微生物检测新技术
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1. 抗血清凝集技术 2. 乳胶凝集实验Βιβλιοθήκη Baidu3 .荧光抗体检测技术 4 .协同凝集试验 5 .酶联免疫测试技术
三、分子生物学技术在检测食源性病 原微生物中的应用
聚合酶技术(PCR) 核酸探针
一、PCR的定义: PCR(polymerase chain reaction) : 聚合酶链式反应,又称体外DNA扩增技术。 近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。
四、病原微生物的自动化系统
1.原理:碳源(或氮源)利用实验原理。不同细菌 会利用不同种类的碳源(或氮源)进行新陈代谢, 将一系列碳源(氮源)按特定顺序排列组合,在反 应体系中加入指示剂,根据反应的阴阳性得到某一 细菌的反应图谱。检测时,将待检菌的反应结果与 数据库中的代谢图谱进行对照,从而得到该细菌的 检测结果。
扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合,基 本反应步骤分三步: 1. 变性 (Denaturation): 加热使模板DNA双链间的氢键断裂而形成两条单链。 94℃ 30″ 2. 退火 (复性) (Annealling): 突然降温后模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合, 也存在两条模板链之间的结合,但由于引物的高浓度, 结构简单的特点,主要的结合发生在模板与引物之间。 55 ℃ 30 ″
3. 延伸 (Extension): 将反应温度调节到酶的最适温度,在DNA聚合酶、4 种 dNTPs 及镁离子等存在的条件下,以引物的 3′ 端开始,结合单核苷酸,形成与模板链互补的新DNA 链。72 ℃ 1′ 上述 3 步为一个循环,每经过一个循环,样本中的 DNA量应该增加一倍,新形成的链又可成为新一轮循 环的模板,经过25~40个循环后DNA可扩增106 ~ 109 倍。
二、PCR的原理:
用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段, 类似于天然DNA的复制过程。 以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板 5′末端和3′末端互补的寡核苷酸片段为引物,在 DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着 模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程, 即可使目的DNA片段得到扩增。
微生物检测新技术
一、快速酶触反应及细菌代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在其生长繁殖过程 中可合成和释放某些特异性的酶,按酶的特 性,选用相应的底物和指示剂,将他们配制 在相关的培养基中。根据细菌反应后出现的 明显的颜色变化,确定待分离的可疑菌株, 反应的测定结果有助于细菌的快速诊断。
二、免疫学方法检测细菌抗原或抗体 的技术
三、分子生物学技术在检测食源性病 原微生物中的应用
聚合酶技术(PCR) 核酸探针
一、PCR的定义: PCR(polymerase chain reaction) : 聚合酶链式反应,又称体外DNA扩增技术。 近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。
四、病原微生物的自动化系统
1.原理:碳源(或氮源)利用实验原理。不同细菌 会利用不同种类的碳源(或氮源)进行新陈代谢, 将一系列碳源(氮源)按特定顺序排列组合,在反 应体系中加入指示剂,根据反应的阴阳性得到某一 细菌的反应图谱。检测时,将待检菌的反应结果与 数据库中的代谢图谱进行对照,从而得到该细菌的 检测结果。
扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合,基 本反应步骤分三步: 1. 变性 (Denaturation): 加热使模板DNA双链间的氢键断裂而形成两条单链。 94℃ 30″ 2. 退火 (复性) (Annealling): 突然降温后模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合, 也存在两条模板链之间的结合,但由于引物的高浓度, 结构简单的特点,主要的结合发生在模板与引物之间。 55 ℃ 30 ″
3. 延伸 (Extension): 将反应温度调节到酶的最适温度,在DNA聚合酶、4 种 dNTPs 及镁离子等存在的条件下,以引物的 3′ 端开始,结合单核苷酸,形成与模板链互补的新DNA 链。72 ℃ 1′ 上述 3 步为一个循环,每经过一个循环,样本中的 DNA量应该增加一倍,新形成的链又可成为新一轮循 环的模板,经过25~40个循环后DNA可扩增106 ~ 109 倍。
二、PCR的原理:
用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段, 类似于天然DNA的复制过程。 以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板 5′末端和3′末端互补的寡核苷酸片段为引物,在 DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着 模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程, 即可使目的DNA片段得到扩增。
微生物检测新技术
一、快速酶触反应及细菌代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在其生长繁殖过程 中可合成和释放某些特异性的酶,按酶的特 性,选用相应的底物和指示剂,将他们配制 在相关的培养基中。根据细菌反应后出现的 明显的颜色变化,确定待分离的可疑菌株, 反应的测定结果有助于细菌的快速诊断。
二、免疫学方法检测细菌抗原或抗体 的技术