实验三、血清总胆固醇的测定

过氧化物酶
（POD）
H2O ＋红色醌类物质
510nm
相对血清总胆固醇浓度 光吸收法测定
三、实验器材
材料：人血清 试剂：总胆固醇测定试剂盒
用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂
试剂空 标准 样品管 样品管 样品管
白管 管
1
2
3
工作试剂(mL) 1.0 1.0 1.0
1.0
1.0
标准液(uL)
– 10.0 –
–
–Fra Baidu bibliotek
血清样品(uL) –
– 10.0 10.0 10.0
充分混匀，37℃ 水浴中保温15min；
冷却至室温后，510nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
（2）计算：
依据朗伯-比尔定律： A=KLC
标准管胆固醇浓度：5.17mmol/L
C样=
A样 A标
× C标
样品管光密度值
样品管胆固醇浓度 ＝
×5.17
(mmol/L)
标准管光密度值
参考值
胆固醇 血清参考值：3.0 ~ 5.20mmol/L 危险阈值：5.20 ~ 6.20mmol/L 高胆固醇血症：> 6.20mmol/L
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
测定胆固醇所用的试剂应防止被葡萄糖和甘 油三酯污染。
微量移液枪的正确使用
思考题
1、简述胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 的基本原理？
2、分析影响实验结果的因素有哪些？如何 克服？
实验三
血清中总胆固醇 的测定
（胆固醇氧化酶法）
一、实验目的
学习胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。 掌握血清总胆固醇的测定方法及操作技术。
二、实验原理
游离胆固醇 血清总胆固醇
（1） 胆固醇酯 胆固醇酯酶 游离胆固醇＋FAA
（2）游离胆固醇 胆固醇氧化酶 胆甾烯酮+H2O2
（3）H2O2+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