实验操作
科学小实验步骤操作方法
科学小实验步骤操作方法科学小实验是学生在课堂或家庭中进行的一种实践活动,旨在培养学生的探究精神、观察能力、分析能力和解决问题的能力。
下面将从科学小实验的步骤和操作方法进行详细介绍。
步骤一:明确实验目的在进行科学小实验之前,首先要明确实验的目的和意义。
例如,我们想要探究天气变化对植物生长的影响,实验目的可以是观察不同天气条件下植物生长的情况,从而了解天气因素对植物的影响。
步骤二:制定实验计划根据实验目的,制定详细的实验计划。
首先确定实验所需的材料和设备,如种子、土壤、花盆、水壶、测量工具等。
然后确定实验的操作步骤和时间安排,如何添加不同的天气条件(光照、温度、湿度等),如何测量和记录植物的生长情况。
步骤三:准备实验材料和设备根据实验计划,准备实验所需的材料和设备。
如在种子试验中,需要准备不同种类的种子、肥料、种植土和花盆等。
在天气变化实验中,需要准备光照灯、恒温箱、湿度计等设备。
确保实验材料和设备的质量和数量符合实验的要求,避免实验中出现意外情况。
步骤四:进行实验操作按照实验计划和步骤进行实验操作。
例如,将相同种类的种子分别放置在不同天气条件下,根据实验计划进行灌溉、测量和记录。
在操作过程中,要注意实验环境的卫生和安全,遵守实验室和设备的使用规范,避免造成伤害或损坏。
步骤五:观察和记录实验结果进行实验过程中,要时刻观察实验对象的变化,并及时记录实验结果。
例如,观察不同天气条件下植物的生长速度、生长高度、叶片颜色等变化。
可以使用相机、测量工具等辅助工具进行观察和记录,确保实验数据的准确性和可靠性。
步骤六:分析和总结实验结果在实验结束后,对实验结果进行分析和总结。
可以比较不同条件下植物的生长情况,寻找规律和差异。
例如,比较在光照较少的条件下植物生长更慢,叶片颜色较浅,而在温度较高的条件下植物生长较快,叶片颜色较深。
通过分析实验结果,可以得出结论,回答实验目的,并提出未来进一步研究的问题。
步骤七:撰写实验报告完成实验后,撰写实验报告。
实验操作注意事项
实验操作注意事项实验操作是科学研究的重要环节,其结果影响着科研项目的正常开展和取得成果的准确性和可靠性。
而实验操作过程中的疏忽和失误往往会给科研工作带来不良影响。
因此,在实验操作中非常有必要注意一些常见的注意事项,以确保实验的准确性和有效性。
本文将介绍实验操作中一些需要注意的事项。
一、实验前准备实验操作前需要进行充分的准备工作。
这包括:1.实验器材:确保实验所需的器材齐备并测试过。
2.实验环境:实验操作前需要清理实验环境,避免干扰实验操作及污染实验结果。
3.操作人员:操作人员需要经过专业培训和实践经验,确保具有实验操作的相应能力。
4.实验方案:操作人员需要掌握实验方案,并在操作前熟悉实验操作流程。
二、实验操作中注意的事项1.安全操作在实验操作中,繁琐、单调的重复操作和化学品等物品的使用容易让人疏忽大意,危害个人安全。
因此,在操作中有必要注意以下事项:(1)戴好实验手套、护目镜、口罩等相应防护装备,以保证操作人员的安全;(2)禁止进行擅自创新或未经授权的操作,在未人工干预的自动化工程中,应尽可能避免人工操作,缩小人为操作带来的不确定因素;(3)遵守实验室规定,正确地操作实验设备和材料,防止实验所涉及的物质造成损害。
2.准确记录信息实验操作需要具备记录所得信息的能力。
不同实验操作的记录方式不同,但需要注意以下事项:(1)在实验开始前,必须核对所需材料、工具、参数、规格等信息,确认无误后方可开始;(2)在实验数据记录时,时间、温度、压力等各项数据要准确无误,保证实验数据的可靠性和实验结果的准确性;(3)实验过程中的一些细节也需要记录,或者拍照成像,方便操作人员之间的交流和复查。
3.遵循实验操作流程实验操作基本需按照规定的程序来进行,这样才能获得准确的实验结果。
对于每种实验,都有其固定的操作流程。
以下几点需要注意:(1)跟随实验操作流程,掌握实验步骤和注意事项;(2)应熟读实验检测标准和操作方法、检测介质、判定标准等,以防误判和其他问题的发生;(3)在实验中,应有耐心,按照操作流程和时间表顺序进行实验。
学生实验课程安全操作规范
学生实验课程安全操作规范引言:学生在进行实验课程时,安全操作是保证实验过程顺利进行的关键。
本文将介绍学生实验课程的安全操作规范,帮助学生正确、安全地进行实验操作。
一、实验准备阶段1. 资料准备:在进行实验之前,学生应仔细阅读实验手册或相关资料,了解实验目的、原理、步骤等,并熟悉实验器材和仪器的使用方法。
2. 实验环境:实验室环境应保持整洁,避免杂物堆积和地面湿滑。
实验仪器和器材应摆放整齐,以免造成伤害和实验误差。
3. 实验器材检查:在实验开始前,学生应对实验器材进行检查,确保不存在损坏或老化现象。
如有问题应及时更换或维修。
二、实验仪器和器材的使用1. 操作规范:学生在实验过程中应按照实验手册或实验教师的指导进行正确的操作,遵循实验步骤和流程,不得擅自更改或省略实验环节。
2. 仪器使用方法:使用高精密仪器时,学生应掌握正确的使用方法,并注意使用过程中的注意事项和安全警示。
3. 货物存放:对于实验中使用的化学品和易燃物品,学生应按照实验室管理规定进行妥善存放,避免造成安全事故。
三、实验操作中的安全注意事项1. 穿戴防护设备:在进行有毒、易燃、腐蚀等实验操作时,学生应穿戴好防护服、口罩、手套等个人防护设备,以保护自身安全。
2. 避免食物和饮品:学生在实验室内严禁食用食物和饮品,以避免误食实验材料或受到其它污染造成健康危害。
3. 安全出入实验室:学生进入实验室前应遵守实验室安全规定,如洗手、更衣等。
离开实验室时,应仔细检查是否关闭了水龙头、电源等,确保实验室处于安全状态。
四、化学品的安全使用1. 标识和分类:学生在使用化学品时要仔细阅读标签上的内容,了解其危险性和应急措施,正确分类储存和使用。
2. 测量和加注:使用化学品时,学生应使用专用器皿和工具进行准确的测量和加注,避免超量使用和溅洒。
3. 废弃物处理:实验结束后,学生应按照实验室管理规定进行废弃物的分类和处理,确保不对环境造成污染和危害。
五、实验操作中的急救措施1. 疾病发作:学生在实验过程中如感觉不适或出现身体不适症状,应立即停止实验操作并告知实验教师,寻求及时的急救服务。
