血清酶类测定

ALT测定不是
在最佳条件下进行，反应中丙酮酸生成量与ALT活性不能呈现良好的线性关系
(这是赖氏法的最大缺陷)，其标准曲线不呈直线而为抛物线。
活性单位
赖氏法以卡门单位报告测定结果 卡门单位定义：血清1ml，反应液总体积3ml， 25℃，波 长340nm，比色杯光径1.0cm，每分钟吸光度下降0.001A 为一个单位（相当于每升反应体系中0.1608µmol NADH被 氧化）。
ALT在肝脏疾病中的应用价值
急性肝炎
ALT急性明显升高，常达200U以上，病情较重者可达400-600U以上， 甚至更高，个别重型病人甚至可超过1000U。ALT越高，肝脏细胞损害越 严重。
慢性肝炎
慢性活动性肝炎：ALT持续轻度升高几十或100U以上（100～ 200U）
重型肝炎
•由于肝细胞发生大量变性，坏死，使ALT大量进入血液，因此，ALT 迅速升高，高达数百～1000U以上，如果ALT含量越高，上升越快， 说明肝细胞坏死严重，病情进展也越快。 •当病情发展到一定的严重程度，肝细胞大量坏死，肝脏生产ALT的能力 丧失，这时血液中的ALT降低，但是黄疸却持续升高（胆红素上升）， 这种现象即所谓“酶胆分离”，往往提示病情正在恶化，常是肝坏死征 兆。
血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性测定
[测定方法]
一、速率法（连续监测法 ） 参考方法
L 门冬氨酸 酮戊二酸ASTL 谷氨酸 L 草酰乙酸 L 草酰乙酸 NADH H MD L 苹果酸 NAD
NADH在340nm处有特征吸收峰，连续监测NADH消耗引 起的340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率（－ △A/min）计算AST活性
原理：
赖氏比色法
丙氨酸 +α-酮戊二酸 A丙LT酮酸 + 谷氨酸 37°pH7.4
2,4-二硝 基苯肼
α-酮戊二酸苯腙
丙酮酸苯腙
(在碱性条件下呈红棕色) (在碱性条件下呈红棕色)
选择在500-520nm处检测，丙酮酸苯腙的显色强度约为α-酮戊二酸苯腙的3倍
必须降低底物α-酮戊二酸及2,4-二硝基苯肼的浓度
方法评价
1. 操作简便，不需要紫外分光光度计，易于普及，所用的 酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正，使其结果 与速率法较为一致，能较好反映酶的真实活性。故卫生 部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用 赖氏法。
2. 不适用自动分析仪；试剂稳定性差,底物缓冲液不易保存 (易长菌);由于赖氏法必须降低底物α-酮戊二酸及2，4-二硝 基苯肼的浓度，造成ALT测定不是在最佳条件下进行，反应 中丙酮酸生成量与ALT活性不能呈现良好的线性关系，这是 赖氏法的最大缺陷。
氨基转移酶活性测定
氨基转移酶又称转氨酶，在机体内多达60余种，广泛存在于肝 脏、心肌、骨骼肌、肾、脑、胰、肺、白细胞、红细胞中。
转氨酶
A-NH2+B
A+B-NH2
其中以丙氨酸氨基转移酶(ALT或GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶 (AST或GOT)两种最为重要，它们催化机体内氨基酸的转氨基反 应：
ALT L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 ↔ 丙酮酸 + L-谷氨酸
评价
1. 该ALT测定法中存在两个消耗NADH的副反应
血清中存在的游离α-酮酸（如丙酮酸）和增多的谷氨酸脱氢 酶（GLDH）能消耗NADH，使测定值偏高。
双试剂法：血清与缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保温 5min，使样品中所含内源性α-酮酸（如丙酮酸）引起的副反应进 行完毕。然后，加入α-酮戊二酸启动ALT的催化反应，在波长 340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降 速率(-△A／min)，计算出ALT活力单位。（ALT测定的首选方法）
二、血清酶变化的病理生理机制
（一）细胞酶释放
1、细胞内外酶浓度的差异：
对于非血浆特异酶，细胞内外浓度差可在千倍以上，因此只要有少 量细胞坏死或者细胞有轻度病变，血中酶浓度就可能明显升高。
