中药分析

化学键合固定相是用硅烷化剂对硅胶进行化学修饰， 因为覆盖和修饰不完全，通常硅胶表面仍存有游离的硅醇 基。为了克服游离硅醇基的影响，可采取以下措施： 1. 改变流动相：①在流动相中加入硅醇剂抑制剂，竞争或 部分阻断硅醇基的影响。②在一定PH下，流动相中加入 表面活性剂，通过与生物碱类成分生成离子对而掩蔽其
碱性集团，使之不与固定相表面的硅醇基作用。③在流
动相中加入季铵盐试剂，季铵盐亦可掩蔽固定相表面的 硅醇基，阻断生物碱与硅醇基的结合。④在流动相中加 入一定浓度的电解质缓冲盐。
2.改进固定相
封尾技术可以让填料的键合更彻底。一般是在键合反应结 束后，用TMCS等进行后续处理，尽量减少参与硅醇羟基，增加 单体覆盖度。可通过选择不同产品达到目的。 正相HPLC常用的固定相有极性化学键合相和硅胶。正相 HPLC色谱常用的流动相为：二氯甲烷-甲醇-氨水等。在流动相 中加入的氨水等为碱性改善剂，是为了避免硅胶上弱酸性的硅 醇基存在所造成的拖尾现象。一般反相HPLC较正相HPLC更为
（四）高效液相色谱法
高效液相色谱法是生物碱类成分定量分析最常用的方法，尤 其适用于单体生物碱成分的含量的测定。根据生物碱类化 合物碱性强弱不同，存在形式不同，可选用液-液分配色 谱法、液-固吸附色谱法以及离子交换色谱法等，其中液-
液分配色谱法应用最多。 在液-液分配色谱法中，反向色谱在生物碱类成分的分析方面 应用最广。反相高效液相色谱中一般采用非极性化学键合 固定相，如ODS，C8。最常用的流动相为甲醇-水、乙腈水等混合溶剂。
常用。ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（五）气相色谱法
气相色谱法只适用于有挥发性、热稳定的生物碱类 成分的含量测定。例如麻黄碱、槟榔碱。 挥发性生物碱成分进行气相色谱分析时，供试品溶 液一般应采用冷提取，净化的过程也要避免加热，以防成 分流失，最后需要三氯甲烷等低极性有机溶剂为溶媒制备
成供试液
（六）毛细管电泳法
毛细管电泳法在中药成分分析中的应用虽然起步晚， 但发展迅速，在生物碱类成分分析中已有较多应用。生物 碱能解离带正电荷，根据Pka的不同，可采取毛细管区带
电泳模式分离结构相似的生物碱。在分析时，除可根据
Pka的不同选择缓冲液PH，还可根据结构上的细微差异适 当加入一些添加剂增加选择剂以增加选择性和分离度。
2.比色法
（2）雷氏铵盐：雷氏盐（NH4[Cr(NH3)2(SCN)4 ])在酸性介 质中可与季铵累生物碱类成分定量地生成难溶于水的有色 的生物碱雷氏盐沉淀（BH[Cr(NH3)2(SCN)4 ])(单盐)。季铵 类生物碱分子中有几个季铵氮原子，即与几分子雷氏盐结 合。 生物碱雷氏盐沉淀易溶于丙酮，因此，可将此沉淀 滤过洗净后溶于丙酮直接比色测定。但应注意其丙酮溶液 所呈现的吸收特征是由于分子结构中硫氰酸铬铵部分，而 不是结合的生物碱部分，所以需换算成生物碱的含量。