化学实验的基本操作技能
化学实验的基本操作技能化学实验是化学学习中不可或缺的一部分,它有助于学生更好地理解化学原理和现象。
掌握化学实验的基本操作技能是进行有效实验的基础。
以下是一些基本的化学实验操作技能:1.实验室安全知识:在进行化学实验之前,了解实验室的安全知识是非常重要的。
这包括熟悉实验室中的危险品标识、了解实验过程中可能存在的危险和如何避免、正确使用实验室设备等。
2.实验器材的使用:熟悉并掌握各种实验器材的使用方法,如烧杯、试管、滴定管、电子天平等。
了解它们的量程、精度和使用注意事项。
3.溶液的配制:学会如何准确配制一定浓度的溶液,包括计算所需物质的量、称量、溶解和定容等步骤。
4.实验操作的准确性:在进行实验操作时,要注重精确度。
例如,量取液体时要注意读数的位置,使用滴定管时要控制好滴定速度,避免实验误差。
5.实验数据的记录与处理:在实验过程中,要准确记录实验数据,包括实验现象、测量数据等。
学会如何处理实验数据,如计算平均值、误差分析等。
6.实验报告的撰写:实验结束后,要学会撰写实验报告。
实验报告应包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果和实验结论等内容。
7.实验观察与分析:在实验过程中,要仔细观察实验现象,并学会分析实验结果,从而得出合理的实验结论。
8.实验设计与创新:在掌握基本实验操作的基础上,学会设计简单的化学实验,并对实验过程进行改进和创新。
9.实验团队的协作:在实验过程中,要学会与团队成员合作,共同完成实验任务。
这包括分工明确、相互配合、共同分析实验结果等。
10.实验反思与评价:实验结束后,要对自己的实验操作和结果进行反思和评价,找出不足之处,不断提高实验技能。
通过掌握这些基本的化学实验操作技能,学生可以更好地进行化学实验,提高实验能力和科学素养。
习题及方法:1.习题:实验室安全知识解题方法:回顾实验室安全知识,如危险品标识、实验室设备使用注意事项等。
2.习题:使用烧杯进行溶液稀释解题方法:首先计算所需浓溶液的体积,然后使用烧杯进行稀释。
教学实验的操作规程
教学实验的操作规程一、实验目的教学实验是教学过程中不可或缺的一部分,它能够帮助学生巩固理论知识,培养实际操作和解决问题的能力。
本实验旨在通过实际操作,帮助学生深入理解课堂所学的知识,并培养学生的实验技能和科学精神。
二、实验器材与试剂1. 实验器材:- 实验室台面- 实验仪器设备(根据实验内容确定)- 实验用具(如试管、烧杯、移液管等)2. 试剂:- 实验所需的各种试剂(根据实验内容确定)- 注意:实验中使用的试剂必须符合实验要求,并按照实验室安全操作规程进行储存和使用。
三、实验操作步骤1. 实验准备:- 检查实验器材是否齐全,并按照实验要求进行摆放。
- 检查试剂的储存情况,确保试剂的纯度和质量符合实验要求。
- 穿戴实验室服装和个人防护用品,如实验服、手套、护目镜等。
2. 实验步骤:- 按照实验指导书或教师的指示,依次进行实验步骤。
- 注意观察实验现象,并记录实验数据。
- 在进行每一步操作之前,要先理清操作的目的和方法,并确保操作的准确性和安全性。
3. 数据处理:- 根据实验数据,进行数据处理和分析。
- 绘制实验结果的图表或曲线,并进行结果的解释和讨论。
四、实验安全注意事项1. 实验室安全:- 在实验室中,必须严格遵守实验室安全规定,确保实验操作的安全性。
- 实验中使用的有毒、易燃、易爆等危险物质必须按照规定储存和使用。
2. 个人防护:- 进入实验室前,必须穿戴实验室服装和个人防护用品,如实验服、手套、护目镜等。
- 实验过程中,要注意保持实验区域的整洁,避免发生意外事故。
3. 废弃物处理:- 实验结束后,要将废弃物分类储存,并按照实验室废弃物处理规定进行处理。
五、实验结果与讨论1. 实验结果:- 根据实验数据和实验结果的分析,得出实验结论。
- 将实验结果进行整理和汇总,以便于后续的实验报告撰写。
2. 实验讨论:- 在实验报告中,要对实验结果进行讨论和分析,探讨实验中存在的问题和不确定因素,并提出改进和进一步研究的建议。
实验室操作手册
• ⑷ 开机后,不按设置键,直接进行测试,即拉伸20cm返回。每当按“复位键”后, • 拉伸长度均自动设为20cm。
4、ISO 105-A03:1993欧标灰卡
• 用途:用于干/湿磨擦色牢度评级; 沾色牢度评级。
• 用法:在充分黑暗的环境 下,在灯 箱D65光源下,45度斜角评级。
5ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱpH计 pH827
• 说明:天然 纤维或含有 天然纤维成 份的面料需 要测PH值。
• 测试方法: 详见PH操作 手册
6、HY-4调速多用振荡器
7、伊莱克斯W455H洗衣机
用途: W355H洗衣机为H&M指定仪 器,以保证我们的测试结果和H&M 结果一致。 操作指导: 1、将洗衣机门打开(如图2),把 测试样品放进去,把门锁上,放10g 碧浪洗衣粉(如图3) 。 2、根据成衣的洗唛选择水温设定程 序;按开关,启动程序(如图2) 。 备注:常规水温40度,用时:42~49 分钟,样品厚薄轻重会直接影响洗 衣时长。 3、常规程序:洗涤、漂洗、过软, 脱水、甩干、结束。(如图2); 4、洗水完成后拿出样品,关闭电源 。
• 2、洗涤完成后拿出 样品并关掉开关。
10、伊莱克斯T4130烘箱
• 用途:对测试 样衣的烘燥。
• 操作说明:按 照洗唛上烘燥 温度的要求设 定好温度和时 间。
• 如图2上的功能 键介绍
11、扬子佳美冰箱(BC-98)
• 说明:主要用 来储存化学用 品,比如:pH 缓冲液 6.00/10.00, pH电极保护液 等等。
• 4、 选择定时,定时开关如左图中间 的旋钮,定时范围:0-120分钟将定 时旋钮调至“定时”或“常开”位 置。
• 5、接通外电源,将电源开关(左图 红色按钮)置于“开”的位置,指 示灯亮。缓慢调节调速旋钮,升至 所需转速。 每次停机前,必须将调 速旋钮置于最小位置,再将定时器 置“零”,关闭电源开关,切断电 源
医学实验室中的常见实验操作步骤
医学实验室中的常见实验操作步骤在医学实验室中,进行实验操作是非常重要的一环。