2、酶在细胞内定位与存在形式： 最容易释放入血的是胞质中游离的酶，而在 细胞亚显微结构中的酶则较难溢出
3、酶蛋白分子量的大小：
AST L-天门冬氨酸 + α-酮戊二酸 ↔ 草酰乙酸 + L-谷氨酸
血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定 [测定方法]
一、速率法（连续监测法 ） 参考方法 原理
L 丙氨酸 酮戊二酸 ALT L 谷氨酸 L 丙酮酸
L 丙酮酸 NADH H LD L 乳酸 NAD
NADH在340nm处有特征吸收峰，连续监测NADH消耗引 起的340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率（－ △A/min）计算ALT活性
等，其升高的幅度与运动量、持续时间、运动频率及 骨骼肌所含的酶量有关。 5.妊娠 胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、 LD、LAP和ALT（少数）等，引起血清中这些酶活性升 高。 6.其他 一些酶活性与体重、身高的增长、体位改变、昼夜变 化及家庭因素有关。
四、酶的区域化分布
血清酶
丙氨酸氨基转移酶 门冬氨酸氨基转移酶 肌酸激酶 乳酸脱氢酶 碱性磷酸酶 酸性磷酸酶 -谷氨酰转移酶 5-核苷酸酶 单胺氧化酶 -淀粉酶 脂肪酶 谷氨酸脱氢酶 异柠檬酸脱氢酶 胆碱酯酶 山梨醇脱氢酶 鸟氨酸氨基甲酰转移酶 卵磷脂胆固醇酰基转移酶
酶的释放速度大致与酶的分子量成反比
（二）血中酶的清除：
一般以血中酶的半寿期来代表酶从血中清除快慢
AST 半寿期 17±5h ALT 半寿期 47±10h （三）酶合成异常：
1、合成减少： 对于血浆特异酶，细胞内酶合成下降
是引起血中酶变化的重要因素
2、合成增加： （1）癌细胞 LD
（2）骨骼疾病 ALP（碱性磷酸酶） （3）前列腺癌 ACP（酸性磷酸酶）
五、酶活性测定在临床诊断中的应用
（一）在诊断肝胆疾病中的应用
反映肝细胞实质病变：ALT、AST 反映肝细胞合成功能：ChE、LCAT 反映胆道阻塞病变：ALP、GGT
反映肝纤维化病变：MAO
（二）在诊断急性心肌梗死中的应用
CK-MB，LDH1，AST
（三）在诊断急性胰腺炎中的应用
AMY，LPS
（四）在诊断骨骼疾病中的应用
(1)肝胆疾病：急性病毒性肝炎、慢性活动型肝炎、脂肪肝、肝癌、
肝硬变活动期、中毒性肝炎、胆结石、胆管炎和胆囊炎等。
(2)心血管疾病：急性心肌梗死、急性心肌炎、急性心力衰竭、脑出
血等。
(3)骨骼肌疾病：多发性肌炎、进行性肌营养不良等。 （4）一些药物和毒物可引起ALT活性升高：如氯丙嗪、异菸肼、
苯巴比妥、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等
ALP
（五）在诊断肌肉疾病中的应用
AST，CK，LDH，ALD
（六）在诊断前列腺疾病中的应用
ACP
（七）在诊断肿瘤中的应用
同工酶
第二节 临床常用血清酶活性测定
标本（血清或血浆）
临床酶学测定酶之前，标本还要经过采集、分离和储存 等一系列处理过程。而酶在血中处于一个动态变化过程， 血液离开机体后还会有一定变化。因此在其中任何一个 阶段处理不当，都有可能引起测定值的变化。
[参考区间]
速率法： 男性：5～40 U/L（反应温度为37℃，试剂不含P5P） 女性：5～35 ULeabharlann L（反应温度为37℃，试剂不含P5P）
赖氏比色法： 5～25卡门单位（反应温度为37℃）
[临床意义]
ALT广泛分布于全身各组织器官，尤以肝细胞中含量最 多，其次是肾脏、心脏及骨骼肌，通常只有极少量释放入 血液，所以血清中此酶的活力很低，当这些组织病变时， 细胞坏死或通透性增加，细胞内酶大量释放入血，使血清 中该酶活力显著增高。
肝硬化
ALT增高程度与肝硬化的活动度和肝组织炎症改变及肝细胞损害 程度相一致。对ALT进行监测有助于对肝硬化病情的判断。若是 静止性肝硬化，则ALT维持正常 ；肝硬化病人的转氨酶出现较大 幅度的升高，提示病情可能发展成活动性，须引起警惕。
肝癌
80%—90%肝细胞都是在肝硬化基础上发生的，因此，在早期，ALT是否 增高主要决定于肝硬化的活动程度。若是静止性肝硬化，则ALT维持正常， 因为肝细胞发生癌变时，细胞并没有坏死破坏，ALT没有释放出来，因此， ALT没有升高，或ALT有轻度或中度增高。
