羟基喜树碱纳米脂质载体的制备及体外释放

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中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2006, 37(12)
药物制剂
羟基喜树碱纳米脂质载体的制备及体外释放
张馨欣1, 3，操洪欣2，甘 勇3*，朱春柳3，潘卫三1
(1. 沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016；2. 莎特士(上海)国际贸易有限公司，上海 200001； 3. 中国科学院上海药物研究所，上海 201203)
摘要：采用“熔融乳化-高压均质法”制备以PEG 40硬脂酸酯、PEG 100硬脂酸酯修饰的纳米脂质载体PEG 40-NLC和 PEG 100-NLC，并考察释放装置、NLC中脂质材料用量及释放介质流速对体外释放的影响。结果表明，PEG 40-NLC和 PEG 100-NLC在桨-反向动态透析法和流通池-动态透析法中的释放曲线相似，而在转篮-动态透析法中的释放曲线与前二 种装置的释放曲线均有显著性差异。随着NLC脂质材料用量增大，释放过程中药物扩散作用增强。对流通池法，释放介 质流速增大，药物的释放加快。 关键词：羟基喜树碱；纳米脂质载体；流通池；动态透析；反向动态透析 中图分类号： 文章标识码：A 文章编号：1001-8255(2006)12-0820-04
1在0.2～10.0µg/ml浓度范围内线性关系良好， 标准曲线为A＝14.563C+4.2511，r＝0.9999。
1低、中、高3个浓度(0.2、3.0、6.0µg/ml)的 平均回收率分别为99.0％、99.2％、99.5％。日内 及日间RSD分别为2.0％和1.4％。 2.4 体外释放装置的选择 2.4.1 转篮-动态透析法
0
10 20 30 40 50
t/h
8ml/min; 12ml/min; 16ml/min
图3 不同流速下PEG 100-NLC的累积释放曲线
通池上端滤过后流出。流通池内的玻璃珠可使溶出 介质在流通池内均匀流动，被测样品中的药物均匀 释放。流通池法溶出仪模拟人体内胃肠道液单向流 动或血液循环的特征，且可更换不同类型的流通池 以适应各种剂型的需要。对于通常溶媒体积下(900 或1000ml)不能达到漏槽条件下的难溶性药物，选 用开放系统的流通池以增大介质体积，可真实反应 药物释放情况。
PEG 40-NLC和PEG 100-NLC在上述3种释放装 置中的释放曲线见图1。根据相似因子(f2)法[6]，计 算各释放曲线的相似因子，结果见表1。相似因子 计算公式如下：
f2＝50lg[[1+1/nΣWt(Rt-Tt)2]–0.5×100] 式中，R t和T t分别为相同处方制剂在不同释放 条件下于t时间的释放度；n是取样点的总数；Wt为 权重系数(本试验选择W t＝1 . 0)。通常认为，相同 处方不同批次的样品，在任一取样点的f 2值在5 0～ 100，表示两样品的释放度相似。
HP 1100型高效液相色谱仪(安捷仑公司)；Panda2K 型高压均质机(意大利GEA)；高剪切均质机(IKA公司)； R-205型旋转蒸发仪(上海中胜生物技术有限公司)；
本文为Sotax溶出度专稿 收稿日期：2006-09-13 作者简介：张馨欣(1982)，女，博士研究生，专业方向：纳米给 药系统研究。 通讯联系人：甘 勇(1975)，男，副研究员，从事药物新剂型新技 术研究。 Tel：021-50806600×2122 E-mail：ygan@mail.shcnc.ac.cn
2 方法与结果 2.1 NLC的制备
以PEG 40硬脂酸酯、PEG 100硬脂酸酯 修饰的1长循环NLC分别表示为PEG 40-NLC、 PEG 100-NLC，处方为1 30mg、单硬脂酸甘油 酯 5.20g、大豆油 1.30g、Epikuron 170 2.20g、 水 91ml、PEG 40硬脂酸酯(或PEG 100硬脂酸 酯)4.30g。
流通池-透析
转篮-透析
49.7
桨-反向透析
转篮-透析
45.8