本文将介绍医学实验室中常见的实验操作步骤,为读者提供一个全面的指南。
一、实验操作前的准备在进行实验之前,必须进行充分的准备工作,以确保实验的准确性和安全性。
以下是常见的准备步骤:1. 实验室设备和仪器准备确保所需的实验室设备和仪器已经准备就绪。
检查设备的工作状态和安全性能,并根据需要进行校准和清洁。
2. 材料和试剂准备准备所需的材料和试剂,并按照实验方案准确称取和配制。
确保所有试剂的标签清晰可读,并严格按照安全操作要求进行操作。
3. 实验操作区域准备清洁并消毒实验操作区域,确保操作室内外的卫生和安全。
正确放置所需的实验器具和试剂,并确保易燃、有毒和放射性物品得到适当存放和标识。
二、实验操作步骤1. 标本准备a. 根据实验方案,选择合适的标本并进行采集。
b. 对标本进行处理,如离心、洗涤、稀释等,以得到所需的样品。
2. 样品处理a. 根据实验要求,将样品置于适当的试管或容器中。
b. 加入所需的试剂或溶液,并按照操作指引进行混匀和搅拌。
c. 控制反应温度和时间,并记录相关参数。
3. 试剂添加和混合a. 按照实验方案,准确称取所需的试剂,并加入样品中。
b. 轻轻摇晃或轻轻搅拌溶液,确保试剂充分溶解和混合。
4. 仪器操作a.根据实验方案,将待测样品转移到相应的仪器中。
b.设置仪器参数,并启动仪器。
c.记录仪器读数和测量结果。
5. 数据记录和分析a. 将实验数据记录在实验记录表中。
b. 对数据进行分析和解读,并根据实验目的得出结论。
c. 统计和处理数据,绘制图表或图像。
6. 结果和讨论a. 根据实验结果撰写实验报告或研究论文。
b. 讨论实验结果的意义、局限性和可能的改进方向。
7. 清洁和处理废弃物a. 清理实验操作区域,彻底清洗使用过的实验器具和仪器。
b. 将废弃物按照规定程序进行归类、处理或处置。
8. 实验记录和保存a. 妥善保存实验记录、数据和样品。
实验基本操作范文
实验基本操作范文一、实验器材准备1.清洗和消毒实验器材:在开始实验前,需要保证实验器材的清洁与卫生。
可以用特定的清洗剂对器材进行清洗,然后使用酒精或高温消毒杀菌。
2.打开仪器设备:如果实验需要使用特定的仪器设备,如离心机、pH计等,需要提前打开设备并进行预热、校准等操作。
二、样品处理1.采样:根据实验的需要,需要采集特定的样品。
采样时需要注意采样点的选择、采样器具的消毒等问题。
2.样品制备:对于一些实验来说,需要对采集到的样品进行处理和制备,以达到实验要求。
三、实验操作步骤1.实验前准备:在正式进行实验前需要对实验步骤进行安排与准备。
包括准备所需试剂、仪器设备、实验器材等等。
2.样品处理:根据实验要求,对采样到的样品进行处理,如去除杂质,制备标准样品等。
3.操作步骤:按照实验方案进行实验操作。
根据实验的不同,可以有称量、配制溶液、加热、搅拌、过滤等操作。
每个步骤需要按照规定的时间、条件进行操作。
4.记录数据:在操作过程中,需要记录每个步骤的操作时间、条件等数据。
四、数据采集与分析1.数据采集:在实验操作过程中,需要采集与记录实验的结果数据。
可以通过仪器设备直接获取数据,也可以通过手动记录数据。
2.数据分析:对实验结果数据进行统计和分析。
可以通过计算、图表等方式进行数据分析,找出实验结果之间的规律与关系。
五、实验结束后的操作1.清洗实验器材:在实验结束后,需要对使用的实验器材进行清洗,以便下次使用。
根据实验器材的不同,可以使用特定的清洗剂消除残留物。
2.处理废弃物:将实验过程中产生的废弃物进行分类和处理。
对于有毒废弃物,应按照相关规定进行处理和处置。
以上是实验基本操作的一些常见内容。
实验基本操作是实验过程中必不可少的环节,对于实验结果的准确性与可靠性有着重要的影响。
同时,规范的实验基本操作也能确保实验的安全性,避免意外情况的发生。
因此,在进行实验过程中,务必要严格按照各项操作步骤进行操作,以确保实验的成功完成。
实验安全操作规程
实验安全操作规程实验安全是实验过程中最为关键的环节之一,任何实验都需要严格遵守实验安全操作规程,以确保实验过程的安全性和实验结果的正确性。
为此,本文将为大家详细介绍一下实验安全操作规程。
一、实验前的准备1. 确认本次实验所要使用的仪器、试剂和设备,并仔细阅读实验步骤和说明书,了解实验原理和安全注意事项。
2. 穿戴好实验服和个人防护用品,包括手套、护目镜、口罩等;长发要盘起,避免实验过程中的意外事故。
3. 实验场地的环境应该干净卫生,要保持通风良好,防止有害气体积累;灭火器、急救箱等应该放置在容易取用的地方,以备不时之需。
二、实验中的安全操作1. 试剂的倒取和混合应该按照实验步骤中的指示进行,避免试剂的溅洒和混合反应产生的剧烈反应,防止实验瓶子在过程中爆炸。
2. 要注意试剂的稳定性和易燃性,避免使用过程中引起的火灾和爆炸,并在实验结束后要正确处理废弃试剂和容器。
3. 氧化剂和还原剂的使用应该格外谨慎,防止其产生剧烈反应或意外爆炸。
4. 任何情况下不得将实验品放置在未标示的容器中,避免产生误用。
5. 分析天平、万能表、恒温器等实验仪器的使用应该严格按照其说明书的要求进行,避免使用中的故障和电击。
6. 操作过程中不得用手抓取或者接触实验品,必要时应该用特定的工具进行。
三、应急处理1. 发现实验过程中的火灾和爆炸应该立即采取相应的应急措施,关闭瓶子口和安全退出。
2. 突发情况和化学品眼睛、皮肤清洗处理及及时进行伤口消毒,保障实验中的救护疗效。
3. 实验仪器和设备出现故障情况时,应该及时停止实验,进行维修或更换,并及时上报有关部门。
四、实验后的总结1. 实验结束后要及时清洗实验仪器、容器和设备,并做好储存工作,确保下一次实验过程的准备工作。
2. 对于结果的处理和分析要仔细认真,切忌草率从事,保证实验结果的正确性和准确性。
3. 实验结束后要填写实验记录和实验报告,并保留实验数据和图片,以备后用。
综上所述,实验安全是实验工作中最为关键的环节之一,任何实验都需要遵守实验安全操作规程,以确保实验过程的安全性和实验结果的正确性。
化学试验操作规程
化学试验操作规程一、实验操作前的准备1.仔细阅读实验教材或实验指导书,了解实验目的、原理、要点等内容。
2.检查实验所需仪器、玻璃器皿、试剂、溶液等是否准备齐备,并检查设备是否正常工作。
