小鼠卵母细胞减数分裂染色体的制备 Preparation of Meiotic Karytype of Mouse Oocyte
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Ｌ Ｃ ａ ｊｎ Ｙａ Ｌ ｉｉｇ Ｚ ａ ｇ ｉ ｎ Ｃｈ ｎ ｆｎ ｉ ｏｕ ｈ ｎ ｃｐｎ ｈｎ Ｘｒ ａ ｃ Ｙｉ ｇ ｅ
（ ｉｏ ｙ ｐ ｒ ｅ ｔ ｎｉ Ｎ ｒ ｌ ｉ ｒｉ ， ｎｉｇ ０ ９） Ｂｏ ｇ Ｄ ａｔ ｎ ｏ Ｎａｊ ｇ ｍａＵｎｖ ｓｙ Ｎ ｊ ２ ０７ ｌ ｅ ｍ ｆ ｎ ｏ ｅ ｔ ａ ｎ １
处死小鼠．将卵巢置于Ｍ２ 培养液中，在实休解剖镜下除去输卵管及附着的 脂肪，用小号针头穿刺有腔卵泡，轻 轻挤压，外面 有卵丘细胞生长完全的卵母细胞从卵泡中 包围 逸出．用玻璃吸卵管将卵母细胞一一移出，置于Ｍ２
培养液中，用略小于卵母细胞直径的吸卵管轻轻吹打卵毋细胞。将外而的卵丘细胞去除．将卵母细胞置于覆盖有 石蜡油的微滴中，于３ｒ， Ｏ： ７ ５ － ％Ｃ 的溉度饱和培养箱中培养，培养液为ＤＭＥ ４ ／ 牛血清白蛋白． Ｍ＋ｍｇ ｌ ｍ
参 考
文
献
（ ） 王子淑编著，１８ ．人休及动物细胞遗 传学 实验技术， １ ９７ 成都： 四川 大学出版社． （ 〕 黄天华等，１８ ．遗传与疾病， （） １４ ２ ９７ ４３： ． ７
（ 〕 苏瑞珍， ３ 何 建，１８． ９２ 科学通报， ７２） １２－１２． ２（４： ３ ５４ ５
（ ） Ｂ ｏ ｄ ｒ Ｗ ｔ １９ ．Ｄ ｖｌｐ ｎ ａ Ｂｏｏ ｙＴ ｉ ｅ ｉ ｏ ） Ｓ ｕ ｄ ｒ Ｃ ｌ ｇ ４ ｒ ｗ ｅ Ｌ ｅ ａ， １ ｅ ｅ ｍｅ ｔｌ ｌｇ （ ｈｒ ｄｔ ｎ， ｎ ｅｓ ｌ ｅ ｌ ９ ｏ ｉ ｄ ｉ ａ ｏｅ
过程中各时期染色休的标本，尤其是两次减数分裂中期染色பைடு நூலகம்的制备尤为方便．并通过显示 Ｃ带进一步确定染 色休的数目， 可用于研究休外培养条件下各种因家对卵母细胞染色休的影响．
Ｉ材 料 与 方 法
１ ． １卵母细胞的获取和体外培养
取 １－２ ９ ２日龄的雌性昆明系小鼠，用５Ｕ／ １ 只孕马血清激索处理以促进卵泡发育．４ ８小时后，颈部脱位法
胞的地方作 记号 ，便于观 察 ．
图 ， 小鼠 Ｊ 减数分裂中 １ 卵Ｎ细胞 期 晚期的 分裂相（ 、中 １的分裂相（ 及早中期分裂相的 Ｃ带（（ ２０ ａ ） 期 １ ｂ ） （ ｘ ） ｃ ０ ）
减数分裂染色休制备对研究减数分裂过程中雌性生琐细胞同源染色休联会，遗传物质交换以及染色体减数 （ 由二倍体减至单倍体） 等现象的规律．以及环境中各种诱变因子对其影响提供了方便， 特别是一些遗传病是由于 减数分裂过程中染色休分离不完全所致．如一些非整倍体的发生等 （ ．所以，建立制备卵母细胞染色休方法， ‘ ） 根据卵母细胞减数分裂过程中染色休的变化研究一些染色体病的发病机理具有一定的意义．