由图1及表1结果可见，PEG 40-NLC和PEG 100-NLC在转篮-动态透析法、流通池-动态透析 法、桨-反向动态透析法中的释放速度依次加快。 后两法的释放曲线相似，而在转篮-动态透析法中 的释放曲线与其它二种装置的释放曲线均有显著性 差异。由于流通池法溶出仪可更好地动态模拟体液 循环，以下研究选择流通池法溶出仪，但最终方法 的确定有待于依据体内药动学与体外释放的相关性 进行选择。
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累积释放率/% 累积释放率/%
80
80
60
60
40
40
20
20
0
10 20 30 40 50
t/h
0
10 20 30
40 50
t/h
桨-反向透析; 流通池-透析; 转篮-透析
释放为非Fick's扩散，即药物从NLC中的释放为药 物扩散和骨架溶蚀的共同作用。且随脂质材料用量 增大，n略减小，释放过程中药物扩散作用增强， 骨架溶蚀作用减弱。 2.6 不同释放介质流速对体外释放的影响
以PEG 100-NLC为样品，其它条件不变，考 察流通池法溶出仪释放介质流速分别为8、12、 16ml/min时对体外释放的影响，结果见图3。由图3 可见，PEG 100-NLC的累积释放量随流速增加而增 加。 3 讨论
采用熔融乳化-高压均质法制备：称取处方量 的1、单硬脂酸甘油酯、大豆油、Epikuron 170加入 适量乙醇溶解，旋转蒸干乙醇，40℃真空干燥过 夜，80℃加热熔融后作为油相。将处方量的PEG硬 脂酸酯溶于注射用水中，加热至相同温度作为水 相。搅拌下将水相趁热滴入油相，通N2条件下于高 剪切均质机(6500r/min，10min)制备初乳，80℃、 N 2下高压均质机一级阀8 0 0 b a r、二级阀8 0 b a r均质
取1甲醇溶液适量，分别以pH 7.4磷酸盐缓 冲液(PBS)及水稀释得10µg/ml的溶液，在200～ 400nm波长紫外扫描。结果表明，1水溶液和1 PBS 溶液均在266nm和370nm处有较大吸收。溶剂无干 扰，本研究选择266nm为体外释放的测定波长。
色谱条件为：色谱柱O D S C 18柱(4 . 6 m m × 150mm，5µm)流动相 甲醇-水(50∶50)；柱温 25℃； 流速 1.0ml/min，检测波长 266nm；进样量 20µl。
采用中国药典2005年版二部附录ⅩC第二法 装置，以PBS 900ml为释放介质，转速50r/min， 温度(37±0.5)℃。将装有10ml释放介质的透析袋 (截止分子量 12000～14000)，共10个，浸入释放 介质中平衡12h。精密量取5ml PEG 40-NLC或PEG
100-NLC的水分散体直接加入释放介质中，分别于 各取样点取出一个透析袋，取其中释放介质过滤， 酸化后进样。 2.4.3 流通池-动态透析法
流通池法溶出仪工作原理[7]是：溶出介质由恒 流泵泵入(流速可调节)，经装有恒温装置热交换器 的水浴，自下端进入流通池，与样品接触，并由流
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累积释放率/%
80 60 40 20
表2 PEG 40-NLC和PEG 100-NLC
体外释放Ritger-Peppas方程拟合结果
样品
脂质用量/g Ritger-Peppas方程
r
5.5
lnR＝0.80lnt-3.14
0.9934
PEG 40-NLC
6.5
lnR＝0.77lnt-3.11
0.9972
7.5
lnR＝0.67lnt-2.89
表1 PEG 40-NLC和PEG 100-NLC
在3种释放装置中释放曲线的相似因子(f2)
样品
试验装置1 桨-反向透析
试验装置2 流通池-透析
释放曲线f2 78.4
PEG 40-NLC
流通池-透析ຫໍສະໝຸດ Baidu
转篮-透析
49.7
桨-反向透析
转篮-透析
45.9
桨-反向透析
流通池-透析
80.1
PEG 100-NLC
DZF-6000型真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)；Nicomp 380 ZLS型粒径测定仪(Santa Barbara)；RCZ-8B型溶出仪 (天津大学无线电精密仪器厂)；CE7 smart流通池法溶出仪 (Sotax)。