3.确定实验操作的安全措施,如佩戴安全眼镜、手套等。
二、实验操作的基本要求1.实验台面保持整洁,将实验器材摆放整齐并稳定。
2.操作过程中要轻拿轻放,避免磕碰、摔坏仪器。
3.使用酒精灯、煤气灯等火源时,要注意防火和安全。
4.实验器材应定期清洗和检修,确保其功能正常。
三、基本操作规范1.实验开始前,先用适当的试剂清洗实验器材,如用酸洗玻璃器皿,用碱洗盘子等。
2.在操作过程中,不得离开操作台,尤其是使用火源时,要特别注意。
3.向试管、烧杯等器皿加热时,要在底部加热,且不得超过底部直径的1/3,以免破裂。
4.使用试剂时,应根据实际需要,慢慢滴加,避免溅出和浪费。
5.在实验室中,不得随意品尝实验物质,以免引起意外或中毒。
四、常见实验操作注意事项1.离心机操作时,要保持平衡,离心轴要放置好中心。
2.使用玻璃棒搅拌试剂时,要轻轻搅拌,避免碰撞容器产生剧烈反应。
3.使用实验室电磁炉时,应先调节火候,再接通电源,避免突然升温引起危险。
4.操作腐蚀性试剂时,应佩戴防酸碱手套和安全眼镜,避免直接接触皮肤和眼睛。
5.在使用分液漏斗时,要保持漏嘴的下端始终位于液面之上,以避免溶液倒回漏斗。
五、实验后的处理1.实验结束后,及时关闭电源、瓦斯、水源等设备,并归位整理实验器材。
2.对于产生有害物质的实验,要妥善处理废液废物,避免造成环境污染。
3.清洗玻璃器皿时,应先用洗涤剂浸泡,再用刷子或海绵进行清洗,最后用清水冲洗干净。
六、实验安全与急救措施1.实验室操作时,要注意个人安全,佩戴实验室专用的防护服、手套、眼镜等。
2.实验中如发生紧急情况,应立即请求帮助,通过实验室内的紧急呼叫装置或向老师报告。
3.发生火灾时,要迅速用灭火器或毛巾等盖住火源,同时向大家呼救并用安全通道逃离。
电镜实验操作步骤
电镜实验操作步骤
一、样品准备
1. 选取具有代表性的样品,确保样品无污染或损坏。
2. 将样品切成薄片,厚度一般小于100纳米。
3. 用导电胶将样品固定在电镜的样品台上。
4. 如果样品不导电,需进行镀膜处理,以增加样品的导电性。
二、样品装载
1. 将样品台推入电镜的样品室。
2. 调整样品台的位置,使样品位于电镜的视场中心。
3. 关闭样品室,开始进行实验。
三、仪器校准
1. 开启电镜,进行预热和校准。
2. 根据实验需求,调整电镜的加速电压、分辨率等参数。
3. 对准样品,调整焦距,确保样品清晰。
四、样品观察
1. 观察样品的表面形貌和结构。
2. 根据观察结果,调整样品的倾斜角度和位置。
3. 记录观察到的图像和数据。
五、数据分析
1. 对观察到的图像进行定量和定性分析。
2. 根据分析结果,得出样品的物理和化学性质等信息。
3. 将分析结果整理成实验报告。
六、仪器维护
1. 在实验结束后,关闭电镜。
2. 对电镜进行清洁和维护,确保仪器的正常运行。
3. 定期对仪器进行检查和保养,确保仪器的稳定性和精度。
科学实验中的实验步骤和操作规范指南
科学实验中的实验步骤和操作规范指南科学实验是探索未知领域、验证科学理论的重要手段。
为了确保实验结果的可信度和科学性,需要遵循一定的实验步骤和操作规范。
本文将为您介绍科学实验中常见的实验步骤和操作规范指南。
一、实验步骤1.确定实验目的:首先明确实验的目的,明确实验的预期结果和需要验证的科学理论。
2.收集资料和设计方案:在进行实验前,积极收集与实验相关的背景知识和资料。
根据资料和实验目的,设计出符合科学要求的实验方案。
3.准备实验材料和设备:按照实验方案列出需要的实验材料和设备,进行充分准备。
4.制定实验步骤:根据实验方案,制定详细的实验步骤。
将实验过程分解为多个环节,确保每个环节的操作都清晰可行。
5.实验前的安全措施:在进行实验前应认真阅读相关实验安全手册,了解实验过程中可能存在的安全风险,并采取必要的安全措施,如佩戴防护眼镜、手套等。
6.实验操作:按照实验步骤进行实验操作。
确保按照要求记录实验数据和观察结果。
7.数据处理和分析:对实验数据进行处理和分析,采用适当的数理统计方法并做出科学推断。
8.结果和结论:根据实验结果和数据分析,得出科学结论,并将结果进行清晰准确的陈述。
9.实验总结:总结实验过程中遇到的问题和解决方法,以及对实验结果的思考和展望。
总结中应注意简洁明了,突出重点。
二、操作规范1.实验室安全规范:在实验室进行任何实验操作前,必须了解并遵守实验室安全规范,如佩戴适当的防护装备、正确使用实验仪器和化学试剂等。
2.操作顺序和时间控制:按照实验步骤的要求,依次进行实验操作。
注意控制实验操作的时间,避免因操作时间过长或过短导致实验结果的不准确。
3.实验仪器和材料的操作:熟悉并正确操作实验仪器和材料,确保实验数据的准确性和可靠性。
遵循实验仪器和材料的使用说明,注意仪器的校准和维护。
4.测量和记录:实验过程中的测量和记录应准确无误。
注意使用准确的测量工具,并按照实验要求记录数据和观察结果。
5.控制变量:在实验过程中,应控制其他影响实验结果的变量,只改变需要验证的独立变量。
实验室实验操作规范及流程
实验室实验操作规范及流程
引言
实验室是进行科学研究和实验的地方,为确保实验过程的安全和准确性,需要制定实验操作规范及流程。
本文档旨在提供一套标准的实验操作规范及流程,以便实验室人员在进行实验时遵守。
实验操作规范
1. 实验前准备
- 确保实验室设备和仪器处于正常工作状态。
- 检查实验所需材料和试剂的完整性和质量。
- 熟悉实验目的和步骤,并做好实验记录表的准备。
2. 实验操作步骤
- 按照实验方案逐步进行实验操作。
- 严格遵守实验中的安全操作要求,包括佩戴个人防护用品和正确处理有害物质。
- 注意实验操作的时间和顺序,确保准确性和一致性。
- 如有需要,及时进行质量控制操作,以确保实验结果的准确性。
3. 实验后处理
- 停止实验操作后,及时清理实验设备和仪器,保持实验室整洁有序。
- 根据实验结果,进行数据分析和处理,并记录在实验记录表中。
- 将实验所产生的废料、废液等进行妥善处理,符合环境保护和安全要求。
实验流程
1. 准备实验材料和试剂。
2. 排列实验设备和仪器。
3. 根据实验方案,按照操作步骤进行实验操作。
4. 注意安全操作要求,确保个人安全。
