实验二血清总蛋白测定

含氮量达 66% ，加入假奶粉后，会使假奶 粉总体含氮量升高，达到国家标准。
方法
酚试剂法
原理
Leabharlann Baidu
蛋白质中的酪氨酸和色氨酸可使磷钨酸和磷 钼酸还原为钨蓝和钼蓝，进行比色测定。 灵敏度高，可用于微量蛋白质的测定。
特点
适合测定单一蛋白质，易受还原性化合物的
干扰。
方法
直接紫外吸收法 蛋白质中芳香族氨基酸含有共轭双键，在
本实验采用双缩脲法测定血清中总蛋白含量。
实验原理
试剂与器材
试剂与标本
1、6 mol/L NaOH 溶液 2、双缩脲试剂（硫酸铜结晶、酒石酸钠钾、碘化钾） 3、双缩脲空白试剂 4、60~70 g/L 蛋白质标准液 5、血清
主要器材
分光光度计
操作步骤
加入物
空白管 标准管×2 测定管×2
0.05 － － 4.0 － 0.05 － 4.0 － － 0.05 4.0
原理
280 nm处有一吸收峰进行比色测定。
灵敏度高，不破坏样品，可保持样品生物活 特点
性、回收全部蛋白质。
准确性受芳香族氨基酸含量影响，不适合组 成复杂的蛋白质标本测定。
方法
氨基黑、丽春红、 染料结合法 考马斯亮兰
在酸性条件下，带正电荷的蛋白质可与染料
原理 阴离子反应而产生颜色改变。
白蛋白常用溴甲酚绿或溴甲酚紫等染 料结合法测定。
新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月上升，1年后达成人水平。
临床意义
血清TP浓度下降： 常见于血清白蛋白含量下 降，少数由免疫球蛋白含 量的明显下降引起；其他 血清蛋白质减少，一般不 能在TP浓度中得到反映。 血清TP浓度增高：
主要见于慢性炎症等所
致的多克隆免疫球蛋白 增多，以及浆细胞病时 单克隆免疫球蛋白的显 著增多。
方法 凯氏定氮法 测定样品中氮含量后，根据蛋白质平均含氮 原理
量16%计算出蛋白质的浓度。
经典的蛋白质测定方法，结果准确性好，精
特点
密度高，是公认的参考方法，用于标准蛋白
质的定值和校正其他方法。 但操作复杂，费时，不适合临床常规测定。
毒奶粉事件——三聚氰胺
三聚氰胺化学式： C3N6H6 ，分子量： 126 。
蒸馏水 标准液 血清 双缩脲试剂
混匀后于37℃水浴15 min，以蒸馏水调零， 540 nm处测定各管吸光度。
标准液浓度：70.0g/L。
结果计算
测定管 血清总蛋 吸光度 白浓度（g/L） =
× 标准液浓度
参考区间
标准管 吸光度
正常成人血清总蛋白浓度：
立位行走：64~83 g/L 静 卧： 60~78 g/L
血清总蛋白测定
学习要求
1 2
掌握双缩脲法测定血清总蛋白的基本 原理和方法 了解血清总蛋白的测定方法
掌握血清总蛋白的参考区间和临床意义
3
1
血清总蛋白测定的理论依据
假定： 1 、所有蛋白质都是单纯的多肽链，糖脂类和 金属有机物等不计在内，含氮量平均为16%。 2、各种蛋白质与化学试剂的反应性一致。
血清总蛋白的测定方法
注意事项
双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是结合铜离子，维持
铜离子在碱性溶液中的溶解度，加入碘化钾可以防止铜离子 自动还原成一价氧化铜沉淀。 黄疸、严重溶血、葡萄糖、酚酞、磺溴酞钠、硫酸铵、 Tris及部分氨基酸对本法有明显干扰，可设标本空白管来消
除。
严重脂浊会干扰比色。 本法可用于血清总蛋白浓度的标化。
响浊度形成的干扰因素多。
方法
双缩脲法
原理
蛋白质中的连续肽键在碱性溶液中可与铜离 子作用产生紫色的络合物，再进行比色测定。 对各种蛋白质呈色基本相同，特异性和准确
特点
度好，显色稳定，试剂单一，方法简便，是 临床常规测定中首选方法。 但灵敏度较低。
血清TP常用双缩脲法测定，凯氏定氮法 可作为血清总蛋白二级标准品的定值方法。 其他方法可用于尿液、脑脊液、胸腹腔积液、 组织提取液、纯化蛋白等样品中TP的测定。
简便、快速、灵敏。
特点 但不同蛋白质与染料的结合力不一致，染料 有吸附作用，可造成仪器污染。
方法
比浊法 三氯乙酸、磺基水杨酸等酸类能与蛋白质结
原理
合而产生微细沉淀，由此引起的悬浮液浊度
大小与蛋白质的浓度成正比。 操作简便、灵敏度高，可用于尿液和脑脊液
特点
蛋白质浓度低的样品测定。 但各种蛋白质形成的浊度有较大的差别，影