HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量

HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量摘要:目的：建立骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法定量柚皮苷，色谱柱：大连依利特C18反相柱（5μm×250mm×4.6mm），流动相：甲醇-醋酸-水（35：4：65），柱温为35℃，流速：1.0mL/min，检测波长：283nm。结果：HPLC 图谱显示，色谱峰形好，分离度高，阴性对照无干扰；供试品在24h 内稳定（RSD＝0.80％）；该方法精密度高（RSD＝0.31％），重复性良好（RSD＝0.34％），平均加样回收率为96.97%（RSD＝0.76%）。结论：所建立的方法适合作为骨碎补配方颗粒的含量测定方法。

关键词:骨碎补配方颗粒柚皮苷HPLC

骨碎补配方颗粒，为深圳三九医药股份有限公司生产的其中一种配方颗粒剂，在国内医院广泛应用。骨碎补，为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎，疗伤止痛，补肾强骨，外用消风祛斑，该药材及其饮片的质量标准收载于《中国药典》2010年版一部[1]。然而，骨碎补配方颗粒剂却缺乏质量标准。因此，为有效地控制该制剂的质量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）对骨碎补配方颗粒中的柚皮苷进行含量测定。该方法操作简便、重现性好、专属性强，灵敏度高，结果科学准确，适合作为该品种的含量测定方法。具体研究如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪，电子天平，超声波清洗器；骨碎补配方颗粒；柚皮苷对照品；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱

大连依利特C18反相柱（5m×250mm×4.6mm）；流动相为甲醇-醋酸-水（35：4：65）；流速为1.0min/min；柱温为35℃；检测波长为283nm；进样量为10μL。在此条件下，理论塔板数按柚皮苷峰计算不得低于3000，柚皮苷峰与相邻的其他峰的分离度应大于1.5。柚皮苷对照品、骨碎补配方颗粒和阴性对照色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

取柚皮苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加甲醇制成每

1ml含60μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取适量本品，研细，取约0.02g，精密称定，置5p2.7 重复性试验

取同一批号的骨碎补配方颗粒按2.3项下供试品溶液制备方法平行制备6份，测定柚皮苷的峰面积，计算。

2.8 加样回收率试验

取同一供试品；柚皮苷含量为28.1mg/g）6份，分别加入适量本品并精密称定，按2.3项下供试品制备方法和2.1项下色谱条件测定，计算。通过取样量（g）、样品含量（mg）、对照品加入量分别为0.3992mg、总含量（mg）、回收率（%）、RSD%=0.76%进行试验。结果依次如下：

1、0.01233g、0.3477mg、0.7348mg、97.0%

2、0.01192g、0.3361mg、0.7233mg、97.0%

3、0.01443g、0.4069mg、0.7881mg、95.5%

4、0.01524g、0.4298mg、0.8187mg、97.4%

5、0.01421g、0.4007mg、0.7890mg、97.3%

6、0.01325g、0.3736mg、0.7633mg、97.6%

2.9 样品测定

分别取3批不同批号的骨碎补配方颗粒，按2.2项下供试品制备方法和2.1项下色谱条件进行测定，计算样品中柚皮苷的含量。

3 讨论

3.1 提取方法的比较

笔者曾比较本文和中国药典2010年版一部收载的骨碎补材含量测定项下提取方法[1]对柚皮苷含量测定结果的影响。结果表明，超声处理和加热回流两种方法无显著性差异。另外，在超声处理时间的优化方面，笔者曾比较了30min、45min和1h，最后发现超声处理45min便能将样品中的柚皮苷提取充分。故本文选用操作简单的超声提取45min作为供试品制备方法。

3.2 不同色谱柱的比较

笔者比较了3种不同品牌的色谱柱（戴安C18、大连依力特C18和迪马C18）对柚皮苷含量测定结果的影响，结果表明，不同色谱柱的含量测定结果无显著性差异，该方法耐用性良好（RSD%=0.54%）。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中国人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2010.