腺病毒载体产品

产品——腺病毒产品（Adv）
腺病毒载体质粒
携带报告基因的腺病毒载体（Ad5、Ad5F35）
携带治疗基因的腺病毒
AdMax腺病毒载体包装系统
腺病毒相关检测试剂
腺病毒载体质粒
在AdMax TM腺病毒载体包装系统中，Kit D为广大科研学者常选用的试剂盒之一。

为了方便研究者使用，本公司可单独提供该试剂盒中的pDC315、pDC316、pDC311、pDC312腺病毒载体质粒。

pDC315和pDC316的区别在于多克隆位点的差异，pDC311和pDC312与前两者的区别是无CMV和poly A，方便插入完整表达盒。

客户可根据质粒构建需要任意选择。

pDC315和pDC316载体质粒除了可以作为腺病毒包装的穿梭质粒外，还可以作为真核表达质粒。

pDC316-EGFP-U6 是siRNA通用腺病毒载体质粒。

它是以pDC316 质粒为骨架改造的，启动子是人U6 启动子，同时表达EGFP，便于示踪和估计转导效率。

请点击下面链接：
>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC315（AdMax Kit D）说明书[pdf]
>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC316（AdMax Kit D）说明书[pdf]
>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC311（AdMax Kit D）说明书[pdf]
>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC312（AdMax Kit D）说明书[pdf]
>>> 腺病毒载体siRNA穿梭质粒pDC316-EGFP-U6说明书[pdf]
目录号产品名称Promoter Poly A 浓度规格价格
Ad0001 pDC316-EGFP-U6 hU6 --- 1ug/ul 10ul 4000.00
PD-01-25 pDC311 无无1ug/ul 10ul 3000.00
PD-01-26 pDC312 无无1ug/ul 10ul 3000.00
PD-01-27 pDC315 mCMV SV40 1ug/ul 10ul 3000.00
PD-01-28 pDC316 mCMV SV40 1ug/ul 10ul 3000.00
携带报告基因的腺病毒载体（Ad5、Ad5F35）
公司提供3种报告基因（EGFP，lacZ，Luc）和2种血清型（Ad5, Ad5F35)的腺病毒载体产品。

另外还提供不携带任何外源基因的对照病毒Ad5-Null和Ad5F35-Null。

研究者可以根据自己的需要选择这些产品，用来探索载体对细胞的转导效率；体内不同给药途径的基因表达和分布；比较不同载体的转导特性等。

３种报告基因各有特点：GFP或EGFP基因在细胞内表达（非分泌蛋白），在紫外光激发下发绿色荧光，因此便于在荧光显微镜下观察活细胞或冰冻切片；LacZ基因编码β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase），用Ｘ-gal染色液染色显示蓝色；Luc基因则便于进行表达产物定量检测，检测方法灵敏。

目录号产品名称背景promoter 规格价格
Ad0110d Ad5-Null E1、E3缺失mCMV 1.0×1011v.p. 1000.00
携带治疗基因的腺病毒
公司为客户提供重组腺病毒载体的构建、包装、生产、纯化、质量检定等服务。

病毒载体的血清型包括Ad5和Ad5F35两种。

包装系统采用的是Microbix公司的AdMax系统。

该系统采用的mCMV启动子是一种超强启动子，比hCMV启动子的活性强若干倍。

这个特点使产生的腺病毒还可用于表达和制备重组蛋白。

公司备有常见基因的cDNA文库，客户可以咨询公司市场部获得相关信息。

AdMax腺病毒载体包装系统
由腺病毒载体的鼻祖Dr. Frank L.Graham创建的AdMax TM腺病毒载体包装系统,真正实现了高效、简便而快速地获得重组腺病毒的目标，并且病毒的生产效率（每个细胞产生病毒的数量) 明显提高。

该包装系统包括AdMax 系统(Kit D、E)和AdMax Hi-IQ系统(Kit H、J)等，授权加拿大Microbix Biosystems Inc.公司在全球销售。

本元正阳公司授权成为该系统在中国地区（包括香港和台湾）的独家销售代理。

AdMax系统适于大多数目的基因的构建；而对于有细胞毒性的基因，AdMax Hi-IQ系统更合适。

当插入的外源基因表达产物对细胞具有毒性时，会严重影响重组病毒的产率。

这也是携带不同基因的重组腺病毒的产率有很大差别的原因之一。

AdMax Hi-IQ腺病毒载体系统在设计上巧妙地使重组腺病毒在293细胞中扩增的过程中不表达外源基因，而转导靶细胞时外源基因就能正常表达。

AdMax系统还包括高质量、低代次的HEK293细胞。

293细胞的质量对于腺病毒重组和扩增都至关重要。

>>> AdMax TM腺病毒载体系统报价表
>>> AdMax TM Hi-IQ腺病毒载体系统报价表
>>> AdMax TM腺病毒载体系统操作手册
AdMax TM腺病毒载体系统简介
腺病毒载体系统是目前运用最广的病毒载体之一，它被广泛用于基因治疗、基因功能性研究、反义治疗、疫苗开发等领域。

