黄芪营养生长期茎叶毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量测定_李丽

收稿日期： 2014 － 03 － 10 基金项目： 国家自然科学基金项目（ 31070316） ； 国家科技支撑计划项目
（ 2011BAI03B01） ； 国家科技重大专项 （ 2012zx09304006 ） ； 吉 林省科技条件与平台建设设计（ 20112101） ； 吉林省科技厅重 点项目（ 20110228） 作者简介： 李丽（ 1986 － ） ，女，内蒙古人，硕士，研究方向： 生药学。 通讯作者： 郜玉钢（ 1969 － ） ，男，教授，硕士研究生导师，研究方向： 生药 学，E － mail： gaoyugang_2006@ 163． com。
Key words： stems and leaves of Ｒadix Astragali； calycosin － 7 － O － β － D － glycoside； astragaloside Ⅳ； content det植 物 膜 荚 黄 芪 Astragalus membranaceus （ Fisch. ） Bunge 和 蒙 古 黄 芪 A. membranaceus （ Fisch. ） Bunge var. mongholicus（ Bunge） Hsiao 的干燥 根［1 － 2］，生物活性广泛，其传统药用部位为根，关于黄 芪的化学成分、药理作用研究已有大量报道［3 － 6］。黄 芪是补气药中的一味重要品种，随着世界医疗事业的 发展，黄芪的需求和用量逐年增加，除供药用外，还广 泛用于饮料、补品、化妆品等工业中，这给药用黄芪植
LI Li，GAO Yugang，ZHAO Li，DONG Wei，HAO Jianxun，ZHANG Lianxue （ College of Chinese Medicinal Materials，Jilin Agricultural University，Changchun 130018，Jilin，China）
摘 要： 目的: 测定黄芪 2 年生和 3 年生营养生长期茎叶毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量。方法: 采用 HPLC，色谱条 件为色谱柱 C18 ( 4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相为乙腈 － 水，梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min － 1 ，柱温 30 ℃ ，检测波长分 别为 250 nm，203 nm。结果: 2 年生黄芪营养生长期毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量变化范围分别为 0. 1853 ～ 0. 2940， 0. 2337 ～ 0. 5367 mg·g －1 ; 3 年 生 黄 芪营养 生 长 期 毛蕊 异 黄 酮 苷 和 黄 芪 甲 苷 含 量 变 化 范 围 分 别 为 0. 2180 ～ 0. 3830， 0. 2733 ～ 0. 6150 mg·g －1 。结论: 毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量 3 年生高于 2 年生，随生长时间的延长含量也随之增加; 本研究也改进了毛蕊异黄酮苷含量测定方法。
物资源带 来 一 定 压 力。 黄 芪 地 上 部 分 产 量 是 根 的 几 倍［7］，但我国黄 芪 地 上 部 分 没 有 得 到 充 分 利 用。 黄 芪 茎叶入药始 载 于《名 医 别 录 》，具 有 生 津 止 渴、舒 筋 活 血、消肿疗疮等功能［8］。其丰富的资源、良好的药用价 值，使得黄芪地上部分具有较好的开发利用前景，所以 本实验通过反向高效液相法对黄芪茎叶活性成分中的 毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷的含量进行测定，为开发黄 芪地上部分，扩大药用资源提供科学依据。 1 仪器与试药
以标准品的浓度（ mg. mL － 1 ） 为横坐标、峰面积为 纵坐标，绘制标准曲线，毛蕊异黄酮苷的回归方程： Y = 6 × 107X + 34240 （ n = 6 ） ，r2 = 0. 9994，在浓度 2. 36 ～ 70. 8 mg·mL － 1 范围内线性关系良好。黄芪甲苷的 回归方程： Y = 943055X － 3721. 8 （ n = 6 ） ，r2 = 0. 9990 在浓度 5. 2 ～ 52 mg·mL － 1 范围内线性关系良好。记 录标准品色谱图，见图 1 ～ 图 2，毛蕊异黄酮苷对照品 的保留时间为 17. 760 min，黄芪甲苷对照品的保留时 间为 16. 768 min。
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辽宁中医杂志 2014 年第 41 卷第 9 期 DOI∶10． 13192 / j． issn． 1000-1719． 2014． 09． 063
黄芪营养生长期茎叶毛蕊异黄酮苷和 黄芪甲苷含量测定
李丽，郜玉钢，赵丽，董微，郝建勋，张连学
（ 吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130018）
关键词： 黄芪茎叶; 毛蕊异黄酮苷; 黄芪甲苷; 含量测定 中图分类号： Ｒ927． 2 文献标志码： A 文章编号： 1000-1719（ 2014） 09-1942-03
Content Determination of Calycosin － 7 － O － Β － D － Glycoside and AstragalosideⅣ in Vegetative Growth Stage of Stems and Leaves of Ｒadix Astragali
