详细的淋巴细胞的分离、计数图文教程

细胞计数板
实验结果
细胞数量： 单个核细胞浓度（细胞数/ml)
=
2个大方格内细胞总数 2
×104×10 (稀释倍数）
细胞活力检测：（死细胞被染成蓝色，活细胞不着色）
活细胞百分率
=
ห้องสมุดไป่ตู้
活细胞数
×
细胞总数
100%
密度梯度离心法分离外周血单个核细胞：
纯度在90%以上 淋巴细胞约占90-95% 细胞收获率可达80-90% 活细胞百分率在95%以上
注意事项
稀释的肝素抗凝血，沿管壁轻轻叠加于分离液上 ，使两者形成一个清晰地界面。 细胞经离心分层后，缓慢小心吸取，切勿打破形 成的细胞层。
细胞计数的仪器
血细胞分析仪，临床常用
装有自动显微镜观察系统
自动细胞计数仪
T淋巴细胞的分离、计数
中山医学院免疫学教研室
实验目的和要求
掌握 外周血淋巴细胞分离的方法 掌握 细胞计数的方法
实验原理
外周血中细胞种类 红细胞和多核白细胞 淋巴细胞和单核细胞 血小板 细胞密度 1.090 1.075-1.090 1.030-1.035
密度梯度离心法：利用一种密度介于1.0751.092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心，使一定密 度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种细胞加以分离 。 本实验：淋巴细胞
实验方案
抽取外周血
分离淋巴细胞
细胞计数
实验材料
1. 肝素抗凝血 2. Hank’s液
3. 淋巴细胞分离液
4. 水平离心机 5. 显微镜 6. 细胞计数板
实验步骤
肝素抗凝静脉血1.5ml 加1.5mlHank’s液稀释 置于2ml淋巴细胞分离液上
稀释后的 抗凝血
淋巴细胞 分离液
(交界液面：一定不要打乱)
离心（2000rpm，25min） 用Hank’s液洗、离 心 (1000rpm，5min) 重复2次
血浆 淋巴细胞与 单核细胞层
分层液
红细胞 粒细胞
用Hank’s液重悬细胞 取10ul细胞悬液与90ul白细胞 计数液或台盼兰计数液混合
取10ul于细胞计数板上
细胞计数
细胞计数
数上不数下，数左不数右。