１ ． ３染色体 Ｃ带的制备
取片龄在 Ｉ 周左右的染色休玻片标本，３： 的甲醉 ： １ 冰醋酸固定液褪色 １ 分钟．在 ０ ｍ ｌ ． ｏ／ ２ Ｌ盐酸溶液中
室 温处理３ 分钟，除去非酸性蛋白质．蒸馏水清洗后，于５℃的５ ０ ２ ％的Ｂ（Ｈ： ａ ）水浴中 Ｏ 处理６ 分钟到８ 分钟左
右，于６℃的 ２ Ｓ ０ ｘ Ｃ榕液中处理 ２ Ｓ 小时，清恍后用３ ％的Ｇｉ ａ ｅ 染液染色 １ 分钟，观察 （ ． ｍｓ ５ Ｉ ）
制备卵母细胞染色体时，有采用在小离心管低渗、固定 （ ，或在表而皿里低渗、固 ’ 〕 定方法 〔 ，其目的都 ） ５
是防止卵母细胞的丢失，我们在试验发现，山于卵母细胞本身的粘附作用和不同溶剂相的扰动，这些方法还是容 易造成细胞的丢失，所以我们采用低渗后放在载玻片上固定的方法．但是包含卵母细胞的液体，每滴尽量不超过 ２ 毫米直径．同时，固定时卵母细胞易随液休流动，极易造成染色休的－失．因此，必须等液滴的液休快千、卵 Ｔ ： 毋细胞刚刚铺展在载玻片上时，用吸卵管滴加固定液．固定过程中不能让其千燥，固定时间宜长些，以去除卵母 细胞浓厚的细胞质．同时，将低渗后的卵毋细胞直接放在载玻片上固定不易造成卵毋细胞的丢失，并可在固定细
哺乳动物的卵母细胞的减数分裂过程中存在两次自发的停滞现象，第一次是在第一次减数分裂前期的双线 期，这一静止期持续很长时间，一 直到动物性成熟后卵母细胞进人发育周期，在促性腺激家的作用下，卵母细胞 的第一次减数分裂才重新启动．完成第一次减数分裂后，又停滞在第二次减数分裂的中期．在精子或化学因素刺
激 作用 完 第二 减数 的 下， 成 次 分裂（ ． 此， ｐ乳 物的 母 在一 条件 进 养， 制备 数 ） ４ 因 对ｉ 动 卵 细胞 定 下 行培 可 减 分裂 ｌ ｌ
１ ． ２中期Ｉ 和中期Ｉ Ｉ 染色体的制备
培养 １－２ 小时后，卵母细胞自 ８ ０ 发停滞于第二次减数分裂的中期．用链蛋白酶 Ｅ处理去除透明带，将第一 极体去除．以避免极休内染色体的干扰．若要得到第一次减数分裂中期相，可在培养液中加０ ｐ ／ 秋水仙素 ． ｇ ２ ｍｌ 使卵母细胞停止在第一次减数分裂的中期． 制备中期Ｉ 染色体时，卵母细胞可在双蒸水中低渗处理 ３－４ 分钟（ ０ ０ 去除透明带的中期Ｉ卵母细胞可在 １ Ｉ ％ 的柠檬酸钠中低渗） ．用吸卵管吸取低渗较好的卵毋细胞于干净载玻片上，当溶液快干前，在解剖镜下将３： 的 １ 甲醇 ： 冰醋酸滴人固定，固定几次后更换为 １ Ｉ醇 ： ：１ 冰醋酸．空气干燥后，Ｇ ａ１ ９染液扣染 ３ 分钟， Ｉ Ｉ ｉ （： ） ｃ ｍｓ ０ 自 来水冲洗数秒．晾干后观察．