尽量用血清标本：
大多数抗凝剂都在一定程度上影响酶活性，临床上 除非测定与凝血或纤溶有关的酶，一般都应以血清 作为首选测定标本。
及时测定，如不能及时测定，应放入冰箱 保存（但有些标本不能冷冻）
• 为防止酶蛋白变性 ，一般至少应在血清分离后的 当天进行测定，否则应放冰箱冷藏
• 有些酶如LD及其同工酶(LD4和LD5)在低温(特别是 20℃冰冻)可引起不可逆性失活，反而不如室温稳定 （“冷变性”）。
ALT AST CK LDH ALP ACP -GT 5-NT MAO AMS LPS GLDH ICD CHE SDH OCT LCAT
符号
来源
肝、肾、心 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、脑 心、肾、骨骼肌、肝、肺 小肠、胎盘、肝、肾 前列腺、红细胞、血小板 肝、胆、肾、小肠 肝、胆道 肝、肾、脑 胰、唾液腺 胰 肝 肝、胎盘、心 肝 肝 肝 肝
急性肝炎的AST/ALT均值为0.56:1 肝硬化的AST/ALT均值为1.13：1 肝癌组AST/ALT均值为2.41：1 急性肝坏死组AST/ALT均值为3.61：1
2.血清中的AST也可来源于肝细胞，各种肝病 可引起血清AST的升高，有时可达1200卡门单 位，中毒性肝炎还可更高。
3.肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起血 清AST的轻度增高。
AST/ALT比值大小有助于临床判断肝病严重程度
➢ 肝细胞中的总含量： AST（主要存在于肝细胞线粒体内）＞ALT（主要存在于肝细胞胞浆 内） ➢肝细胞轻度损伤时主要是胞浆酶释放出来，血清中ALT＞AST；而肝细 胞重度损伤时胞浆酶、线粒体酶均释放出来，血清中AST＞＞ALT；随 着肝病由轻变重，AST/ALT的比值就由＜1变为＞1
标本应避免溶血：
大多数酶在血细胞中的含量比在血浆中高得多 ，少量 血细胞的破坏就可能引起血浆中酶明显升高。如红细胞 内的LD、AST和ALT活性分别较血清中高150、15和7 倍左右，故测定这些酶时，样品应避免溶血。
及时分离血清（血浆）：
静脉采血后，必须在1-2h内及时离心，将血清与血 细胞、血凝块分离，以免血细胞中的酶通过细胞膜 进入血清而引起误差。
（四）其他： 测定值受抑制剂和活化剂影响
三、血清酶的生理变异
1.性别 少数酶如CK、ALP及GGT等有性别差异，与血清酶的 来源组织有关。
2.年龄 血清酶的活性随年龄而变化，ALP和GGT到老年时可 有 轻度升高。年龄差异也见于同工酶。
3.进食 过量饮酒可使血清GGT明显升高。 4.运动 多种血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT
（二）赖氏比色法
L-天门冬氨酸 + α-酮戊二酸
AST ↔ 草酰乙酸 + L-谷氨酸
自发↓脱羧 丙酮酸
[参考区间]
速率法：8～40 U/L（反应温度为37℃，试剂不含P5P）
赖氏比色法： 8～28卡门单位（反应温度为37℃）
[临床意义]
1.AST广泛分布于全身各组织器官，在心肌细 胞内含量最多，当心肌梗死时，血清中AST活 力增高，在发病后6～12h之内显著增高，在 48h达到高峰，约在3～5d恢复正常。
血清酶类测定
第一节 概述
一、血清酶的来源
血浆特异酶
为血浆蛋白的固有成分，含量高于其他组织，在血浆中 发挥特定的催化作用。多数由肝脏合成并以酶原形式分 泌入血，在一定条件下被激活起作用。与凝血有关的酶 或酶原、ChE、Cp及LPL等。
非血浆特异酶
外分泌酶：由外分泌腺合成并分泌进入血浆的酶,包括PAMY、P-LPS、前列腺ACP等。 细胞内酶：存在于细胞内进行物质代谢的酶，随着细胞的 不断更新或破坏可少量释入血液，细胞内外浓度差异悬 殊，当其大量出现于血清中时，提示酶的来源组织细胞 受损，最常用于临床诊断。
2.在IFCC推荐的试剂盒中含有P5P，这是转氨酶的辅基， 能使血清中ALT发挥最大活性。
（二）定时比色法（两点法）
国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min）
三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度 都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。