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生姜提取物各剂量组OD值及抑制率
浓度
水提组 醇提组 水提组 醇提组
g/ml( 姜粉 ) OD值
OD值 抑制率 抑制率
0.00316
0.2814 0.3020 0.25%
0
0.01
0.2773 0.2755 1.72% 2.35%
0.0316
0.2741 0.2750 2.84% 2.53%
0.1
0.2704 0.2663 4.16% 5.63%
0.0316 0.1
0.316 1
0.2814 0.2773 0.2741 0.2704 0.1151 0.0410
0.3020 0.25%
0
0.2755 1.72% 2.35%
0.2750 2.84% 2.53%
0.2663 4.16% 5.63%
0.2009 59.20% 28.80%
0.0167 85.47% 94.09%
细胞毒性以及 抗肿瘤试验
MTT法
试 验 方 法
急性毒性试验
急性毒性试验选取健康小鼠60只,每 组10只,为雄性空白对照组、雄性水 提组、雄性醇提组、雌性空白对照组、 雌性生姜水提组和雌性生姜醇提组。
采用小鼠经口灌胃,按体重给药,0.2 ml/10g,灌胃两次。
基于MTT法的细胞试验
细胞毒性试验
生姜水提物1 WEG1 0.1g/ml 0.031 0.003 68.462
生姜水提物2 WEG2 0.01g/ml 0.083 0.013 14.744
生姜醇提物1 EEG1 0.1g/ml 0.027 0.009 72.308
生姜醇提物2 EEG2 0.01g/ml 0.037 0.014 61.923
弃上清,每孔加入150μl的DMSO,震荡, 溶解甲儹颗粒,于酶标仪上读取490nm处的吸光度值
试 验 结 果
灌胃后性别对小鼠长势的影响
12 10
8 体重差值 6
4 2 0
MBC 6.18
FBC 6.81
空白对照组(BCG)
MC 10.59
*
FC 8.85
*
性别(SEX)
在急性毒性试验中,灌胃一周后,小鼠无中毒和死亡现象, 通过分析灌胃一周后体重增长的数值,我们可以看到:空白 组之间差异不显著,雄性组与雌性组间的差异也不显著(P >0.01),但是与对应的空白组之间的差异显著。
在细胞毒性试验中以10为底0.5的对数为组距,两种提 取物均设置六个剂量组,作用于人正常肝细胞系。
加入生理盐水的阴性对照组细胞的状态
加入生理盐水的阴性 对照组的细胞生长状 态良好,结构清晰, 边缘整齐,细胞外围 有光晕,折光性好
不同剂量的生姜水提物作用后细胞的生长状态
不同剂量的生姜醇提物作用后细胞的生长状态
灌胃后提取方法对小鼠长势的影响
12
10
8 体重差值 6
6.495
4
2
0 空白对照组(BCG)
11.25 *
水提组(WEG)
8.10 *#
醇提组(EEG)
生姜水提物和生姜醇提物各剂量组OD值及抑制率
浓度
水提物
g/ml( 姜粉 ) OD值
醇提物 水提物 醇提物 OD值 抑制率 抑制率
0.00316 0.01
0.316
0.1151 0.2009 59.20% 28.80%
1
0.0410 0.0167 85.47% 94.09%
低浓度组的细胞状态与阴性对照组相似,毒性很小, 低于0.1g/ml的抑制率小于5.63%
抗肿瘤试验浓度设置及实验结果
浓度
BEL SMMC
BEL
受试物名称 代码 以姜粉计 OD均值 OD均值 抑制率
78.134
生姜醇提物2 0.01g/ml
不同生姜提取物的
背景介绍
生姜提取物的制备
内
试验中的关键技术
容
试验方法
试验结果及结论
生姜水提物和生姜醇提物浓度
急性毒性试验
1.66g/ml (姜粉)
细胞相关试验
1g/ml (姜粉)
试验中的关键技术
动物实验的灌胃技术 细胞培养技术
细 胞 复 苏
细 胞 冻 存
试验原理
急性毒性试验 GB15193-03 《食品安全性 毒理学评价程 序和方法》进 行最大耐受量 试验
0.100 0.090
##
0.080
0.070
0.060
**
Βιβλιοθήκη Baidu
OD值 0.050
** #
0.040
** ## ** #
0.030
0.020
0.010
0.000 WEG1EEG1 WEG2EEG2
CTX
BEL
*表示与BEL比较P<0.05, **表示与BEL比较P<0.01; #表示与BEL比较P<0.05, ##表示与CXT比较P<0.01
环磷酰胺 CTX 0.01g/l 0.050 0.026 48.846
纯肿瘤细胞 —
—
0.098 0.043
—
SMMC 抑制率 92.711 69.679 78.134 66.764 39.359
—
OD值越高说明肿瘤细胞活性越强,OD值越低说明肿瘤 细胞被杀死的越多,该组别抑制肿瘤效果越明显。
不同浓度生姜提取物对BEL-7404抑制作用
HL-7702人正常 肝细胞系
抗肿瘤试验
BEL-7404人肝癌细胞系 SMMC-7721人肝癌细胞系
MTT法操作步骤
用胰蛋白酶消化,制成细胞悬液,然后以 每孔100微升接种于96孔板,CO2培养箱内孵育24小时
接种
染毒
每孔加入40微升的受试物,作用24h后
加
M
T T
再加入10微升的MTT,4h
显色
对于BEL-7404 肿瘤细胞系, 有水提一组, 醇提一组,和 醇提二组三个 实验组的抑制 效果好与环磷
酰胺组。
不同浓度生姜提取物对SMMC-7721抑制作用
0.045
0.040
0.035
0.030
**
OD值
0.025 0.020
0.015
** ##
** ## ** ##
0.010 0.005
** ##
0.000 WEG1EEG1 WEG2EEG2
CTX
SMMC
*表示与SMMC比较P<0.05, **表示与SMMC比较P<0.01; #表示与SMMC比较P<0.05, ##表示与CXT比较P<0.01
生姜提取物 对SMMC的抑 制效果比BEL 还要略好一 些,有四个 实验组的抑 制效果好于
环磷酰胺
提取物对人正常细胞和肿瘤细胞抑制率的比较
受试物
浓度
人正常肝细胞 HL-7702(%)
人肝癌细胞
BEL-7404 SMMC-7721
(%)
(%)
生姜水提物1
0.1g/ml
4.16
68.462
92.711
生姜水提物2 0.01g/ml
1.72
14.744
69.679
生姜醇提物1
0.1g/ml
5.63
72.308