石蜡切片具体过程及操作步骤精心整理

合集下载

石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题,写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术,在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。

石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析,能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。

下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定:首先,需要从感兴趣的样本中取得组织样本,并将其进行固定。

固定是为了保持组织的形态结构和化学成分,常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

固定过程中,需要确保样本完全浸泡在固定液中,通常需要数小时至数天的时间,以确保组织被充分固定。

2. 脱水:固定后的组织样本需要进行脱水处理,以去除其中的水分。

脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂,常用的有乙醇、丙酮等。

通常采用递增浓度的有机溶剂,从低浓度逐渐提高到高浓度。

每个浓度的脱水液中,样本需要浸泡一定的时间,以确保脱水彻底。

3. 渗透:脱水后的组织样本需要进行渗透处理,以使其与石蜡更好地结合。

渗透剂通常为石蜡溶液,可以将样本浸泡在石蜡溶液中,以使其逐渐渗透进入组织内部。

渗透过程中,需要注意控制温度和时间,以确保渗透均匀。

4. 包埋:渗透后的组织样本需要进行包埋处理,即将其嵌入到石蜡中。

首先,将组织样本放置在石蜡模具中,并加入适量的石蜡。

然后,将模具放入石蜡包埋机中,利用加热和真空等处理,使石蜡与组织样本充分结合。

包埋过程中需要严格控制温度和时间,以确保石蜡固化完全。

5. 切片:包埋后的组织样本需要进行切片处理,以获取薄片供观察。

首先,使用切片机将石蜡块切割成薄片。

然后,将薄片置于载玻片上,并加热使其与载玻片结合。

最后,使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

6. 然后,对切片进行染色处理,以增强对组织结构的观察。

常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。

染色后,可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。

总结起来,石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和时间,以确保制作出高质量的石蜡切片。

石蜡切片的主要步骤

石蜡切片的主要步骤

石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术,广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。

本文将介绍石蜡切片的主要步骤,并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前,首先需要对待切样品进行固定和处理。

固定样品的方法可以根据实验的需要选择,常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。

处理样品的方法也根据实验目的而定,可以包括染色、脱水、透明化等步骤,以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中,以便进行切片。

首先,将样品放入石蜡溶液中,使其充分浸泡。

然后,将石蜡溶液转移到恒温水浴中,使其逐渐固化。

在固化过程中,要确保样品均匀分布在石蜡中,避免出现气泡和空洞。

3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。

首先,将固化的石蜡块从模具中取出,并放置在切片机的夹持装置上。

然后,调整切片机的切片厚度和速度,根据需要选择合适的参数。

接下来,使用切片刀将石蜡块切割成薄片。

在切割过程中,要保持手稳定,避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片切片切割完成后,需要将切片从切片刀上取下。

首先,使用镊子将切片从切片刀上小心取下,避免损坏或弯曲切片。

然后,将切片放置在预先准备好的载玻片上。

在放置切片时,要注意避免气泡的产生,可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色切片取片后,需要将切片上的石蜡去除,并进行染色处理。

首先,将切片放入去石蜡剂中,使其充分浸泡。

然后,将切片转移到浸泡染色剂中,进行染色处理。

在去石蜡和染色过程中,要注意时间控制和温度控制,以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边染色完成后,需要将切片做成封片,以保护切片并便于保存。

首先,将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。

然后,使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。

接下来,将切片的边缘进行封边处理,以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标封片完成后,需要将切片进行干燥处理,并进行贴标。

石蜡切片

石蜡切片

一、石蜡切片方法步骤:
1.锁定手轮;
2.将预先包埋好的石蜡块装在标本夹上;
3.安装切片刀,调节切削角度;
4.将基体上的刀架尽可能靠近标本;
5.调整标本的表面位置,使之与刀刃尽可能平行;
6.转动手轮,开始修片;
7.当修片达到所希望的表面时,停止修片;
8.选择想要的切片厚度(5 m);
9.顺时针匀速转动手轮,切片。