5. 完成实验操作后,清理实验设备和仪器。
6. 进行实验结果的数据分析和处理。
7. 妥善处理实验产生的废料和废液。
结论
制定实验操作规范及流程是确保实验室工作安全和准确的重要手段。
本文档提供了一套标准的实验操作规范及流程,实验室人员应严格遵守,以确保实验工作的顺利进行。
科研实验操作规程
科研实验操作规程科研实验是科学研究的关键环节之一,而科研实验操作规程的制定和遵守则对实验的准确性、可重复性和安全性具有重要意义。
本文将从实验前的准备工作、实验操作的基本流程、实验数据的处理、实验安全和资料保存等方面,详细阐述科研实验操作规程。
一、实验前的准备工作在进行科研实验之前,准备工作的充分做好将有助于实验的顺利进行。
首先,实验者需要详细了解所要进行的实验目的、方法、步骤和设备,以确保实验的目的明确和操作熟悉。
其次,实验者需要评估实验结果的可行性,并明确所需的实验条件和环境。
此外,在实验前,还需要检查实验设备和试剂的状态,确保它们符合实验要求,并准备好必要的备用试剂。
二、实验操作的基本流程科研实验的操作流程一般包括实验准备、实验操作、实验数据记录和实验结果分析等环节。
具体而言,实验者应先按照实验目的的要求进行必要的试剂配置、设备安装和操作环境准备等工作。
接下来,根据实验方法的要求,按照预定的步骤进行实验操作,注意实验中的时间控制、温度、pH值等关键参数的调控。
在实验操作过程中,实验者应认真观察、记录实验现象和数据,并确保实验数据的准确性和完整性。
实验结束后,对实验数据进行初步分析,得出初步结论。
三、实验数据的处理科研实验数据的处理是对实验结果进行归纳、整理和分析的过程。
首先,实验者需要对实验数据进行检查和筛选,排除无效数据和异常数据。
然后,根据实验目的,对数据进行合理的计算、绘图和统计处理,以得出准确可靠的实验结果。
在实验数据处理过程中,实验者需要注意使用正确的统计方法和软件,并对数据的误差和不确定性进行分析和讨论。
四、实验安全科研实验中的安全问题不容忽视,实验者应始终将实验安全放在首位。
实验者需要事先了解实验操作中可能存在的安全风险,并正确佩戴个人防护用品。
在实验操作中,实验者需要与他人保持良好的沟通和协作,并注意实验室内的清洁与整洁。
在遇到实验事故和紧急情况时,实验者应根据相关规定和程序及时采取相应的应急措施,确保人身安全和实验室的正常运转。
小学科学实验基本操作
小学科学实验基本操作1、常用器材操作(1)点燃火柴的方法:平拿火柴,火柴盒“头”向上。
(2)酒精灯的使用方法:点燃时灯帽放右手边且竖放,火柴自下而上侧点,加热用外焰,熄灯盖二次灯帽等。
(3)滴管的使用方法:握法、吸液体、加液体等。
(4)铁架台、铁圈、十字夹、烧瓶夹、试管夹的调节和使用方法:双手拿,开口向上等。
(5)托盘太平的使用方法:放置、调零、称量、读数,注意左物右码、游码归零、调零、湿物用纸或容器等。
(6)显微镜的使用方法:放置、调整对光时眼睛看目镜;调节焦距时先调低、然后边看边往上调;调整被观察物体位置时,展玻片用双手调节等。
(7)温度计的使用方法:持温度计的方法和位置,测量时玻璃泡的放置位置,读数时的观察角度;会正确读数;会根据测量对象正确选择合适的温度计,如测体温用体温计,测水温用100摄氏度温度计,测沙温用300摄氏度温度计等。
(8)测力计、弹簧秤的使用方法:会握、会调零、会读数;如测水的浮力时,挂钩不入水,物不碰壁等。
(9)量筒的使用方法:加液、观察读数等。
如倾斜2、斜口倒,对园口、观测时放平、看凹液面最低点、最后用滴管加入。
(10)指南针的使用方法:位置,平放;周围没有铁制品和磁铁等物;拿法;方向的辨别,南极S、北极N等。
2、基本实验操作(1)闻不明物体气味的方法:赶气味法。
(2)测浮力的方法:挂钩不入水,握测力计、调零、读数。
(3)纸桥承重对比实验:注意有相同点和不同点,如桥墩之间的距离或纸桥的形状等。
(4)水和沙的加热实验:水加热实验,用烧杯和100摄氏度温度计,水不超过2/3;试管,水不超过1/3;温度计悬挂在铁架台复夹上;用酒精灯外焰燃烧;分工合作,一人看时间,一人看温度计,一人记录温度变化。
沙的加热实验:容器使用坩埚或金属容器,用300摄氏度温度计;沙的数量要控制好。
(5)溶解实验:烧杯搅拌法,搅拌棒不碰底和壁;试管振荡法,试管内水不超过1/3,斜入水,先放盐再放水,盐在纸上用天平称量,用三个手指拿试管上部,振荡的幅度为45度等。
化学9个实验操作方法
化学9个实验操作方法化学实验是研究物质的性质和变化规律的重要手段之一,实验操作方法的正确性和规范性对于实验结果的准确性起着至关重要的作用。
下面我将介绍9个常见的化学实验操作方法。
1. 酸碱中和反应实验操作方法实验材料:稀盐酸、稀氢氧化钠溶液、酚酞指示剂、滴定管等。
操作步骤:①取一定体积的盐酸溶液倒入烧杯中;②加入适量的酚酞指示剂;③缓慢滴加氢氧化钠溶液,直至溶液的颜色由粉红色变成淡紫色;④记录氢氧化钠溶液的用量,根据滴定结果计算出盐酸的浓度。
2. 沉淀生成反应实验操作方法实验材料:铜硫酸溶液、亚硫酸钠溶液、试管等。
操作步骤:①取一定体积的铜硫酸溶液倒入试管中;②加入适量的亚硫酸钠溶液;③观察反应产物的形态和颜色的变化;④将反应产物过滤,用水洗净,将其放置晾干。
3. 气体生成反应实验操作方法实验材料:锌末、稀硫酸溶液、导管、水槽等。
操作步骤:①将适量的锌末放入烧杯中;②将稀硫酸溶液倒入烧杯中;③将导管的一端插入烧杯中,另一端放入水槽中;④观察并收集产生的氢气。
4. 金属活性实验操作方法实验材料:稀盐酸溶液、一些金属丝片、酚酞指示剂等。
操作步骤:①将一些金属丝片分别放入试管中;②加入适量的稀盐酸溶液;③观察试管内的反应现象,如是否冒气泡、溶液颜色变化等。
5. 燃烧实验操作方法实验材料:锥形燃烧瓶、石蜡烛、镁条等。
操作步骤:①将石蜡烛等固体放入锥形燃烧瓶中;②点燃石蜡烛等固体;③将镁条点燃,放入锥形燃烧瓶中;④观察燃烧产生的现象,如火焰颜色、火焰是否能燃烧等。
6. 燃烧产物分析实验操作方法实验材料:盐酸、适量的铜、无水铜硫酸、葡萄糖、点燃器、试管等。
操作步骤:①将铜片等放入试管中,加入适量的无水铜硫酸;②观察产生的气体的性质及颜色;③将点燃器点燃后迅速放置于试管口,观察气体的燃烧现象;④用酸试液检验气体酸碱性。
