丙酮浓缩蛋白溶液步骤2

丙酮浓缩蛋白溶液步骤

操作步骤：

1）加1mL冷丙酮（-20℃）至200μL样品溶液，混匀。

2）-20℃放置2 h。

3）-4℃离心15 min。

4）弃去上清液，用丙酮清洗沉淀2-3次。

5）使沉淀风干，于1-2倍沉淀体积的缓冲液中再悬浮沉淀。

步骤2;

1，cold acetone（-20℃）

2，1体积样品+4体积冷丙酮；混匀，-20℃过夜

3，12000g离心 10分钟

4，小心吸去上清

5，放在桌上风干，大约20来分钟（自己看着半，剩余的丙酮量不一样，各地方条件也不一样）

6，加1乘的sds sample buffer（量自己根据实验目的定），仔细洗离心管远离转轴侧面的管壁（特别对于微量蛋白）。votex，煮，冷，上样sds-page。

我的步骤：

Protocol：

1.将蛋白样品沸水煮3min，混匀后离心，取250μL，加入-20℃预冷的丙酮1mL，-20℃冰箱静置3h。

2.-4℃离心（12000r/min）20min，弃上清（直接倒掉）。

3.200μL丙酮洗涤沉淀2次。

4.室温静置风干25min。

5.加入裂解buffer 20μL，votex，室温静置2min，加入5μL loading buffer，沸水煮3min。

6.12000r/min离心1min，上样，电泳，考染。