蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究

取 新 鲜 蛋 黄 稀 释 液 （ 度 为 ０１ ・ １ 浓 ．ｇ ｍＬ ） ．ｍＬ ０ 于 １ ０ ｍＬ离 心管 中 ，加 入 ９ ％乙 醇 １ ，用 漩 涡 ５ ．ｍＬ ０ 振 荡器 混匀 后 ，加 入 乙醚 ２５ｍ ． Ｌ，再 次 混匀 后加 入 石 油 醚 ２５ｍ ，震 荡 混 匀 ，３００ｒｍ离 心 ５ｍｉ， ． Ｌ ０ ｐ ｎ
１ 材料 与 方法 １１ 试验 材料 ．
样 品前 处 理 方 法 同 １ ．，根 据 试 剂 盒 说 明将 ．Ｉ ２
样 品与工作 液混合 ，３ ７℃保 温 ５ｒｎ ，在波 长 ｉ后 ｎ ５ ０ｎ ０ ｍ处 比色 测 定 吸 光 度值 ，并 根 据样 品 管 和 校
准 管 的吸光 度值 及校 准 品浓度 计算 胆 固醇含 量 ，计
１２３ 试 剂 盒 法 ．．
反应来分析的传统方法 ，色谱法是适用范 围较广 、 灵敏 度较 高 的分析 方 法 ，而高 效液相 色谱 不需 要 载 气 ，在使用上较气相色谱和液相色谱一 质谱联用的方 法简 便 １ 试验 对液 相色谱 法 、皂化 一 。本 比色法 和 试剂 盒法 测 定蛋 黄胆 固醇 的过 程 和结果 进行 研究 和 比较 ，为鸡 蛋胆 固醇含量测 定工作提供 方法指导 。
入 冰 乙酸 １ 溶 解 残余 物 ，再 加 入显 色 液 ３ｍＬ于 ｍＬ ６ ０℃ 水 浴 １ ｉ，在 ４０ｎ 用 ７２ 光 光 度 计 ５ｍｎ ９ ｍ下 ２分 进 行 比色分 析 ，同法 做空 白样 。将胆 固醇标准 品 用 甲醇 溶解 配 成 １ ・ Ｌ 液 ，取 不 同体 积 胆 固醇 ｍ－ ｍｇ 溶 标 准 品溶 液 与样 品做 同样处 理 ，以胆 固醇 浓度 为横 坐 标 ，吸光 度值 为纵 坐标制 作 工作 曲线 。根据 样 品 的吸光 度值 计算样 品 中胆 固醇 含量 。
移 出上层萃取液 ，在低 于４ ５℃下用氮气吹干 ，加 无水 乙醇溶解残余物 ２０ｍＬ ． ，用 ０４ ｍ有机微孔 ． ５ 滤 膜 过 滤 后 进 样 。 色 谱 条 件 为 色谱 柱 ：Ｚ Ｒ Ａ Ｏ ＢＸ Ｅ ｌ ｓ Ｄ — ８ ． ｃｉ ｅＸ Ｂ Ｃ１，４６ｍｍ￣１０ｍｍ，５ ｍ；流 动 ｐ ５
Ｌ ，按 照上述 ３ 种方 法进 行处 理并 分析 ，根 据结 果
计算加标回收率 。计算公式见式（ ） ２。
回收率 ＝旦 ￣ ０ ％ 二 １０
品 中胆 固醇 的量 ，Ｃ 为加标 量 。
１３ 数 据 处 理 －
（） ２
其 中 ，ａ 测得 加 标 样 中胆 固醇 的量 ，ｂ 样 为 为
Ｓ ０ ｇ 于 ｌ 蒸馏水 中，再加入 １０ｍ Ｏ １０ｍ 溶 ｍＬ ０ Ｌ冰乙
