第二章生物安全防护

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在生物安全柜内安全操作
保养:
2次/天 --擦拭工作台面 1次/周 –擦拭紫外灯 1次/月 –擦拭所有的垂直面 1次/年 – 紫外灯强度验证 -- 用甲醛气体去除沾染 (ORM) -- 认证 (ORM)
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行政管理控制
根据程序、信息和方法将暴露危险降至最低
危险评估 医学监测 培训/教育 资源 检查 符号 & 标志
可能获得实验室感染 (LAI) 环境污染 造成研究的污染 公众知晓
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实验室感染
感染源 培养物和储存物 研究的动物 标本 易感宿主 免疫系统 免疫状况 年龄
传播途径
经皮接种 吸入气溶胶 粘膜接触 食入
7
实验室感染
只有20% 可查到原因
80% 是由人为的错误造成的 20% 是由于设备故障造成的
排在前4位的导致感染的事故
考虑弹性和手掌的长度
双层手套
危险处理办公室对那些具有过敏的人提供帮助，找 到替换材质的手套。
在公共场所不要带实验手套
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个体防护设备
眼和脸防护 护目镜、安全眼镜可以保护眼睛
面罩可以保护面部皮肤
呼吸罩
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溢出
溢出反应不同主要基于：
• • • • 溢出的是什么？ 溢出多少？ 在哪里溢出的? 对环境潜在的风险是什么？
者作出这方面的判断
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组织培养
一般可能含有致病微生物的潜在风险
人和灵长类的含有支原体的细胞系 Level 2
其他
Level 1
当使用新的细胞系时要进行详细的评估
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动物工作
动物可储存感染性的微生物（自然的或引进的）
等级基于所从事工作的类型
对所有从事动物工作的人员都需要进行专门的动
物照料培训
所有的工作包括动物的使用必须得到动物委员会 的许可
性情况庫賈氏病, 新型克雅氏病, 疯牛病,绵羊瘙痒 病，慢性消耗性疾病。 对通常的灭活病毒的破坏方法产生抗性 与危害处理办公室接触以评估其需求（防护、程 序、废弃物的处理）
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重组DNA
遗传工程 = 在体外将遗传物质从一个细胞参入到另一个细胞 危险级别依赖于DNA的来源
、载体及宿主
生物安全委员会将帮助研究
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一般实验室安全指导方针
基本的常识,你必须了解你所面对的实验室的危险， 并且经过正确的培训以便处理这些危险。 最基本的是知道所有的实验危险 举出5个例子?
使用移液管和移液器 使用接种环 分离血清 打开安瓶 使用离心机
b i o s a f e t y
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良好的微生物实践 (GMP)
基本的使用标准适用于所有的微生物学实验工作 目的 预防实验室人员和环境被污染 预防实验或样本被污染 无菌操作、减少气溶胶产生、控制污染、个人防 护、应急反应。
High
Low
Level 3
炭疽杆菌，结核分支杆菌，汉坦 病毒，HIV，黄热病度
May cause serious disease
4
High
High
Level 4
Likely to cause very serious disease
拉沙病毒, 埃博拉病毒, 马尔堡病毒
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不常见的病原体
传播性的海绵体脑病阮病毒疾病；致死性神经变
个体防护设备
鞋袜 应该穿包裹脚趾的鞋，在一些较高级防护的实验 室和动物设施部门穿靴子。 实验室外衣 长袖达膝的外衣 有弹性的袖口 后背系带的长大衣 定期清洗
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个体防护设备
手套 对于从事生物病原的人使用乳胶、腈、乙烯树脂材 料的手套 测验的手套不应再用，实用的手套能消毒再用，如 果它们没有变形的征兆。
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个体防护设备
个体防护设备是非常重要的防护屏障，也是最后一道防护线 监督者和使用者的职责就是确保使用个体防护设备
护目镜 手套
实验室外衣
鞋
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个体防护设备
考虑的标准
阻断暴露的途径 提供保护的级别 容易使用
只有当正确的选择、适合、小心使用和个体培训 才能产生效果 确保离开实验室前脱下个体防护设备
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溢出或溅出 注射器及针 尖锐的物体，碎玻璃 动物或体外寄生虫的抓伤或咬伤
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实验室感染
谁
研究者
什么
SARS 台湾
哪里
美国 美国
欧洲
何时
2003年12月
如何
划伤 气溶胶?