1(上海骏杰生物技术有限公司)；单硬脂酸甘油酯 GMS(日本理研维他命株式会社)；PEG 40硬脂酸酯(分子 量2000)、PEG 100硬脂酸酯(分子量4400)(Sigma)；卵磷脂 Epikuron 170(Degussa)；注射用大豆油(Lipoid)。
采用美国药典29版溶出度测定法第四法闭合 系统装置，22.6mm流通池，以PBS 200ml为释放 介质，流速为8ml/min，温度(37±0.5)℃。将装有 1ml PEG 40-NLC或PEG 100-NLC的透析袋(截止分 子量 12000～14000，直径8mm)置小池中，分别于 各取样点吸取释放液2ml，同时补充等量同温释放 介质。样品过滤酸化后进样。
采用中国药典2005年版二部附录ⅩC第一法 装置，以PBS 900ml为释放介质，转速100r/min， 温度(37±0.5)℃。将装有5ml PEG 40-NLC或PEG 100-NLC的透析袋(截止分子量 12000～14000)置转 篮中，浸入释放介质，分别于各取样点吸取释放液 10ml，同时补充等量同温释放介质。样品过滤酸化 后进样。 2.4.2 桨-反向动态透析法
羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,1)是从喜树 中提取的微量生物碱[1]，对腹水型肝癌、头颈部肿 瘤、胃癌及白血病等有一定疗效[2]。但半衰期短， 内酯环对pH敏感，开环后抗癌活性降低90％[3]。
纳米脂质载体(nanostructrued lipid carries,NLC)是由固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)发展而来的一种新型载药系 统。NLC的制备是通过向固态脂质中加入化学差异 很大的液态油，使纳米粒以结晶缺陷型或无定形结 构存在，因此可避免放置过程中药物外排、包封率 降低[4,5]。N L C亦具有生物相容性好、易于大规模 生产等优点。本研究以1为模型药物，制备了聚乙 二醇(PEG)修饰的NLC，并考察了溶出装置、释放 条件、处方等因素对体外释放的影响。 1 仪器与试药
0.9955
5.5
PEG 100-NLC
6.5
7.5
lnR＝0.79lnt-3.39 lnR＝0.75lnt-3.31 lnR＝0.59lnt-2.81
0.9967 0.9883 0.9971
由图2和表2可见，随脂质材料用量增大，PEG 40-NLC及PEG 100-NLC体外释放减慢。由RitgerPeppas方程拟合可见n介于0.45～0.85，可推测药物
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8次，倾入冰水中迅速冷却后得到半透明的胶体溶 液。 2.2 粒径和多分散系数
取PEG 40-NLC或PEG 100-NLC适量，以水稀 释后，测得PEG 40-NLC的平均粒径为88.6nm，多 分散系数为0.065，90％ PEG 40-NLC的粒径小于 118.7nm；PEG 100-NLC的平均粒径为99.5nm，多 分散系数为0.229，90％ PEG 100-NLC的粒径小于 163.8nm。 2.3 体外释放度测定方法
图1 不同释放装置中PEG 40-NLC(A)和PEG 100-NLC(B)的释放曲线(n＝3)
2.5 NLC中脂质材料用量对体外释放的影响 按“2.1”项下处方，考察单硬脂酸甘油酯与
大豆油比例不变(4∶1)，两者总量分别为5.5、6.5
和7.5g时，PEG 40-NLC和PEG 100-NLC的体外释 放曲线，结果见图2。
100
100
80
80
累积释放率/% 累积释放率/%
60
60
40
40
20
20
0
10 20 30
40 50
t/h
0
10
20
30
40
50
t/h
5.5g; 6.5g; 7.5g
图2 脂质材料用量不同时PEG 40-NLC(A)和PEG 100-NLC(B)的体外释放曲线(n=3)
PEG 40-NLC和PEG 100-NLC的体外释放结果 分别用Ritger-Peppas方程(lnR＝n·lnt+C)进行拟合， 结果见表2。