7. 酯化反应实验操作方法实验材料:苯甲醇、过量的乙酸、稀硫酸溶液、饱和食盐水等。
操作步骤:①将苯甲醇、乙酸和稀硫酸溶液按一定体积配比置于烧杯中;②加热溶液,同时用酒精灯或电炉控制延缓挥发;③加饱和食盐水,使生成的酯酸在有机层浓缩,分离有机层,并重复几次;④过浓氢氧化钠溶液净化、除水分,蒸馏分离出酯。
化学一些常见的实验步骤及操作
化学一些常见的实验步骤及操作化学实验步骤及操作是化学实验的基本内容,以下是一些常见的化学实验步骤及操作:1.称量:首先需要称量所需的化学试剂,通常使用称量纸将试剂放在平衡器上进行称量。
在称取之前应先将廉价天平归零。
2.溶解:将称好的试剂溶解在溶剂中。
可以使用烧杯、烧瓶或试管进行溶解。
将试剂加入容器中,然后加入合适量的溶剂,使用玻璃杯棒搅拌溶解。
3. 加热:对于需要加热的实验,可以使用酒精灯、Bunsen燃气灯或电磁加热器进行加热。
将容器放在加热器上,控制加热温度和时间。
4.过滤:需要分离固体和液体的混合物时,可以使用滤纸和漏斗进行过滤。
将滤纸放在漏斗中,然后将混合物倒入漏斗,液体部分会通过滤纸,固体留在滤纸上。
5.水浴:有时需要在恒定的温度下进行实验,可以使用水浴器。
将实验容器放入水浴中,控制水浴温度。
6.结晶:当需要从溶液中分离晶体时,可以通过结晶实现。
将溶液加热至饱和,静置并冷却,晶体会逐渐形成。
7.混合:一些实验需要混合两种或更多的溶液。
使用玻璃杯棒或移液管等工具搅拌混合物。
8.生成气体:一些化学实验需要制备气体。
例如,通过在试管中加入酸和金属反应,可以生成氢气。
9.酸碱滴定:这是一种常见的实验方法,用于测定溶液中酸碱的浓度。
滴定过程中,滴加酸碱溶液到试管中,直到指示剂的颜色改变为终点。
10.物质的鉴定:化学实验中,有时需要对物质进行鉴定。
可以使用酸碱中和测试、颜色反应或产物形成测试等方法进行。
需要注意的是,在进行任何化学实验时,都应按照实验室安全规定和实验教师的要求进行操作,戴上护眼镜和实验手套以保护自己的安全。
中学生实验操作规程(3篇)
第1篇一、实验前的准备工作1. 实验室安全:进入实验室前,首先要了解实验室的安全规定,严格遵守实验室的各项安全操作规程,确保自身和他人的安全。
2. 实验材料准备:根据实验要求,提前准备好实验所需的仪器、试剂和材料,并检查其完好性。
3. 实验报告准备:在实验前,仔细阅读实验指导书,了解实验目的、原理、步骤和注意事项,提前构思实验报告的框架。
二、实验操作步骤1. 实验开始前,首先检查实验器材是否完好,确认无误后,方可开始实验。
2. 实验过程中,严格按照实验指导书的步骤进行操作,不得擅自更改实验步骤。
3. 操作过程中,注意观察实验现象,认真记录实验数据,确保数据的准确性。
4. 使用实验器材时,要轻拿轻放,避免损坏。
实验结束后,将器材归位。
5. 实验过程中,如遇到问题,应及时向实验教师请教,不得自行解决。
6. 实验操作过程中,要注意以下几点:a. 使用玻璃仪器时,要小心操作,避免划伤手指。
b. 使用化学试剂时,要防止试剂溅到皮肤和衣物上。
c. 使用高温设备时,要注意防止烫伤。
d. 实验过程中,要时刻保持实验室的整洁,实验完毕后,将实验台清理干净。
三、实验结束后的工作1. 实验结束后,将实验器材归位,关闭水、电、气等设备。
2. 清理实验台,确保实验室整洁。
3. 将实验数据整理成实验报告,认真撰写实验心得。
4. 实验教师对实验报告进行审阅,如有问题,及时修改。
四、实验纪律1. 实验过程中,要保持安静,不得喧哗、打闹。
2. 实验室不得擅自离岗,如有需要,应向实验教师请假。
3. 不得在实验室内吸烟、饮食。
4. 不得将实验器材带出实验室。
5. 实验过程中,如有违反实验纪律的行为,将受到相应的处罚。
五、注意事项1. 实验过程中,要严格遵守实验室的安全规定,确保自身和他人的安全。
2. 实验操作要规范,避免因操作不当导致实验失败或安全事故。
3. 实验报告要真实、客观,不得抄袭、篡改实验数据。
4. 实验心得要总结实验过程中的收获和体会,提高自己的实验技能。
科学实验中的实验步骤与操作规范
科学实验中的实验步骤与操作规范科学实验是一种系统的观察、记录和分析现象的方法,它可以帮助我们建立科学理论、验证科学假设,并推动科学的发展。
在进行科学实验时,准确的实验步骤和操作规范非常重要,它们可以确保实验的准确性和可重复性,并提供可靠的数据和结果。
本文将介绍科学实验中的实验步骤和操作规范。
一、实验步骤的规范性进行科学实验时,实验步骤的规范性是保证实验过程准确、可靠的关键。
为了确保实验的有效性,以下是实验步骤的规范性要求:1. 充分准备:在进行实验前,应仔细阅读实验方案,了解实验目的、方法和所需材料。
同时,对实验器材进行确切的准备,并在实验开始前确认实验环境和条件是否符合要求。
2. 清晰记录:在进行实验时,应详细记录实验步骤、实验数据和观察结果。
记录应清晰、准确,包括实验的时间、温度、压力等重要指标。
这些记录有助于数据分析和实验结果的验证。
3. 准确量取:在实验中,准确的量取是确保实验结果准确性的前提。
量取时应选择合适的量具,遵循精确的量取方法,并注意避免量取过程中的误差。
4. 控制变量:为了验证某一变量对实验结果的影响,必须控制其他变量保持恒定。
在实验中,应仔细选择需要控制的变量,并通过多次实验确保其他变量保持不变。
5. 注意安全:在进行实验时,安全是最重要的考虑因素。
实验过程中应戴好安全眼镜、实验手套等个人防护装备,并按照安全规范操作实验器材。
若实验涉及危险化学品或高温设备,应事先了解安全操作方法,并设置应急措施。
二、操作规范的重要性科学实验的操作规范性是确保实验过程的可重复性和可比性的关键。
规范的操作可以减小实验误差、提高实验数据的准确性和可靠性,以下是操作规范的要求:1. 清洁操作台面:在进行实验前,应确保操作台面干净整洁,无杂物和掉落物。
同时,应使用干净的实验器材,并按照实验要求清洗和消毒。
2. 准确称量:在实验中,准确的称量是保证实验数据准确性的重要环节。
使用天平时,应先将天平调零,并注意零点位置的稳定。
实验操作步骤流程
实验操作步骤流程在科学研究和实验教学中,实验操作步骤的正确性和规范性非常重要。
