沉淀分离技术(试题学习)

第二讲沉淀分离技术2学时

※、通过本章学习应掌握的内容

1、什么是沉析？

2、沉析法纯化蛋白质的优点有哪些？

3、沉析的一般操作步骤是什么？

4、何谓盐析？其原理是什么？

5、盐析操作时常用的盐是什么？

6、影响盐析的主要因素有哪些？

7、有机溶剂沉析法的原理是什么？

8、影响有机溶剂沉析的主要因素有哪些？

9、等电点沉析的工作原理是什么？

10、其它常用的沉析方法有哪些？

一、沉淀分离的目的及其方法

沉淀分离技术是经典的化学分离技术。沉淀的概念是指溶液中的介质在适当条件下由液相变成固相而析出的过程。

沉淀技术的目的包括两个：⑴通过沉淀使目标成分达到浓缩和去杂质的目的。当目标成分是以固相形式回收时，固液分离可除去留在溶液中的非必要成分；如果目标成分是以液相形式回收时，固液分离可使不必要的成分以沉淀形式去除。⑵通过沉淀可使已纯化的产品由液态变成固态，有利于保存和进一步的加工处理。

沉淀分离技术通常包括下列各种沉淀方法：

⑴无机沉淀剂沉淀分离法：通常是以盐类作为沉淀剂的一类沉淀方法，如盐

析法，多用于各种蛋白质和酶类的分离纯化，以及某些金属离子的去除。常用的沉淀剂有：硫酸铵、硫酸钠、柠檬酸钠、氯化纳等。

⑵有机沉淀剂沉淀分离法：以有机溶剂作为沉淀剂的一种沉淀分离方法，

多用于生物小分子、多糖及核酸类产品的分离；有时也用于蛋白质的沉淀和金属离子的去除；用于酶的沉淀分离时，易导致酶的失活。常用到的沉淀剂有：丙酮、乙醇、甲醇等。

⑶非离子多聚体沉淀剂沉淀分离法：采用非离子型的多聚体作为目标成分的

沉淀剂，适用于生物大分子的沉淀分离，如酶、核酸、蛋白质、病毒、细菌等。典型的非离子型多聚体是聚乙二醇（PEG），根据其相对分子量的大小，有PEG600、PEG4000、PEG20000等型号。

⑷等电点沉淀法：主要是利用两性电解质在等电点状态下的溶解度最低而沉

淀析出的原理。适用于氨基酸、蛋白质及其它属于两性电解质组分的沉淀分离，如大豆蛋白“碱提酸沉”的提取方法。

⑸共沉淀分离法：又可称为生物盐复合物沉淀法，用于多种化合物特别是一

些小分子物质的沉淀。它是利用沉淀的同时对其它待分离成份吸附共沉淀而达到除杂的目的。

⑹变性沉淀分离法：又称为选择性变性沉淀法，是利用特定条件使目标成分

变性，导致其性质的改变如溶解度下降而得以分离。适用于一些变性条件下差异较大的蛋白质和酶类的分离纯化。采取的变性条件有pH值、温度的改变以及添加剂、利用酶的作用等，腐竹的生产是利用大豆蛋白的热变性而进行分离的一个例子。

二、沉析的特点

操作简单、经济、浓缩倍数高，但针对复杂体系而言，分离度不高、选择性不强。

三、沉析操作的一般过程

1、在经过滤或离心后的样品中加入沉析剂；