接触
微生物学家 实验室工作人员
实验室工作人员
西尼罗病毒 流脑
牛痘病毒
2002年8月 2000年
2002年
9
实验室感染
1979－1999年间实验室相关感染（LAI）的统计
一道 vs二道 防护水平
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第一道防护（一级屏障）
确保工作人员和直接环境免受感染性微生物的暴露 ‘保护性的外壳’ 封闭感染性的微生物或动物 培养皿, 玻璃罐, 瓶塞等 生物安全柜，手套箱和动物笼等装备
控制的效果取决于防护的完整性
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第二道防护（二级屏障）
保护实验室外的环境 免遭暴露
包括实验室设计和规
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安全使用离心机
使用前
裂纹？ 过满？ 平衡？ 盖子或塞子安臵正确？ 转速能达到？
使用可封闭的转子 使用后
离心完全停止？ 溢出或渗漏？ 使气溶胶沉降（30分钟）or 在生物安全柜内打开
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注射剂及针
尽可能避免使用 在生物安全柜内完成感染性材料的操作 使用注射器时小心抽吸 保护从塞子退出的针 不要弄弯、切断或翻新针 处理所有使用过的针和注射器，将其放 入黄色的尖锐物体盛放器内
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32
生物安全柜
对生物病原物理防护的有效方法， 尤其当产生气溶胶时。 高效分子空气过滤器能以99.97% 的效率去除颗粒（最小 0.3微米） 有三个主要级别的安全柜（ I, II, III ） 能提供不同水平的保护。
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在生物安全柜内安全操作
使用前:
确保生物安全柜经过检验 关闭紫外灯，打开荧光灯 用适宜的消毒剂消毒工作 台面 将最基本的条目放入安全 柜 在工作之前，让排风机运 转 5-10 分钟
1 2
3
Low
Low
Level 1
大肠杆菌 细杆菌
Unlikely to cause disease in healthy workers or animals
Moderate
Limited
Level 2
大肠杆菌 0157:H7, 链球菌、沙门
氏菌、腺病毒、肝炎病毒A、B、 C，流感，麻疹。
Rarely cause serious human or animal disease
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行政管理控制
风险评估
确定防护的种类,方法和所需的安全设备 使用者的职责, 能从ORM得到的帮助 考虑的方面有:实验设计,方法,个人的经验和知识 情况等
*
http://www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl/lbg-ldmbl/pdf/lbg-3e-draft.pdf
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移液管
禁用嘴吸移液管 所有的生物危害材料的移液管都应在生物 安全柜内使用。 不要使液体溢出，使用移液管装臵。 避免飞溅，沿管壁将液体慢慢注入试管或 瓶内 不要用抽-吸混匀溶液。 可再度使用的移液管应水平放臵在已消毒 的浅盘上
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混匀器、研磨器、超声破碎器和冷冻干燥器
尽可能地在BSC内操作，再打开前静臵5分钟以使 气溶胶沉降。 安全地混匀
溢出物应该被立即清理（除非产生了气溶胶），确 保正确的去除污染方法 确保恰当的使用个体防护设备，清除设备容易使用
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溢出
一般清理
用吸收性物质盖住溢出区域 用恰当的消毒剂（10%漂白剂）浸泡溢出区
达到此目的主要通过：
工程学控制
行政管理控制 操作与规程 个体防护设备
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什么是生物危害?