本文将介绍一个完整的实验操作步骤流程,并列出各个步骤的详细操作指南,以确保实验的顺利进行。
步骤一:准备实验设备和材料在进行实验之前,首先需要准备好实验所需的设备和材料。
以下是一个常见的准备步骤流程:1.查看实验所需设备清单,并确保所有设备都齐备。
2.检查实验设备的工作状态和安全性能,确保其正常工作。
3.检查实验材料的数量和质量,确保其符合实验要求。
步骤二:制定实验计划在进行实验之前,需要制定一个详细的实验计划,以确保实验的顺利进行。
以下是一个常见的制定实验计划的流程:1.确定实验的目的和研究问题,明确实验的目标。
2.设计实验的方法和步骤,包括实验的控制组和实验组。
3.制定实验的时间安排,包括准备时间、观察时间和总结时间等。
步骤三:操作步骤详解接下来将详细介绍实验的操作步骤。
步骤3.1:xxx操作1.准备工作:将实验设备放置在稳定的台面上,并连接好电源。
2.操作步骤:按照实验计划中的要求,进行相应的操作。
注意操作的顺序和方法。
3.观察记录:对实验过程中的关键现象进行观察,并记录所得数据或结果。
步骤3.2:yyy操作1.准备工作:将实验材料按照实验计划中的要求准备好,并摆放整齐。
2.操作步骤:按照实验计划中的要求进行相应的操作。
注意操作的顺序和方法。
3.观察记录:对实验过程中的关键现象进行观察,并记录所得数据或结果。
步骤3.3:zzz操作1.准备工作:将实验设备进行必要的调试,并确保其正常工作。
2.操作步骤:按照实验计划中的要求进行相应的操作。
注意操作的顺序和方法。
3.观察记录:对实验过程中的关键现象进行观察,并记录所得数据或结果。
步骤四:数据处理和结果分析在完成实验操作后,需要对实验数据进行处理和结果分析。
以下是一个典型的数据处理和结果分析流程:1.数据整理:将实验所得数据整理成合适的格式,并进行初步的数据处理。
2.数据分析:根据实验目标和研究问题,选择合适的数据分析方法进行数据分析。
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免疫沉淀(Immunoprecipitation IP )美国芝加哥大学分子肿瘤实验室提供一、准备试剂:IP裂解液配制方法(100毫升体积):50mM Tris-HCl pH 7.5 1M 5ml100mM NaCl 5M 2ml0.5% NP-40 (10% stock) 10ml0.3mM NaVO3 5.52mg50mM Na F 210mg20mM Na Pyrphosphate 892mg1mM PMSF 17.42mg加水至总体积达到100 ml二、实验步骤:(本方法适用于从细胞培养来源的蛋白质)1.将细胞培养液移去,加入裂解液-蛋白酶抑制剂混合液(IP-PI buffer)(T25培养瓶中加入1毫升,T75中加入3毫升),充分裂解后,将混合液转入微量离心管中。
2.冰上放置20分钟,偶尔轻微震荡。
3.4℃下,微量离心机最高速离心5分钟。
将上清液转移至另一微量离心管中。
4.加入30ul protein G- Sepharose beads(与IP-PI buffer 1:1混合)至样品中,4℃下充分混合震荡反应1小时。
5.微量离心机最高速离心1分钟,将上清转移至另一微量离心管中。
6.加入抗需要沉淀的蛋白质的抗体(2-5ug/ 样品),4℃下充分混合震荡反应1小时。
7.加入30ul protein G- Sepharose beads,4℃下充分混合震荡反应1小时。
8.微量离心机最高速离心1分钟,将上清吸弃,收集beads沉淀。
9.沉淀中加入2ul 2-巯基乙醇,煮沸10分钟,离心后取上清,行SDS-PAGE胶电泳及Wester-blotting 检测。
Western Blot(NC膜)重庆医科大学感染病分子生物学实验室一、SDS-PAGE胶电泳1. 75%酒精擦洗洁净玻片及加样梳,组装制胶槽;2. 配制分离胶:1)根据分子量选择分离胶的浓度;2)依次加入ddH2O、30%丙烯酰胺(普通滤纸过滤,避光保存)、1.5MTris-Cl(pH8.8)、10%SDS、10%过硫酸胺、TEMED,充分混匀,将混合液加至双层玻片之间;注意:1、TEMED是促凝剂,加了以后应迅速灌胶;2、分离胶的高度为插上加样梳后梳子下缘下1cm;3)以ddH2O封闭,室温放置1h以上;(可以加大促凝剂和催化剂的量,这样可以在短时间内完成分离胶配制;4)当水和分离胶有了可见的明显界限,倒掉上层水,以滤纸吸尽多余的水分(或将制胶器倾斜用加样枪吸去水即可);注意:手法轻柔一些,不可损伤分离胶;3. 配制积层胶:1)浓度均为5%,只需选择体积,宁多勿少;2)配制方法同上,灌至平低玻片上缘,插上加样梳,小心不能产生气泡;3)室温放置1h以上;(可以加大促凝剂和催化剂的量,节省时间)注意:1、BioRad的两块板需要分离胶7ml,积层胶3ml;2、此时Tris-Cl为1.0M(pH6.8);3、加样梳不能做平行移动,只能上下移动;4. 样品处理:1)细菌和细胞离心所得沉淀以PBS(也可以直接加入上样buffer)重悬,体积根据细菌量和细胞数调节;2)以等倍体积2×蛋白上样缓冲液混匀;3)沸水煮3-5分钟;注意:时间不宜过长,尤其是Marker;(Marker参看说明书要求,MBI的比较好,Prome ga的较差)4)离心,取上清加样;5. 电泳:1)电泳装置组装完毕后,加入甘氨酸电泳缓冲液,拔出加样梳;2)依次加样;(Marker最好选用预染型,这样在电泳时就可方便的判断目的蛋白的位置);3)积层胶电压宜小,90-120V,分离胶可增至120-180V。
注意:甘氨酸电泳缓冲液,通常配制5×贮存液,组成为:94g甘氨酸,15.1gTris碱,5g电泳级SDS,定容至1000ml,电泳时稀释成1×工作液;二、转膜1. 待溴酚兰迁移至玻片底缘时停止电泳;2. 切胶;1)轻柔启开双层玻片,使胶附着于一面玻片,此时还必须保留积层胶,因积层胶提示了泳道位置;(也可以用梳子来寻找泳道)注意:应该非常小心,胶的韧度虽然较大,但一点小的损坏会导致越来越大的麻烦;2)据泳道和预染Marker位置,以及目的蛋白的分子量确定胶的大小,尽量切去多余的胶,通常包含目的蛋白上下各1-1.5cm;3)将切好的胶放入电转缓冲液中浸泡(有报道浸泡15min-30min很好)。