Abstract： Objective： To determine the contents of calycosin － 7 － O － β － D － glycoside and astragalosideⅣ in the vegetative growth stage of 2 － year and 3 － year stems and leaves of Ｒadix Astragali． Methods： HPLC method，the chromatographic separation was achieved on a C18 column（ SHIMADZU，4． 6 mm × 150 mm，5μm） using amobile phase made up of acetonitrile（ A） and water （ B） at a flow rate of 1． 0mL·min －1 ． The detection wavelength were set as 250 nm and 203 nm，respectively and the column temperature 30 ℃ ． Ｒesults： The contents of calycosin － 7 － O － β － D － glycoside and astragaloside Ⅳof 2 － year Ｒadix Astragali were 0． 1853 － 0． 2940，0． 2337 － 0． 5367 mg·g －1 respectively． The contents of 3 － year Ｒadix Astragali were 0． 2180 － 0． 3830，0． 2733 － 0． 6150 mg·g －1 respectively． Conclusion： The contents of 3 － year Ｒadix Astragali were more than that of 2 － year one， with growing time also increases the contents of calycosin － 7 － O － β － D － glycoside and astragaloside Ⅳ． This study improves the method of content determination of calycosin － 7 － O － β － D － glycoside and astragaloside Ⅳof Ｒadix Astragali．
辽宁中医杂志 2014 年第 41 卷第 9 期
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司，批号 20120425。蒙古黄芪（ 2 年生和 3 年生） 采自 吉林农业大学药植园。乙腈、甲醇（ 均为色谱纯） 美国 Fisher Scientific 公司； 水为哇哈哈超纯水； 其余试剂为 分析纯。 2 方法与结果 2. 1 黄芪地上部分毛蕊异黄酮苷含量测定 2. 1. 1 毛蕊异黄酮苷色谱条件 色谱柱： KiomasilC18 柱（ 4. 6 mm × 150 mm，5 μm） ； 流 动 相： 乙 腈 （ A） ： 水 （ B） ； 梯度洗脱 ［0 min（ 8% A） →10 min（ 15% A） →15 min（ 20% A ） → 25 min （ 8% A ） ］； 流 速： 1. 0 mL · min － 1 ； 检测波长 250 nm； 柱温： 30 ℃ ； 进样量： 20 μL。 2. 1. 2 对照品溶液的制备 精密称取 105 ℃ 干燥至 恒重毛 蕊 异 黄 酮 苷 5. 90 mg，加 色 谱 纯 甲 醇 定 容 10 mL，稀 释 成 质 量 浓 度 为 2. 36、5. 9、9. 44、11. 8、23. 6、 70. 8 μg·mL － 1 的对照品溶液，即得。 2. 1. 3 供试品溶液的制备 取已粉碎好的黄芪茎叶 约 1 g，精密称定，置圆底烧瓶。精密加入甲醇 50 mL， 称定重量。加热回流 4 h，放冷，再称定重量，用甲醇补 足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取滤液 25 mL，用 旋转蒸发仪蒸干。残渣加甲醇溶解，转移至 10 mL 容 量瓶中。加甲醇至刻度，摇匀，用 0. 45 μm 微孔滤膜 过滤入样品瓶中备用。 2. 2 黄芪地上部分黄芪甲苷含量测定 2. 2. 1 黄 芪 甲 苷 色 谱 条 件 色 谱 柱： KiomasilC18 柱 （ 4. 6 mm × 150 mm，5 μm） ； 流动相： 乙腈： 水（ 32∶ 68） ； 流速： 1. 0 mL·min － 1 ； 检测波长 203 nm； 柱温： 30 ℃ ； 进样量： 20 μL。 2. 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取 105 ℃ 干燥至 恒重的黄芪甲苷 5. 20 mg，加色谱纯甲醇定容 10 mL， 用甲 醇 稀 释 成 质 量 浓 度 为 5. 2、8. 322、10. 4、20. 8、 30. 2、52 μg·mL － 1 的对照品溶液。 2. 2. 3 供试品溶液的制备 精密称取已经粉碎好的 黄芪茎叶粉末 2. 0 g，置 50 mL 离心管中，加甲醇 30 mL，超声处理 30 min，离心 5 min（ 约 3000 × g） 。上清 液用 0. 45 μm 微孔滤膜 （ PTFE） 滤过，残渣用甲醇洗 涤 2 次，每次 15 mL，超声 5 min，离心 5 min，滤过，合 并滤液，用 旋 转 蒸 发 仪 减 压 蒸 干。 残 渣 溶 解 于 10 mL10% （ V / V） 氨 水 溶 液 中，放 置 10 min，不 时 振 摇。 将溶液移至 分 液 漏 斗 中，用 水 饱 和 正 丁 醇 萃 取 3 次 （ 15、10、10 mL） 。合并提取液，用旋转蒸发仪减压浓 缩蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至于 10 mL 容量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀，用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤入样 品瓶中备用。 2. 3 标准曲线与线性关系