Rh(D)血型鉴定(试管法)操作程序

Rh （D)血型鉴定（试管法）操作程序

1、目的

建立Rh(D)血型操作规程，确保血型鉴定准确性和规范性。

2、适用范围

适用于试管法进行Rh(D)血型鉴定试验操作程序

3、试剂

3.1厂家： 上海血液生物医药有限公司

3.2产品有限期：24个月

3.3试剂规格： 10ml 支

3.4试剂稳定性：试剂未开启：2-8℃避光保存，稳定至包装盒上的效期。

3.5试剂开启后请注明日期并签名，效期按厂家说明书要求。

4、质控操作

按照《输血相容性检测室内质控操作程序》执行，质控通过后填写《血库IQC 检测反应记单》

5、检测原理

目前发现的人类红细胞上Rh 抗原有C 、c 、D 、E 、e5种，Rh 血型形成的天然性抗体极少，主要是免疫性抗体，已知有抗D 、抗E 、抗e 、抗C 、抗c 抗体等五种。抗D 抗体是Rh 血型系统中最常见的抗体。Rh 抗体有完全抗体和不完全抗体两种完全抗体在机体受到抗原刺激初期出现，一般属IgM 型，机体再次受抗原的刺激则产生不完全抗体，如果五种不完全抗体血清(抗D 、抗E 、抗e 、抗C 、抗c)做鉴定，可将Rh 血型系统分为18个型别，在临床上因D 抗原的抗原性最强，

专业领域：血库 文件编号： Rh （D)血型鉴定（试管法） 操作规程 版本及修订后：

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出现的频率高，临床意义较大，故一般只做D抗原的血型鉴定，如仅用抗D血清进行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。

6、标本处理

6.1核对信息，将检查申请单信息与样本条码信息进行核对，信息一致方可进行下述操作。

6.2标本收集

EDTA-K2抗凝血2ml

6.2.2标本出现溶血、乳糜血，为不合格样品，不能用于检测。

6.3标本制备

6.3.1EDTA抗凝血2ml,离心1000g/3min,分理出血球与血浆待用。

6.3.2制备5％红细胞悬液，取50ml血球+1000ul0.9％生理盐水。

7、操作步骤

7.1取洁净试管一支，表明抗D用滴管滴加Rh(D)IgMh试剂50ul,并向管中滴加待检着5％红细胞悬液50ul,混匀：

7.2摇匀后用血库专用离心机500g,离心60秒，观察结果：

7.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如果肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜观察结果。

7.4结果判读

反应强度凝集

4+ 强反应，单一凝集块，无游离红细胞

3+ 强反应，几个大的凝集块

2+ 很多小的凝集块中混有大的凝集块，无游离红细胞

1+ 在游离红细胞背景下有很多小的凝集块

+/- 肉眼可观察游离红细胞下小的凝集块，光镜下课观察到很多小的红细胞凝集块

- 镜下未见凝集块，红细胞均匀分布

7.5判断结果应仔细核对后填写《手工、半自动血型血清学原始记录》，避免电子报告与原始记录不符。

8、注意事项

8.1试管、滴管、玻片应清洁干燥，防止溶血。

8.2操作方法应按规定，一般先加血清，然后加红细胞悬液，一便容易核实是否漏加血清

8.3有些红细胞，如自身免疫溶血病人和新生儿溶血病患儿的红细胞常被免疫球蛋白致敏，利用本操作规程的方法检测较为困难，容易造成假阳性结果。应根据病人临床诊断和其他实验室试验确定病情后，利用放散试验进行定型。

8.4为保证试验准确性，检测前的红细胞可用生理盐水洗1~3次去除吸附在红细胞表面的血型物质（以溶解的红细胞基质、可溶性抑制物、血浆蛋白及抗凝剂等成分）若连续两次洗涤后上清液仍不完全清澈，这种红细胞不宜使用

8.5检测后标本置于2-6℃标本专用冰箱中保存至少7天。

8.6注意缗钱样凝集与凝集的区别。

8.7若患者确定为Rh(D)血凝阴性，及时通知其主管医生，根据其主管医生医嘱，及时联系血站为其进行备血。

9、记录

9.1血库IQC检测反应记录 -XK-BD01-A/0

9.2手工、半自动血型血清学原始记录 -XK-BD08-A/0

10、参考资料

10.1厂家试剂说明书