二、调换标本或停止切片
在操作切片刀和标本前,或调换标本和切片刀前,或是在休息时,应锁定手轮,用护刀罩盖住刀片边缘!
1.锁定手轮;
2.用护刀罩遮盖住刀刃;
3.从标本夹上取下标本,取新标本蜡块夹入标本夹。

三、选片
1.轻轻挑起平整、无断裂的单个石蜡切片,平铺于37℃清洁水面;
2.用清洁载玻片,于水面成45°角,在标本附近轻轻插入水面;
3.缓缓向上提起载玻片,使标本平整贴附于载玻片适当位置。

四、切片结束
1.锁定手轮;
2.将切片刀从刀架上取出,把它放入刀盒中;
3.将标本从标本夹上取下;
4.把切片机上所有的残渣、废片清理干净;
5.盖上防尘罩,填写记录本。

免疫组化染色(石蜡切片)操作步骤及结果分析方法(精髓版)

免疫组化染色(石蜡切片)操作步骤及结果分析方法(精髓版)

免疫组化染色(石蜡切片)操作步骤及结果分析方法一、原理及应用免疫组化,简单说是用标记的抗体对组织中相应抗原进行定位、定性和部分定量的分析。

二、操作步骤:(1)将石蜡组织切片置于65°C恒温箱,烤片1h左右。

(2)脱蜡:二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精(由高到低)各5min。

(3)1×PBS 洗涤3次,每次 5min。

(4)0.5% Triton X-100通透(PBS配制),目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。

Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。

当然了,如果检测的是膜抗原无需通透,忽略该步骤。

(4)抗原修复:使用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复,微波炉微波高火 3min,之后转成低火 15-30min。

注:福尔马林或多聚甲醛固定,会导致蛋白交联,而解交联的过程称为抗原修复。

所以冰冻切片不需要抗原修复!!抗原修复方法有多种,一般包括两大类:酶抗原修复(胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K) 热抗原修复(高压蒸汽法、微波法、水浴加热法)。

微波法最为常用。

(5)1×PBS 洗涤3次,每次5min。

(6)3% H2O2,室温孵育30min,目的是灭活内源性过氧化物酶。

(7)1×PBS 洗涤3次,每次5min。

(8)使用1% BSA 进行室温封闭30min,用于封闭非特异性抗原表位。

(9)根据抗体说明书使用合适浓度的特异性一抗,4°C 湿盒中静置过夜孵育。

(10)次日取出切片,室温下复温30min。

(11)1×PBS 洗涤3次,每次5min。

(12)按照免疫组化二抗试剂盒说明书操作。

(13)DAB 显色:DAB 显色液按说明书配制,使用时滴加到血管组织上,显微镜下观察并计时,待目的蛋白显色呈棕黄色时结束显色。

(14)苏木素染细胞核:苏木素染液5-10min(根据苏木素染液使用时间的长短,来调整染色时间)→ 流水清洗1min→ 1%盐酸酒精分化瞬时→ 流水清洗1 min→1%氨水反蓝瞬时→流水清洗1min。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤:
1. 准备样品:选择需要切片的样品,如组织样本、细胞样品等,并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤,以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备:准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料,并进行清洁和消毒处理,以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透:将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂(如正己烷)中,以去除组织内水分和其他溶质,然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备:将石蜡浸透的样品固定于切片盒中,将石蜡块剪碎成适当大小,并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数(如温度、角度、速度等),并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片:将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法,如电离子器、热平台等,以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定:将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理,以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色:根据实验需求,对切片进行适当的染色处理(如组织学染色、免疫组化染色等),以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装:将切片封装至封片盖玻片上,使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片,并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控:对制备好的切片进行质量控制,使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后,制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是,在整个制备过程中,应遵循标准实验操作规程、注意安全,以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片的流程及注意事项

石蜡切片的流程及注意事项

石蜡切片的流程及注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改,请根据实际需要进行相应的调整和使用,谢谢!并且,本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料,如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等,如想了解不同资料格式和写法,敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!石蜡切片流程。