AdMax TM腺病毒系统是由腺病毒载体鼻祖Dr. Frank Graham在1999年创建的一套重组腺病毒构建系统，该系统基本原理是通过Cre-loxP或FLP-frt重组酶，使共转染到293细胞中的腺病毒载体穿梭质粒和辅助质粒（腺病毒基因组质粒）在重组酶的作用下产生重组腺病毒。

得到的重组病毒是E1/E3缺失的复制缺型腺病毒
（/040301.html）。

与目前使用最普及的AdEasy系统相比，有一定的优势：AdMax系统只需要2~4周就能完成从质粒构建到重组出毒，成功率大于98%（其中95%的克隆含有目的基因），因在真核细胞内重组出毒，保持了对腺病毒的生存压力，有助于重组腺病毒的基因组的完整性；而AdEasy系统的出毒成功率只有18-34%（Stratagene公司新版的AdEasy XL系统成功率在94%左右），且在原核细胞（BJ5183）中完成病毒基因组重组，理论上，失去了生存压力的腺病毒基因组更容易发生突变，病毒遗传背景及活性可能会受到影响。

该系统包括含腺病毒基因组的辅助
大质粒、小质粒（Shuttle质粒）和
293细胞株。

AdMax TM Hi-IQ腺病毒载体系统（"高智商"的腺病毒载体包装系统）
腺病毒载体携带的外源基因的表达往往会有一定的细胞毒性，甚至有时没有细胞毒性的基因的中度水平的表达也会明显阻碍腺病毒载体的复制和扩增，其导致的结果是病毒重组出毒困难，或难以扩增到高滴度。

出现这种情况时，采用病毒单克隆筛选的方法也无法得到高表达目的蛋白的病毒。

比如，表达糖蛋白的腺病毒往往难以出毒，类似的情况还有表达某些DNA结合蛋白或酶的腺病毒载体。

所以很难预先估计某一株腺病毒载体的滴度和产量。

AdMax TM Hi-IQ腺病毒载体系统可以实现上述情况下的腺病毒载体的制备。

它是在AdMax的基础上，利用乳糖操纵子（lac operator）控制目的基因的转录，在表达乳糖抑制子（lac repressor）的293细胞上包装腺病毒载体，目的基因的表达受到抑制，而在其它正常细胞上，目的基因的表达不受抑制。

“Hi-IQ”系统可以用来高产制备携带具有或潜在的细胞毒性的目的基因的腺病毒载体，（见下图）与AdMax系统不同的是，前者包括一株表达lac repressor的293细胞（293-IQ细胞），和含有MCMV启动子、内含子、lac 操纵子的Shuttle质粒、含腺病毒基因组的辅助大质粒。

得到的重组病毒是E1/E3缺失的复制缺型腺病毒（/040302.html）。

腺病毒相关检测试剂
** 腺病毒滴度的检测**
腺病毒具有转导和表达效率高、可感染细胞种类多等特点，作为基因转移载体被广泛应用于各种目的基因的体内外转导。

在制备或使用腺病毒载体时，测定其滴度非常重要。

只有准确了解腺病毒载体的滴度，才能确切知道制备或感染时腺病毒的加入量，确保病毒生产或应用的成功。

目前常用的腺病毒滴度检测方法有两种：噬斑计数法和TCID50法。

噬斑计数法是将经过一系列稀释的病毒样品感染293细胞，并覆盖半固体琼脂糖以防止病毒扩散，培养足够长时间（一般10天）后，在显微镜下对病毒噬斑进行逐一计数，从而计算出病毒滴度，单位PFU/ml。

TCID50法也是将经过一系列稀释的病毒样品感染293
细胞，不过每个稀释度感染多个细胞孔（一般10个），培养足够长时间（一般10天）后，在显微镜下对每个细胞孔内是否存在病毒噬斑进行判断，通过出现噬斑的孔数计算出腺病毒的滴度，单位IU/ml。

由于TCID50法不用对每个噬斑进行计数，人为误差较小，重复性比噬斑计数法更好，因此使用者较多。

但是上述两种方法都有以下共同的问题：
1）时间长：需要感染病毒后10天才能观察和计算结果；
2）误差大：对噬斑的判断需要较多经验，不同操作人员对结果的判断往往差异较大；
3）操作难：培养10天的293细胞往往容易脱落或状态不好，影响对最终结果的判断。

.....................................................................................................
** 快速腺病毒感染性滴度（TCID50）检测试剂盒**
本元正阳公司专业从事腺病毒载体的研发和生产，针对现有的腺病毒载体滴度检测方法中的不足，开发出“快速腺病毒感染性滴度（TCID50）检测试剂盒”。

