组胚 第一章 绪论

第一章绪论

组织学与胚胎学相互独立又相互关联

组织学是解剖学快的分支，又称显微解剖学，研究人体细胞、组织、器官的微细结构与相关功能。

胚胎学研究个体发生、生长及其发育机制。旨在阐明人体胚胎发育的形态、结构、变化特点、规律。

细胞是人体结构的基本单位，机体新陈代谢、生长发育、繁殖分化的形态基础。

组织：由细胞和细胞外基质构成的具有一定形态结构、生理功能的细胞群体。人体的基本组织：上皮、结缔、肌、神经→四大基本组织有机结合成器官→若干结构相似、功能相近的组织形成系统。

组织学与胚胎学的研究方法

光学显微镜技术（光学显微镜简称光镜1）：将组织、器官制成切片，在光学显微镜下观察。组织切片制作

一、石蜡切片法

①取材、固定：取动物或人体新鲜组织切成小块，用固定剂（常用甲醇）固定使其蛋白质迅速凝固，防止细胞自溶和组织腐败，最大程度保持组织省钱结构。

②脱水、包埋：用酒精脱去组织中的水分，用二甲苯（能溶于石蜡）置换出组织中的酒精，然后将组织块放在融化的石蜡中包埋，冷却后形成有一定硬度的蜡块。

③切片、染色：将蜡块放在切片机上，切成5-10微米的薄片，将组织切片贴于载玻片上，经二甲苯脱蜡后染色2。最后用树胶密封，加盖玻片密封好。

二、冰冻切片

将组织块置入液氮（-196℃），冷冻后直接切片。程序简单、快速，常用于免疫组织化学研究以及快速的病理诊断。

三、涂片

将液态的组织标本（如血液和精液）直接涂于载玻片上，以观察游离细胞的形态。

四、铺片

把疏松柔软的组织（如疏松结缔组织）撕成薄膜铺在载玻片上，以观察其中纤维的完整形态。

五、磨片

把坚硬的组织（如骨和牙）磨成薄片，放在显微镜下观察。

电子显微技术（电子显微镜简称电镜3）

一、透射电镜

用于观察组织和细胞内部的结构。由于电子束穿透能力低，所以必须制备超薄切片（厚度通

1最好的光镜分辨率约0.2微米，放大倍数为1500倍左右。借助光镜观察到的组织细胞结构，称作光镜结构。除此之外还有用于观察活细胞的相差显微镜，观察组织细胞内荧光物或荧光标记物的荧光显微镜等。2染色目的是使组织内不同结构呈现不同颜色而便于观察。

石蜡切片最常用的是苏木精-伊红染色法，简称HE染色法。苏木精为碱性染料，可将胞核中的染色质与胞质中的核糖体染成紫蓝色；伊红为酸性染料，能把细胞质与细胞外基质染成粉红色。组织中凡与苏木精亲和力强而被染成蓝紫色的特性称为嗜碱性；与伊红亲和性强而被染成粉红色的特性叫做嗜酸性；对两种染料亲和力都不强的称中性。

特殊染色方法：

硝酸银处理组织或细胞后呈黑色，呈亲银性；若加硝酸银后需要还原剂才能显色的叫嗜银性。

用碱性染料甲苯蓝将肥大细胞内的分泌颗粒染成紫红色，若分泌颗粒呈现出的颜色与染料不同，这种特性用醛复红将弹性纤维染成紫红色。

3以电子发射枪（电子枪）发射的电子束代替可见光，以磁场代替玻璃透镜，将放大的物象投射到荧光屏上进行观察。分辨率0.1~0.2纳米，放大倍数为几万至几百万倍。借助电镜观察到的结构称超微结构。

目前常用的是透射电镜(TEM)、扫描电镜(SEM)。

常为50~70nm),超薄切片制作步骤与石蜡切片相似，也经过取材、固定、脱水、包埋、切片、染色，但固定剂（戊二醛和锇酸），包埋剂（环氧树脂），切片机（超薄切片机），染料（重金属盐）等有所不同。细胞被重金属染色的部位，图像深，称为电子致密，图像亮称为电子透明。

二、扫描电镜

用于观察组织、细胞表面立体结构。不需要制成超薄切片，标本经固定、脱水、干燥、喷镀金属后即可观察。由于他景深长，凹凸不平的表面也能清晰成像，故图极富立体感。

组织化学技术：定性或定位地显示组织、和细胞内某种化学物质的存在、分布、状态

一、一般组织化学技术：在组织切片上滴加某种试剂，使其与组织、细胞内待检物质发生化学反应，并形成有色沉淀，以便在显微镜下识别。如常用过碘酸希夫反应（PAS反应）显示多糖或糖蛋白上的糖链。后者经与过碘酸与希夫试剂反应，形成紫红色产物，以证明多糖或糖蛋白的存在。

二、免疫组织化学技术：根据抗原抗体间特异性结合的原理，检测组织和细胞中某种多肽及蛋白质等大分子物质的存在与分布。常用标记物有荧光素、辣根过氧化物酶、胶体金。用荧光素标记抗体，在荧光显微镜下观察，称为免疫荧光技术。用已知抗体结合某种标记物形成标记抗体，标记抗体与组织切片孵化的时候，发生特异性结合，在显微镜下能观察到。

三、原位杂交技术带有标记物的已知碱基序列的DNA或RNA片段为核酸探针，与细胞内待检测的核酸片段按碱基配对原则进行特异性原位结合。在光镜或电镜下观察核酸的存在与定位，该技术有特异性，敏感性较高。

组织培养技术：将离体细胞、组织或器官放置在模拟体内生理环境条件的培养液中，在无菌和适当温度（37℃）等条件下进行体外培养，使之生存和生长。用以研究组织细胞的代谢、增殖、分化、形态及功能变化，还有各种理化因素（如药物、毒物、射线等）对活细胞的影响。

激光共聚焦技术：激光共聚焦扫描显微镜（CLSM)利用激光扫描束通过光栅针孔形成点光源，在荧光标记标本道德共聚焦平面上逐点扫描，对样品进行断层扫描和成像，并用计算机进行二维或三维的数据图像分析处理。

可以进行活细胞的动态观察和对样品进行多重荧光标记观察。

组织胚胎的学习方法：

理论、实践结合，联系平面与立体，联系结构与功能，

注重胚胎发育过程中结构变化与时间的联系4

4胚胎在从一个细胞（受精卵）