1. 组织固定,使用福尔马林或派氏液将组织固定,确保组织结构和成分得到保存。

石蜡切片的具体步骤与做法

石蜡切片的具体步骤与做法

石蜡切片的具体步骤与做法?石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um以下),能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。

缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。

制片时间太长。

石蜡切片的制作过程(一)材料与用具1.材料:鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。

2.用具:溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。

(二)实验内容与步骤1.取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。

组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻,切忌用力牵引或挟持,以免组织内部发生变化。

组织块取下后,先用先用0.85%的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍,如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净,可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次,使其管腔冲洗干净,切忌不可用刀或其他器具刮之。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的,材料越新鲜越好,一般不应超过死后24小时。

如果是管状器官或是其中有分泌之消化液,则死后应迅速采取,以免组织自溶或上皮剥落。

材料由动物体取下后应当迅速固定,固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部,将组织固定,以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1。

不应使组织块贴于容器壁上,应记录固定液的名称,材料的种类,动物品种及开始固定的时间。

2.冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

组织块应用纱布包好,注名,放金属水洗网中用流水冲洗,甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时,Bouins固定液固定的组织水洗24小时。

AFA固定液则不需要水洗。

3.脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水,脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来,使组织逐渐变硬,便于油类或其他透明及浸入,为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。

石蜡切片流程范文

石蜡切片流程范文

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术,用于制备生物组织薄片,使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定:首先,需要选择适当的方法将生物组织进行固定,以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中,通常需要固定24至48小时。

2.去水:固定完毕后,需要将组织中的水分除去,以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度(例如70%、80%、95%和100%构成的酒精梯度)来逐步去除水分,通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁:去水后,通常需要对样品进行清洁,以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液(例如100%酒精)浸泡样品数分钟,然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍:在石蜡切片制备过程中,需要将组织样品浸泡在石蜡中,以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡(例如58℃石蜡),在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透:将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中,通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75%酒精中,然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中(例如85%、95%和100%)和石蜡中,每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋:当样品完成渗透后,需要进行包埋,即将渗透后的组织样品放置在切片模型中,并用石蜡封住。

将切片模型倒置,将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中,等待石蜡冷却和固化。

7.切片:当石蜡块完全固化后,可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度(通常为3至5微米),将石蜡块放置在切片机上,并逐渐将刀片与石蜡块接触,以制备薄片。

8.制片:将切好的石蜡薄片静置在温水中,让其自然展开,并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上,以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上,以便胶水干燥。

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程石蜡切片是一种常用的组织学技术,用于制备组织切片,以便进行显微镜观察和研究。

以下是石蜡切片的基本操作流程:1. 组织固定:首先,将待切片的组织标本进行固定,以保持组织结构的完整性和稳定性。

常用的固定剂包括福尔马林、酒精和乙醛等。

固定时间的长短取决于组织的大小和类型,一般为数小时至数天。

2. 组织去水化:固定后的组织需要去除固定剂并脱水,以防止切片过程中的破损和变形。

通常采用逐渐增加乙醇浓度的脱水步骤,常见的乙醇浓度为70%、80%、90%和100%。

3. 组织浸渍:脱水后,组织需要进一步浸渍到石蜡中,以增加组织的硬度和支持性。

首先将组织放入浸渍剂中,如甲醛或乙醇中的苯麻油,然后逐渐增加石蜡浓度,常见的石蜡浓度为50%、70%和100%。

4. 组织包埋:在组织浸渍后,将组织放入包埋模具中,然后倒入熔化的石蜡,使其完全包裹住组织。

包埋完成后,将模具放入冷却台或冷冻器中,使石蜡迅速固化。

5. 石蜡切片:将冷却固化的石蜡块从模具中取出,使用切片机将其切割成薄片。

切片机通常配有刀片、切片夹和切片盒等工具,切片时需要注意切片的方向和角度,以获取最佳的切片效果。

6. 切片染色:切片完成后,可以对切片进行染色,以便更好地观察和分析组织结构和细胞形态。

常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫组化染色等。

7. 切片封片:染色后,将切片放置在载玻片上,并使用透明的封片剂将其覆盖。

封片剂可以保护切片,防止切片脱落和变形,并提高显微镜观察的清晰度。

8. 切片观察:最后,将封片的切片放置在显微镜下进行观察和分析。

可以使用不同的显微镜镜头和放大倍数来观察组织细节和细胞结构,同时可以使用图像分析软件对切片图像进行处理和测量。

总体而言,石蜡切片的基本操作流程包括组织固定、去水化、浸渍、包埋、切片、染色、封片和观察等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和操作技巧,以确保获得高质量的组织切片用于研究和诊断。

