免疫指标，探讨静脉输注脐带间充质干细胞的安全性，为开展人脐带间充质干细胞的临床应用提供参考，也为今后进行脐带间充质干细胞安全性评价和在体研究选择花费低、常规易得的实验动物提供初步的实验依据。

1 材料和方法1.1主要试剂及仪器PE/FITC标记的大鼠抗小鼠CD4、CD8单抗，以及Percp标记的仓鼠抗小鼠CD3单抗均购自BD公司；抗小鼠CD19单抗购自eBioscience公司；抗小鼠IgG试剂盒（超敏二步法免疫组化检测试剂）购自美国GBI公司。

FACSCalibur流式细胞仪(美国BD)、7100全自动生化分析仪（日本日立）、Pentra DX120全自动血液分析仪（法国ABX）、OPTIPHOT-2显微镜（日本尼康）。

1.2 动物来源及饲养5～7周龄SPFC57/BL6J小鼠购自北京华阜康生物科技股份有限公司【SXK（京）2009-0004】，饲养于中国医学科学院医学实验动物研究所新药安全评价研究中心啮齿类动物屏障设施【SYXK（京）2008-0012】，饲料经60Co照射，饮用水及垫料均经高压消毒无菌处理，对小鼠的实验操作均于无菌超净台中进行。

1.3 实验材料来源人脐带间充质干细胞由解放军总医院生命科学院基础医学所培养和制备成细胞悬液，使用前均经流式细胞仪检测，细胞表面抗原符合间充质干细胞的表型特征：CD34-、CD45-、CD73-、HLA-DR-、CD90+、CD105+。

具体制备及表型检测方法见该单位发表的文章[15]。

1.4 动物分组及干细胞输注C57/BL6J小鼠随机分为细胞移植组、阴性对照组，每组16只，雌雄各半。

收集培养的第5代人脐带间充质干细胞，采用PBS调整细胞浓度为2.5×1010 /L，细胞移植组每只小鼠尾静脉注射0.2 ml/次（即5×106细胞/只/次），每周注射一次，连续注射4周；阴性对照组小鼠每只尾静脉注射0.2 mL PBS。