Ｐ ｂ ｉｈｎ ， ． 一 １４ ｕ ｌｓ ｉ ｇ ｐ ５ ｐ ４ ２． 〔 ５〕 Ｅ ｃ ｅ ｌｕ 一 ｔｅ Ｕ， ｏｌ １ ８ ． ｙｏ ｅ ｅｉ Ｃ ｌ Ｇｅ ｅ． ５ ： ０－１ ６ ｉｈ ｎ ａ ｂ Ｒｕ ｔｒ Ｂ ｌ １ ９ ９ Ｃ ｔｇ ｎ ｔｃ ｌ ｎ ｔ ２ １ － ７ ． ， ｅ ， ７ （ ６〕 Ｅ ｃ ｅ ｌｕ 一 ｔｅ Ｕ， ９ ． ｒ ｍｏ ｏ ｓ ｄ ｙ Ｓ ｍｎ ｒ ａ ｄ ｈ ｎ ｌ ＡＣ ｄ ． ｉｈ ｎａ ｂ Ｒｕ ｔｒ １ ３ Ｃｈ ｏ ｓ ｍｅ Ｔ ａ ． ９ ｏ ｕ ｅ ＡＴ ｎ Ｃ ａ ｄ ｙ Ｅ ｓ Ｃｈ ｐ ｎ ｄ ａｌ ｅ ｓ Ｌ ｎ ｏ ． ｉ， Ｄ ３ ３ ３ ６ ａ ｍａ ａ Ｈ ｌ Ｐ ｓ， ｄ ｎ Ｖ． Ｐ ． 一 ３ ． ｎ ｒ ｏ ｉ ２ 本文于 １ ９ ９ ５年 １ 月 ６日 收到 ．１ ９ １ ９ ６年 ５月 ２日修 回 ．
①引级 木科生， 工作单位： 现 江苏省如皋市搬经 中学．
２ ８
遗
传 ＨＥ Ｅ Ｉ Ａ （ｅ ｉｇ １９ Ｒ Ｄ Ｔ Ｓ ｉｎ） ６ Ｂ ｊ ９
１卷 ８
２结 果 一 讨 论 与
国内有关哺乳动物减数分裂染色体的研究，大多集中在雄性动物 （ ，可能是因为雌性动物的染色体制备相 ２ ） 对困难的缘故．本研究的目的就在于建｝ Ｌ ＇ 一个相对简单易行的卵．： ｒ细胞减数分裂染色体的制各方法ｒ实验结果如 ； Ｉ 图１ 所示，图 ｌ 为 ＭＩ ａ 晚期的分裂相．表现出２ ０对同源染色休相互配对的现象．由于小鼠是端着丝粒染色体， 因而１在分离的十字形的同源染色体配对特别清晰．图 ｌ Ｅ ｂ为ＭＥ分裂相。表现为姊妹染色单体尚未分离前的２ ０ 个姊妹染色体的形态．图 ｌ 为第一次减数分裂早中期分裂相的Ｃ带图，可见尚存在交叉的终变期染色体和正在 ｃ 分离的同禅染色体．每对同源染色体均有两个若丝粒，着丝粒的个数为 ４． ０
遗传 ＨＥ Ｅ ＩＡ （ｅｉｇ １（ ： ２ １９ Ｒ Ｄ Ｔ Ｓ ｉｎ） ６ ２ ８ ６ Ｂｊ ８ ） ７ ９
小鼠卵母细胞减数分裂染色体的制备
李朝军 袁来平① 张锡然 陈宜峰
《 南京师范大学生物系， 南京 ２０９） １０７
Ｐ ｅａａｉ ｏ Ｍｅ ｔ Ｋ ｒｔｐ ｏ Ｍｏ ｓ Ｏ ｃｔ ｒｐｒｔ ｎ ｉ ｉ ａｙｙｅ ｕｅ ｙｅ ｏ ｆ ｏ ｃ ｆ ｏ
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处死小鼠．将卵巢置于Ｍ２ 培养液中，在实休解剖镜下除去输卵管及附着的 脂肪，用小号针头穿刺有腔卵泡，轻 轻挤压，外面 有卵丘细胞生长完全的卵母细胞从卵泡中 包围 逸出．用玻璃吸卵管将卵母细胞一一移出，置于Ｍ２
培养液中，用略小于卵母细胞直径的吸卵管轻轻吹打卵毋细胞。将外而的卵丘细胞去除．将卵母细胞置于覆盖有 石蜡油的微滴中，于３ｒ， Ｏ： ７ ５ － ％Ｃ 的溉度饱和培养箱中培养，培养液为ＤＭＥ ４ ／ 牛血清白蛋白． Ｍ＋ｍｇ ｌ ｍ
参 考
文
献