免疫组化染色(石蜡切片)操作步骤及结果分析方法(精髓版)

免疫组化染色(石蜡切片)操作步骤及结果分析方法(精髓版)

免疫组化染色(石蜡切片)操作步骤及结果分析方法(精髓版)免疫组化染色(石蜡切片)操作步骤及结果分析方法一、原理及应用免疫组化,简单说是用标记的抗体对组织中相应抗原进行定位、定性和部分定量的分析。

二、操作步骤:(1)将石蜡组织切片置于65°C恒温箱,烤片1h左右。

(2)脱蜡:二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精(由高到低)各5min。

(3)1×PBS 洗涤3次,每次 5min。

(4)0.5% Triton X-100通透(PBS配制),目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。

Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。

当然了,如果检测的是膜抗原无需通透,忽略该步骤。

(4)抗原修复:使用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复,微波炉微波高火 3min,之后转成低火 15-30min。

注:福尔马林或多聚甲醛固定,会导致蛋白交联,而解交联的过程称为抗原修复。

所以冰冻切片不需要抗原修复!!抗原修复方法有多种,一般包括两大类:酶抗原修复(胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K) 热抗原修复(高压蒸汽法、微波法、水浴加热法)。

微波法最为常用。

(5)1×PBS 洗涤3次,每次5min。

(6)3% H2O2,室温孵育30min,目的是灭活内源性过氧化物酶。

(7)1×PBS 洗涤3次,每次5min。

(8)使用1% BSA 进行室温封闭30min,用于封闭非特异性抗原表位。

(9)根据抗体说明书使用合适浓度的特异性一抗,4°C 湿盒中静置过夜孵育。

(10)次日取出切片,室温下复温30min。

(11)1×PBS 洗涤3次,每次5min。

(12)按照免疫组化二抗试剂盒说明书操作。

(13)DAB 显色:DAB 显色液按说明书配制,使用时滴加到血管组织上,显微镜下观察并计时,待目的蛋白显色呈棕黄色时结束显色。

山西中学组织学石蜡切片制作过程

山西中学组织学石蜡切片制作过程

山西中学组织学石蜡切片制作过程一、前期准备工作1.2保存组织标本:取得组织标本后,应及时将其放入含有固定剂(如福尔马林)的容器中。

目的是阻止组织中的生物活动,保持组织的完整性,并且避免其腐烂。

1.3固定组织标本:将标本浸泡在福尔马林等固定剂中,时间根据组织的大小和性质而定,一般为24-48小时。

固定后,将固定剂倒掉,并用80%乙醇代替,以除去固定剂残留。

二、石蜡包埋2.1脱水处理:为了去除组织中的水分,使其逐渐转变为可以被石蜡所取代的有机物质,需要使用一系列递增浓度的酒精溶液浸泡标本。

一般步骤为70%酒精浸泡2小时,85%酒精浸泡2小时,95%酒精浸泡1小时,绝对酒精浸泡1小时,每次浸泡30分钟。

2.2渗透处理:将标本放入石蜡浸泡器中,利用负压吸取空气,将石蜡通过负压使其渗透到组织内部。

首先使用浓度为70%的石蜡浸泡1小时,然后逐渐转移到90%、100%的石蜡浸泡器中,每次浸泡时间为30分钟。

2.3包埋处理:取出石蜡浸泡器中的标本,将其放入石蜡中央的切底模具中。