本试剂盒是一种改良的TCID50方法，利用对噬斑进行免疫染色的方
法（图1），使对噬斑的判断变得异常清晰，而且检测时间大大缩短。

10-6 10-7 10-8
图1 免疫显色结果
对比实验证实，本试剂盒检测结果与常规TCID50法的结果基本一致，而且重复性更好（图2）。

图2 快速腺病毒滴度TCID50检测试剂盒的准确性及重复性检测结果对样品Ad5-EGFP依次进行了10次滴度检测，根据数据分析，本试剂盒检测的滴度平均为6.4×1011 IU/ml，误差±1.5×1011 IU/ml；常规法检测的滴度平均为6.5×1011 IU/ml，误差±3.5×1011 IU/ml。

本试剂盒的主要优点：
1）时间短：从感染细胞到检测出感染滴度的结果，只需3天时间；
2）误差小：噬斑呈现棕黑色，判断非常清晰，误差小、重复性高；
3）操作易：标准化试剂盒，操作人员可以轻松掌握，获得满意结果。

本试剂盒适用于检测包括毒种、细胞或组织裂解液、病毒半成品以及成品在内的各种形式的腺病毒的滴度。

适合实验室腺病毒载体的制备或应用中对病毒滴度的检测，也适用于腺病毒载体的大规模生产、纯化过程中对腺病毒载体的产量监控，以及对用于临床试验的腺病毒载体的滴度检测。

目录号产品名称规格价格
K-AD0001 快速腺病毒感染性滴度（TCID50）检测试剂盒盒（10次）3000.00
常用腺病毒载体的包装方法包括：
1) 经典的同源重组法（双质粒共转染）：原理是同源重组。

在腺病毒左臂区域（通常缺失E1基因区）插
入目的基因表达盒构成腺病毒穿梭质粒，与带有腺病毒全基因组（通常缺失E1基因区）的大质粒共同转
染携带E1基因区的细胞如293细胞，两种质粒在293细胞内通过同源重组形成重组腺病毒基因组，并包装成病毒颗粒。

主要缺点是重组效率比较低。

2) Ad-Easy法：原理是通过同源臂重组的方式在细菌中获得重组腺病毒基因组质粒。

将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的质粒共转化RecA+细菌，在细菌RecA重组酶的作用下经抗性筛选获得重组腺病毒基因组质粒，将其线性化后转染293细胞获得重组病毒。

3) AdMax包装系统：通过Cre/loxP获得重组病毒，这个过程发生在293细胞中，从而避免在细菌中重组。

将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的包装质粒共转染293细胞，利用
Cre/loxP系统的作用实现重组，产生重组腺病毒。

这个系统有多种优势，包括操作简便、重组效率高、获得的病毒产率高（一般大于10（4）vp/cell）、目的基因的表达水平高（因为mCMV启动子比hCMV启动子强若干倍）等。

鉴于这些特点，本公司推荐用AdMax包装系统制备腺病毒载体。

AdMax系列有多种（详见“AdMax系统构建腺病毒载体的常见问题解答”），其中最常用的是AdMax kit D。

>>> AdMax腺病毒载体构建操作指南（英文）[pdf]
4）Ad5/F35MaxTM包装系统：本公司凭借丰富的病毒基因载体研发经验，在AdMax包装系统基础上建立了Ad5/F35MaxTM载体包装系统。

Ad5/F35是Ad5的病毒纤突（Fiber）被改造成35型腺病毒纤突的嵌合型腺病毒载体。

其基因组中仅有fiber是嵌合的，其它的基因仍旧保留了Ad5载体的特征。

其包装系统包括pBHG-fiber5/35骨架质粒，穿梭质粒，HEK293细胞。

其原理与AdMax系统相似。

pBHG-fiber5/35骨架质粒可以与带有loxP位点的穿梭质粒配合，通过Cre-loxP，使转染进HEK-293细胞的穿梭质粒和骨架质粒发生定点重组，产生带有外源基因的重组腺病毒（Ad5/F35），这样得到的重组病毒是E1缺失的复制缺陷型腺病毒，病毒在不能够提供E1区的细胞中只能实现外源基因的表达而本身不具备增殖能力。

Ad5/F35MaxTM腺病毒包装系统的特点是通过重组酶在真核细胞内完成重组出毒，不仅保留了AdMax系统出毒快、稳定性好、产率高等优点，而且感染细胞的范围更广、感染效率更高，对各种造血细胞和肿瘤细胞的感染效率高于普通Ad5、外源基因表达量更多，包装系统高效且稳定，是目前最方便快捷的腺病毒（Ad5/F35）包装系统。

>>> 新型腺病毒载体Ad5/F35简介。