（ ） 王子淑编著，１８ ．人休及动物细胞遗 传学 实验技术， １ ９７ 成都： 四川 大学出版社． （ 〕 黄天华等，１８ ．遗传与疾病， （） １４ ２ ９７ ４３： ． ７
（ 〕 苏瑞珍， ３ 何 建，１８． ９２ 科学通报， ７２） １２－１２． ２（４： ３ ５４ ５
（ ） Ｂ ｏ ｄ ｒ Ｗ ｔ １９ ．Ｄ ｖｌｐ ｎ ａ Ｂｏｏ ｙＴ ｉ ｅ ｉ ｏ ） Ｓ ｕ ｄ ｒ Ｃ ｌ ｇ ４ ｒ ｗ ｅ Ｌ ｅ ａ， １ ｅ ｅ ｍｅ ｔｌ ｌｇ （ ｈｒ ｄｔ ｎ， ｎ ｅｓ ｌ ｅ ｌ ９ ｏ ｉ ｄ ｉ ａ ｏｅ
过程中各时期染色休的标本，尤其是两次减数分裂中期染色பைடு நூலகம்的制备尤为方便．并通过显示 Ｃ带进一步确定染 色休的数目， 可用于研究休外培养条件下各种因家对卵母细胞染色休的影响．
Ｉ材 料 与 方 法
１ ． １卵母细胞的获取和体外培养
取 １－２ ９ ２日龄的雌性昆明系小鼠，用５Ｕ／ １ 只孕马血清激索处理以促进卵泡发育．４ ８小时后，颈部脱位法
胞的地方作 记号 ，便于观 察 ．
图 ， 小鼠 Ｊ 减数分裂中 １ 卵Ｎ细胞 期 晚期的 分裂相（ 、中 １的分裂相（ 及早中期分裂相的 Ｃ带（（ ２０ ａ ） 期 １ ｂ ） （ ｘ ） ｃ ０ ）
减数分裂染色休制备对研究减数分裂过程中雌性生琐细胞同源染色休联会，遗传物质交换以及染色体减数 （ 由二倍体减至单倍体） 等现象的规律．以及环境中各种诱变因子对其影响提供了方便， 特别是一些遗传病是由于 减数分裂过程中染色休分离不完全所致．如一些非整倍体的发生等 （ ．所以，建立制备卵母细胞染色休方法， ‘ ） 根据卵母细胞减数分裂过程中染色休的变化研究一些染色体病的发病机理具有一定的意义．
１ ． ３染色体 Ｃ带的制备
取片龄在 Ｉ 周左右的染色休玻片标本，３： 的甲醉 ： １ 冰醋酸固定液褪色 １ 分钟．在 ０ ｍ ｌ ． ｏ／ ２ Ｌ盐酸溶液中
室 温处理３ 分钟，除去非酸性蛋白质．蒸馏水清洗后，于５℃的５ ０ ２ ％的Ｂ（Ｈ： ａ ）水浴中 Ｏ 处理６ 分钟到８ 分钟左
右，于６℃的 ２ Ｓ ０ ｘ Ｃ榕液中处理 ２ Ｓ 小时，清恍后用３ ％的Ｇｉ ａ ｅ 染液染色 １ 分钟，观察 （ ． ｍｓ ５ Ｉ ）
制备卵母细胞染色体时，有采用在小离心管低渗、固定 （ ，或在表而皿里低渗、固 ’ 〕 定方法 〔 ，其目的都 ） ５
是防止卵母细胞的丢失，我们在试验发现，山于卵母细胞本身的粘附作用和不同溶剂相的扰动，这些方法还是容 易造成细胞的丢失，所以我们采用低渗后放在载玻片上固定的方法．但是包含卵母细胞的液体，每滴尽量不超过 ２ 毫米直径．同时，固定时卵母细胞易随液休流动，极易造成染色休的－失．因此，必须等液滴的液休快千、卵 Ｔ ： 毋细胞刚刚铺展在载玻片上时，用吸卵管滴加固定液．固定过程中不能让其千燥，固定时间宜长些，以去除卵母 细胞浓厚的细胞质．同时，将低渗后的卵毋细胞直接放在载玻片上固定不易造成卵毋细胞的丢失，并可在固定细