使用石蜡将标本完全覆盖,并且与切底模具紧密贴合。

然后将模具放入冷却器中,待石蜡冷却凝固。

三、切片制作3.1准备切片机:将切片机的刀刃和刀脊擦拭干净,然后固定标本架在切片机上。

调整刀刃角度和切片厚度,一般切片厚度为3-5微米。

3.2开始切片:启动切片机,使刀刃快速向下移动,与固定的石蜡标本接触。

切割完毕后,将得到的石蜡切片放入温水中,使其浮起来。

3.3过片处理:使用刷子将切片从水中捞出,并悬挂在热面层上。

用热力将切片展平,然后放入烘箱中进行烘干。

四、切片染色4.1染料溶液准备:准备需要的染色溶液,常用的染色剂有伊红、苏木精、淡甲酸溶液等。

根据实验需求和组织特性选择合适的染料。

4.2开始染色:将石蜡切片依次放入每种染料溶液中,染色时间根据组织特性和染料浓度来确定。

一般染色时间不宜过长,以免影响染色质量。

4.3染色过程控制:对于希望获得不同颜色的组织结构,可以通过控制染色时间来实现。

石蜡切片流程

石蜡切片流程

石蜡切片流程一、引言石蜡切片是生物学、医学和材料科学等领域中常用的一种实验技术,用于制备样品的薄片,以便进行显微观察和分析。

本文将介绍石蜡切片的流程及其关键步骤。

二、材料准备1. 石蜡:选择适合的石蜡材料,常见的有硬质石蜡和软质石蜡。

2. 样品:根据需要选择合适的样品,可以是生物组织、细胞、材料等。

3. 切片刀:选择切割尖锐且锋利的切片刀,常见的有玻璃刀片和钢刀片。

4. 切片机:使用专业的切片机设备,保证切片的精准度。

三、石蜡切片流程1. 固定样品:将样品进行固定处理,常用的方法有福尔马林固定、乙醛固定、冷冻固定等。

固定的目的是保持样品的形态结构和生物活性。

2. 除去水分:将固定后的样品通过醇溶液逐渐去除水分,一般采用浓度逐渐降低的醇溶液,如75%乙醇、50%乙醇、30%乙醇等。

3. 渗透石蜡:将去水后的样品用石蜡进行渗透处理。

首先将样品置于较低融点的石蜡中,然后逐渐转移到较高融点的石蜡中,这样可以保证样品逐渐与石蜡融合。

4. 包埋:将渗透后的样品放入石蜡模具中,待石蜡凝固后,取出石蜡块。

5. 切片:使用切片机将石蜡块切割成薄片,切片的厚度根据需要进行调整,一般为4-10微米。

6. 切片处理:将切好的薄片浸泡在温水中,使其展平,并将薄片转移到载玻片上。

7. 固定薄片:将载玻片放入烘箱中,以适当的温度和时间使薄片与载玻片充分固定。

四、注意事项1. 操作环境:保持实验室的清洁和安静,避免灰尘和噪音对实验结果的影响。

2. 刀片处理:在使用切片刀前,先将其清洗干净并消毒,以防止样品污染。

3. 温度控制:石蜡切片的各个步骤中,温度的控制非常重要,可以根据不同的样品选择适当的温度。

4. 切片厚度:不同的样品需要不同的切片厚度,要根据实验需要进行调整。

5. 质量控制:在每个步骤结束后,要对样品的质量进行严格检查,确保切片的质量。

6. 保存条件:切好的石蜡切片应妥善保存,防止受潮或受到外界环境的污染。

五、总结石蜡切片是一种常用的实验技术,通过固定、去水、渗透石蜡、切片等步骤,可以制备出精细的样品薄片,用于显微观察和分析。

石蜡切片机操作规程

石蜡切片机操作规程

石蜡切片机操作规程
《石蜡切片机操作规程》
1. 前言
石蜡切片机是用于制备生物切片的仪器,操作规范和安全性非常重要。

为了保证实验的准确性和安全性,特制定以下操作规程。

2. 操作前准备
(1)检查设备是否完整,如刀片是否磨损、石蜡是否充足等;(2)检查切片机是否处于良好的工作状态;
(3)准备待切的生物标本,并进行必要的预处理。