是由生物或者此种生物产生的物质引起的对人、 动物或环境具有潜在威胁 例如： 病毒、细菌、真菌和寄生虫以及他们的毒素 血液和体液, 还有人和动物的组织 变异的细胞系和一些特定类型的核酸
5
为什么我们关注生物危害物质？
常见病原体 非传统的病原体 重组 DNA
组织培养
动物工作
解剖的标本
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_
生物危害的等级
水平按箭头方向由低到高
微生物对人、动物、植物和/或环境的危险性
BSL 4
BSL 3
程序和设备需求
BSL 2
围堵策略水平需求
对人员、环境和社区的保护程度
BSL 1
15
_
常见病原体的等级
危险 分组 个体危险 公众危险 遏制 例子
章制度
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生物安全防护水平
防护水平与危险水平相似 生物安全委员会将对研究提案进行评估以确保防 护水平恰当。
一级 二级 三级 四级
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一级水平
最基本的实验室
不需要特别的设计特性
不需要生物安全柜可在开
放的实验台上进行工作
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二级水平
具有生物危害2级的临床、 诊断、研究和教学部门
如果具有气溶胶或溅出的 潜在风险，需要一级或二 级生物安全柜
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洗手
预防感染的单纯有效 的方法之一 如果经常正确的执行 何时洗手？
Level 1 lab - a non antiseptic soap can be used Level 2 lab requires antiseptic hand washing solutions
开始任何操作之前 离开实验室之前 当手有明显的污物时 在安全柜内完成任何实验之前和之后 每次脱掉手套时 在触及脸和嘴之前 下班时
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行政管理控制
医学监测
用医学方法监测环境污染对人类健康的影响， 观察人群健康水平和人体对环境污染的生物学效 应。
培训 & 教育
实验室专门的政策和规程 生物安全培训
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行政管理控制
检查
日常的自查 生物安全检查清单 此外, 检查实验室以确保其按照规程或 指导方针 工作并提供反馈意见
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行政管理控制
必须制定处理溢出的应急 方案
使用权应加以控制
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三级水平
专门的设计和建造
一级屏障保护个体 二级屏障保护环境
所有工作人员必须进 行专门的培训：病原 微生物的使用，个人 防护设备，设备、废 弃物处理，还有实践 与操作
安全柜： Ⅲ型(全密封型)
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四级水平
在一个国家一般只有一个 设计规范异常的严格，工作人员完全与感染性材 料隔离
预防血传病原体传播的最简单的行之有效的方法 包括: 教育 洗手 穿防护设备 使用安全的工作规程
如果不能保证样品的非感染性，按照感染性样品处理 If samples cannot be guaranteed non-infective …… treat as infectious! 13
生物危害的分类
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暴露的风险
有关的病原体 体液的类型 暴露的途径 暴露的持续时间暴露过程中的血液量 此次暴露病毒的浓度 个人保护设备使用
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如果发生了暴露或可能发生了暴露
开始急救 通知你的管理者或指定的人 向医院的急诊部门或大学的卫生服务部门 报告 向职业卫生、伤残和死亡办公室报告（电 话或网络）
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全面预防
生 物 安 全 概 要
姚振江 流行病与卫生统计学系 广东药学院
1
以前的实验室...
现在的实验室对个人防护有了新的要求...
2
பைடு நூலகம்
生物安全概要
简介 实验室内感染 生物危害分类 感染/生物危害控制 溢出响应 生物医学废弃物处理 总结
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什么是生物安全?
从业人员处理生物危害材料时的措施，以 避免感染自己、他人或环境
标记 & 标签
生物危害标记必须粘贴在使用生物 危害材料的实验室的门上 生物危害标签应贴在使用生物病原 的容器、设备和储存装臵上
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实践和规程
总的安全指导方针 好的微生物学实践 洗手 专门的规程
离心机 注射器、针头和其他的尖锐物 移液管 混匀器、研磨器、超声破碎仪、冷冻真空干燥 器 接种环 冷冻切片机
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解剖的标本
所有的 标本都应考虑其可能存在的 感染性微生物
考虑标本的类型尤为重要
血液, 器官, 组织
脊髓, 脑组织 来自于感染的病人
一般而言，生物2级仅仅依据于其工 作的特性
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感染/生物危害控制
工程控制 管理控制 实践与操作 个人防护设备
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工程控制
在技术层面上, 通过改变危害的来源以减少 或根 除危害的暴露 防护:
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在生物安全柜内安全操作
使用中:
确保材料和器材放臵在接近安全柜内的后部，尤其是 产生气溶胶的设备，不要阻挡通风口。 使用技术减少飞溅和气溶胶的产生。 总的工作流程应该是从清洁区域到污染区域。 减少运动以免阻碍气流 在生物安全柜内打开火焰存在着争议。
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在生物安全柜内安全操作
使用后:
保持排风机工作至少5分钟以清 洁安全柜 移走和消毒用过的器材和材料 消毒安全柜台面 关闭排风机和荧光灯，打开紫外 灯。
• 不要用玻璃混匀罐 • 使用后立即清除污染
冷冻真空干燥器
• 使用玻璃制造的真空部件时，确保使用前无损坏。 • 使用后所有的表面都要消毒 • 尽可能使用真空蒸发套
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接种环
在开放的火焰上灭菌可能产生含有活微生物的气 溶胶 柄越短，越能减少震动 一次性的塑料接种环是较好的替代
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冷冻干燥器
在准备冰冻切片时戴手套，当 使用冷冻干燥器时戴厚手套。 经常性的去污 (70%乙醇or 专 门的消毒剂) 防备和上锁!