哺乳动物的卵母细胞的减数分裂过程中存在两次自发的停滞现象，第一次是在第一次减数分裂前期的双线 期，这一静止期持续很长时间，一 直到动物性成熟后卵母细胞进人发育周期，在促性腺激家的作用下，卵母细胞 的第一次减数分裂才重新启动．完成第一次减数分裂后，又停滞在第二次减数分裂的中期．在精子或化学因素刺
激 作用 完 第二 减数 的 下， 成 次 分裂（ ． 此， ｐ乳 物的 母 在一 条件 进 养， 制备 数 ） ４ 因 对ｉ 动 卵 细胞 定 下 行培 可 减 分裂 ｌ ｌ
１ ． ２中期Ｉ 和中期Ｉ Ｉ 染色体的制备
培养 １－２ 小时后，卵母细胞自 ８ ０ 发停滞于第二次减数分裂的中期．用链蛋白酶 Ｅ处理去除透明带，将第一 极体去除．以避免极休内染色体的干扰．若要得到第一次减数分裂中期相，可在培养液中加０ ｐ ／ 秋水仙素 ． ｇ ２ ｍｌ 使卵母细胞停止在第一次减数分裂的中期． 制备中期Ｉ 染色体时，卵母细胞可在双蒸水中低渗处理 ３－４ 分钟（ ０ ０ 去除透明带的中期Ｉ卵母细胞可在 １ Ｉ ％ 的柠檬酸钠中低渗） ．用吸卵管吸取低渗较好的卵毋细胞于干净载玻片上，当溶液快干前，在解剖镜下将３： 的 １ 甲醇 ： 冰醋酸滴人固定，固定几次后更换为 １ Ｉ醇 ： ：１ 冰醋酸．空气干燥后，Ｇ ａ１ ９染液扣染 ３ 分钟， Ｉ Ｉ ｉ （： ） ｃ ｍｓ ０ 自 来水冲洗数秒．晾干后观察．
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①引级 木科生， 工作单位： 现 江苏省如皋市搬经 中学．
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１卷 ８
２结 果 一 讨 论 与
国内有关哺乳动物减数分裂染色体的研究，大多集中在雄性动物 （ ，可能是因为雌性动物的染色体制备相 ２ ） 对困难的缘故．本研究的目的就在于建｝ Ｌ ＇ 一个相对简单易行的卵．： ｒ细胞减数分裂染色体的制各方法ｒ实验结果如 ； Ｉ 图１ 所示，图 ｌ 为 ＭＩ ａ 晚期的分裂相．表现出２ ０对同源染色休相互配对的现象．由于小鼠是端着丝粒染色体， 因而１在分离的十字形的同源染色体配对特别清晰．图 ｌ Ｅ ｂ为ＭＥ分裂相。表现为姊妹染色单体尚未分离前的２ ０ 个姊妹染色体的形态．图 ｌ 为第一次减数分裂早中期分裂相的Ｃ带图，可见尚存在交叉的终变期染色体和正在 ｃ 分离的同禅染色体．每对同源染色体均有两个若丝粒，着丝粒的个数为 ４． ０
遗传 ＨＥ Ｅ ＩＡ （ｅｉｇ １（ ： ２ １９ Ｒ Ｄ Ｔ Ｓ ｉｎ） ６ ２ ８ ６ Ｂｊ ８ ） ７ ９
小鼠卵母细胞减数分裂染色体的制备
李朝军 袁来平① 张锡然 陈宜峰
《 南京师范大学生物系， 南京 ２０９） １０７
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