3. 操作步骤
(1)打开石蜡切片机的电源,按要求设置温度和切片厚度;(2)将处理好的生物标本固定到切片机的样品夹上,并调整
切片机到合适的位置;
(3)打开切片机的切片按钮,进行切片操作;
(4)将切得的标本片取下,放在水中,用刷子轻轻刷去石蜡;(5)将切片玻片放在载玻片架上,用恒温板加热到50度干燥;(6)最后将干燥后的玻片进行染色和封片处理。

4. 注意事项
(1)在操作时要注意安全,避免意外伤害;
(2)使用完毕后,及时关闭电源和清理设备;
(3)切片机的刀片会磨损,定期检查并更换刀片。

5. 收尾工作
(1)清理工作台,保持干净整洁;
(2)关闭设备电源,将所有工具收拾整齐。

以上就是关于石蜡切片机操作规程的详细内容,希望所有操作人员能够严格按照规程进行操作,确保实验的准确性和安全性。

石蜡切片详细步骤及注意事项

石蜡切片详细步骤及注意事项

石蜡切片详细步骤及注意事项嘿,朋友们!今天咱来聊聊石蜡切片这档子事儿。

要做好石蜡切片,那可得一步步来,马虎不得呀!先得准备好材料,这就好比做饭得有食材一样。

然后就是固定样本啦,这一步就像是给
样本安个家,让它稳稳当当的。

接下来就是脱水啦,把样本里多余的水分去掉,就像我们把衣服上
的水分甩干一样。

这一步可得仔细着点,脱水不彻底可不行。

然后是透明,让样本变得清清爽爽的,能更好地进行下一步。

这感
觉就像是给样本洗了个透亮的澡。

浸蜡呢,就像是给样本穿上一层保护衣,让它更结实。

这时候就得
有耐心,让蜡慢慢地浸透进去。

包埋就更有意思啦,把样本好好地包裹起来,就像给宝贝包上一层
温暖的小被子。

切片啦,这可是个技术活!要切得薄薄的、匀匀的,就像切豆腐一样,不能厚一块薄一块的。

展片呢,把切好的片子舒展开来,就像是给皱巴巴的纸抚平一样。

最后就是贴片啦,让片子稳稳地贴在玻片上,可别掉下来哟!
在做这些步骤的时候,可得注意好多事儿呢!比如说固定的时候,时间和方法都得把握好,不然样本就不完整啦,那可就前功尽弃啦,你说冤不冤?脱水的时候,要是脱得不好,后面的步骤都会受影响,这可不能掉以轻心啊!浸蜡也要恰到好处,不然蜡没浸透或者太多了都不行。

切片的时候更是要小心再小心,要是切坏了,那多心疼呀!
总之呢,做石蜡切片就像是一场精细的表演,每一个步骤都要认真对待,每一个细节都不能马虎。

只有这样,才能做出漂亮的切片,才能让我们更好地观察和研究呀!大家可别嫌我啰嗦,这些都是很重要的哟!希望大家都能顺利地做出完美的石蜡切片,加油吧!。

石蜡切片具体过程及操作步骤精心整理

石蜡切片具体过程及操作步骤精心整理

石蜡切片具体过程及操作步骤固定:组织块大小:1.5×1.5×0.2 CM固定液>4倍组织体积福尔马林固定市售为40%甲醛水溶液,应放入小量碳酸钠放置一段时间福尔马林固定液:40%甲醛溶液1份,水9份固定数小时后用水洗24小时优点:克服了乙醇固定的缺点脱水(组织块)70%乙醇片刻80%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时注:为保证100%乙醇无水,可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分,变蓝后更换。

最好能将100%乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。

透明(组织块)100%乙醇:二甲苯(1:1)15分钟二甲苯15分钟二甲苯15分钟注意:时间太长变脆浸蜡(组织块)石蜡熔点52—56℃温箱:56℃二甲苯:石蜡(1:1)1-2小时石蜡1-2小时石蜡1-2小时包埋将熔化了的石蜡倾入包埋框内,随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内,平置底面。