酸 混 合 溶 解 ，然 后 与 １０ｍ ０ Ｌ浓 硫 酸 缓慢 混 匀 ，冷
却 后使用 。
１２ 试 验 方 法 ．
１２ １ ＨＰ Ｃ法 ．． Ｌ
量 取 ０１ ・ Ｌ 新 鲜 蛋黄 稀 释 液 ０５ｍＬ 新 鲜 ．ｇ ｍ ． 或 蛋 黄 ５ ，加 入 １ｍ ・ 的 胆 固 醇 标 准 液 ７ ０ ０ｍｇ ｇ ｍＬ ５
积 值 为纵 坐标 制作标 准 曲线 。采 用外标 法 定量 分析
样 品中胆 固醇 含量 。
１２２ 皂 化 一比 色 法 ．．
样 品的高效 液相 色谱 图见 附 图。 由附图可知 ，胆 固醇 的保 留时 间为 １ ． ２ｒｉ。 ４６ ｎ ６ａ
２２ 测 定 结 果 比 较 ．
３ 方法 测定 结果 见 附表 。 种
鸡蛋 的营养成分进行分析 ，从而评定其营养价值 ， 这些 都 需要 有准 确 的分 析 鸡 蛋 胆 固醇 含 量 的方 法 。 胆固醇主要存在于蛋黄中，因此 ， 测定鸡蛋中胆 固 醇含量 多 以蛋 黄为 样本 进行 测定 。胆 固醇含量 的分
析 方 法 有 酶 法 、 比色 法 、液 相 色谱 法 、气 相 色谱 法 、液 相 色谱 一 谱 联用 法 等 ，试 剂 盒 法是 基 于 酶 质 法测 定胆 固醇 的原 理 进行 的 ，比色 法一 种依 据显 色
相 ：乙腈 一 丙醇 （ ：，Ｖ Ｖ） 异 ４ １ ／ ；流速 ：０８ｍＬ ｍ ｎ ； ． ・ ｉ～
采 用 Ｅ ｃｌ ０ ７ Ｓ Ｓ ６ ｘｅ ２０ 和 Ｐ Ｓ１． 计 软 件 进 行 数 ０统 据 处 理和分 析 ，结果 以“ 均 值± 平 标准误 ” 表示 。
２ 试验 结果 ２１ ＨＰ Ｃ法测 定蛋黄胆 固醇含 量 ． ． ． Ｌ ．
置于 ８ ０℃水 浴 恒 温 振 荡器 中皂 化 １ ｎ ０ｍｉ，取 出冷 却 至室 温 ，加 入 正 己烷 １ ，漩 涡 震荡 混 匀 ，静 ０ｍＬ 置 ，将 匕 层液体移人 １ 离心管中，３００ｒｍ离 心 ０ｍＬ ０ ｐ
１ ｎ ０ｍｉ ，取 出上 清 液 ６ ０℃下用 氮 气 吹 干 。 然 后加
柱 温 ：３ ５℃；检测 波长 ：２０ｎ １ ｍ；进样 量 ：ｌ Ｌ ０ 。
取胆固醇标准品用色谱级无水 乙醇溶解配成浓度 为 １ｍｇ ｍ 的标 准 液， 取 标 准 液 稀 释 ：以胆 固醇 浓度 为横 坐标 ，峰面 ０ ）
算 式 见式 （ ） １。 胆 固醇 含量 ＝ × 准 品浓度 校
（） １
１２４ 加 标 回 收 率 的 测 定 ．．
蛋 黄 由市售 新 鲜 鸡 蛋 中取 出 ；胆 固醇 标 准 品 ，
纯 度 ≥９ ．％（ 中国计 量 科 学研 究 院 提供 ） ９７ 由 ；总胆
固醇试 剂盒 （ 酶法 ） 由北京 北化 康 泰临 床试 剂有 限公 司 提 供 ；显 色 液 为 Ｆ Ｓ 冰 乙 酸一 硫 酸 ，将 Ｆ — ｅＯ一 浓 ｅ