注意做好标记以确定上下左右顺序;(时间为几min即可,标记可以在胶上截一个角)注意:尤其当胶近似正方形时,标记尤为重要;3. 准备滤纸和NC膜;1)按照胶的大小剪滤纸和NC膜,通常NC膜略小于胶,滤纸略小于NC膜,以避免短路(胶>NC膜>滤纸);NC膜和滤纸依照胶的位置做相同的标记,此时NC膜没有正反之分;注意:因为三者的顺序为滤纸1——胶——NC膜——滤纸2,要避免滤纸1和NC膜、胶和滤纸2接触,一旦接触将导致短路,转膜失败;2)滤纸共剪六层;3)将NC膜和滤纸放入电转缓冲液中浸泡;4. 制备“三明治”;1)用转移缓冲液浸泡海绵;2)按照三层滤纸、胶、NC膜、三层滤纸的顺序依次将它们放在海绵上,注意不要相互移动;注意:理论上一旦胶与NC膜接触就开始发生蛋白的转移,因此尽可能不使两者之间有平行移动,这是所有杂交系统的通性;3)装电转装置,注意正负极,胶在负极,NC膜在正极;5. 4℃电转过夜,电流约20mA;25-30V。
也可以恒压100v一个小时(开始电流为200m A,终电流为400mA,或者200mA 2个小时)。
注意:1、检查电流大小,过高电流导致转移失败。
高电流通常是由于转移缓冲液配制不当引起的。
分子量大的蛋白质用低浓度的胶效果好些。
不同的膜可能有不同的转膜缓冲液,需要查询厂家的说明书。
2、电转缓冲液:2.9g甘氨酸,5.8gTris碱,0.37gSDS,200ml甲醇,定容至1000ml;三、杂交(一)所需试剂:1.封闭液:PBST(1×PBS+5%脱脂奶粉+0.05%Tween20)或者3%BSA 的TBS 2.洗膜液:即1×PBS3.考马斯亮兰染色液:0.25g考马斯亮兰R250,以45ml甲醇,45mlddH2O,10ml冰乙酸的混合液充分溶解,滤纸过滤4.脱色液:45ml甲醇,45mlddH2O,10ml冰乙酸(二)实验步骤:1.封闭:1)取出电转过夜的NC膜,朝向胶的方向为正面,做好标记;2)将NC膜放入装有封闭液的小平皿中,置于摇床上缓速(小于70rpm)震荡1.5-2h,注意保证膜的所有部分与封闭液接触;注意:相对而言37℃摇床效果要好些,但室温也没有太大差别;但是如果遇到有杂带的问题就要考虑用室温封闭了。
3)转膜后的胶以考马斯亮兰染色以检测转膜效果;2.一抗结合;(注意:如果同一膜上要用不同的一抗则要将条带剪开分别加入)1)以封闭液稀释一抗,稀释比例参照一抗说明书;如果是自制血清就稀释500,1000甚至10000,1000002)将NC膜转移至密封袋,加入一抗稀释液,排尽气泡,封好密封袋;注意一定要将气泡排除,否则可能照成假阴性。
3)4℃过夜或者37℃摇床1.5-2h,但通常选择4℃过夜,效果好一些―――可以增加灵敏度;注意:1、4℃封闭过夜有可能会导致非特异结合增加,这有些矛盾;2、尼龙膜应该在45到50摄氏度下10%BSA中封闭至少12h;3、BSA是最常见的封闭剂,但BSA中常常污染有免疫球蛋白G,有时会影响结果;3.二抗结合;1)取出NC膜,放入含PBS(或者TBS)的平皿中洗涤,脱色摇床缓速震荡,共3次,每次10分钟;2)以封闭液稀释二抗,稀释比例参照二抗说明书;3)将NC膜转移至密封袋,加入二抗稀释液,排尽气泡,封好密封袋,室温放置或脱色摇床缓速震荡,1.5-2h或过夜。
四.显色1.取出封闭袋中的NC膜,放入含PBS的平皿中洗涤,脱色摇床缓速震荡,共3次,每次10分钟;2.在更小的平皿中先加ddH2O,具体体积参考NC膜大小,(通常10-15cm2的膜为4 ml),依次加入DAB显色试剂盒中的A、C、B各数滴,(用多少mlddH2O就加多少滴相应液体),充分混匀,(注意DAB试剂有毒),将NC膜正面朝下,轻轻晃动平皿使液体与NC膜充分接触,直至显色,(通常3-5min,若过了10min还没反应,多半失败),看到条带显色估计达到最大强度后以ddH2O终止显色反应。
(30min以内)终止显色后尽快成像,最多可以放1周。
(避光保存)3.成像存图。
(显色后膜的两侧显色强度不同的,做化学发光机器自动曝光要考虑把强的一面向镜头。
)注意:1.对于检测要求不高的样品,比如待检样品抗原达纳克级以上时,可采用DAB显色法进行Western Blot及免疫组化检测。
如果样品浓度太低可以用化学发光法做。
若ELISA结果为阳性,则再以Western Blot方法来再确认。
经由二阶段确认,可靠率达99%。
2.在Western,Southern 或Northern blot 实验系统中消除背景的“黄金”搭配( 所有结合清洗步骤):0.025%(w/v) SDS 0.05% (v/v) Triton X-100 (在阻断液中0.1%) 3.Western blot 膜的选择:NC膜的特点是价格低廉并且封闭的步骤简单快捷。
但是如果使用NC膜发现蛋白质结合率不够需要更高的结合率(尼龙膜480远远大于NC膜的80每平方厘米)(或者干脆某种蛋白和NC膜结合力不强-高分子量,酸性蛋白等)就可以选择尼龙膜。
当需要更高的机械强度时也可以使用尼龙膜。
但是尼龙膜比较贵些,封闭时间长步骤复杂且不能用阴离子染料染色。
―――取膜必须用镊子或者戴手套。
不同的膜可能有不同的转膜缓冲液,需要查询厂家的说明书。
4.如果转移效率低怎么办?转移缓冲液中加入终浓度为20%的甲醇。
它可以增加蛋白与NC膜的结合能力。
还可以预防凝胶变形;大分子量蛋白转移时间要延长点;转移缓冲液中加入终浓度为0.1%的SDS(但是SDS可能降低某些蛋白的转移效率);使用小孔径的NC膜,如0.2um的;转移完成后立即用戊二醛交联,可以增加小分子酸性蛋白与同膜的稳定性,防止其扩散,用前用含0.2%的戊二醛的TBS中浸泡45min。
5.检测方法的选择:DAB染色,即辣根过氧化物酶方法,探测10pg级化学发光,免疫金,同位素检测1pg级6.一抗通常保存于4摄氏度(详细看说明书),稀释后可以保存在-20摄氏度。
注意反复冻融会造成抗体聚集失活。
7.SDS-PAGE会导致抗原决定簇失活,如果怀疑是此原因,可以不做SDS-PAGE,而直接做Elisa或者直接将蛋白液体(甚至不要煮)点在NC膜上做。
这样没有SDS参与可以作为找到原因的途径――如果显色就说明簇失活的可能很大。