注意组织切面,放入冷水,冷固后将蜡块修齐,固定于木块上。

石蜡切片切片机:调整好。

刀:磨刀时一个方向,液体石蜡。

切下的片子,右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片,左手用干燥毛笔将切片取下,放入盛温水(约30℃)的玻璃皿内,将切片摊于温水面上,光亮的切面向下,用弯镊子细心张开皱纹。

然后将水温加到40℃,使切片更平均地展开于水面上,再用弯镊子细心分开各蜡片,将涂过少许蛋白甘油的载玻片沉至切片下面,然后将切片从水面取出。

最后将切片置于56℃保温箱内烘干,需时2小时。

刀的倾角:20—30°冬天石蜡52-54℃,夏天56-58℃HE染色法石蜡切片Ⅰ二甲苯2-5分钟(冬季56℃温箱)Ⅱ二甲苯2-5分钟(冬季56℃温箱)100%乙醇1min95%乙醇1min80%乙醇1min70%乙醇1min先用自来水而后用蒸馏水洗0.5minHarris氏苏木紫液5min。

苏木紫为盐基性染料可染细胞核。

医院快速石蜡切片操作规程

医院快速石蜡切片操作规程

快速石蜡切片操作规程
快速石蜡切片操作步骤:
1、接到标本后快速取材固定;
2、快速脱水、透明、浸蜡、包埋;
3、迅速切片、染色;
4、封片时不得有气泡,不得有树胶外溢;
5、标签必须贴于玻片左侧,编号字迹必须清楚;
6、制片后剩余组织应做常规石蜡包埋切片染色,进一步诊断。

快速石蜡切片相关要求:
1、制片工作一般应在10—20分钟内完成,诊断报告应在30分钟内出具。

2、为了尽量缩短制片时间,必须预先做好有关准备工作。

3、用于组织固定、脱水、透明的试剂和浸蜡用的石蜡应及时过滤、更换。

*注:丙酮、乙醇、二甲苯等为易燃物,进行上述各项流程时,2米距离内不得存在明火;加温脱水和浸蜡过程必须应用隔水温箱,不得使用干烤箱操作。

石蜡切片和HE染色详细步骤

石蜡切片和HE染色详细步骤

石蜡切片和HE染色详细步骤
一、石蜡切片制备
1、收集样品:根据样品的性质和形状,选择适当的采样工具和采样
容器,将样品采集到容品中并制冷处理,以防止样品发生腐败。

2、石蜡制备:在制作石蜡切片之前应先量出所需的石蜡,并将其放
入容器中,然后加入酒精等助剂加热溶解,当石蜡完全溶解熔融后,用桶
或温度控制的水浴加热,随着温度的升高,搅拌均匀,使石蜡液完全熔化,熔化后即可用于制作石蜡切片。

3、制备切片:将样品置于熔融石蜡中,用切片机将样品切成指定的
厚度,以便用于染色;将薄片分类清洗,用干净的棉棒涂上几滴石蜡,使
其连接牢固,然后放在凉爽的干燥地方。

二、HE染色
1、润湿:将样品片放入石蜡解决液,轻轻摩擦,使其充分润湿。

2、酒精消切:将石蜡解决液滴入被润湿的样品片,轻轻摇晃,完成
样品的酒精消切。

3、甲醛处理:将样品片放入含醛的苯乙酮溶液中,经摇晃后再放入95%乙醇中搅拌,使样品片可以完全吸收醛,促使样品受醛处理,使样品
片充分脱脂,加快染色效果和特殊部位的显示。

4、HE染色:将脱脂的样品片放入无菌玻璃容器内。

石蜡切片操作步骤

石蜡切片操作步骤

石蜡切片操作步骤植物组织石蜡切片的制作方法:(1)固定:用50%或70% FAA固定液(50%或70%酒精:甲醛:冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA;老的材料用70%的FAA),置于4℃固定24 h。

(2)脱水:将固定液倒去,加入50%乙醇,室温静置30 min ;重复一次,室温静置20 min。

换成1%番红溶液(用70%酒精配制),室温脱水染色过夜。

次日继续脱水,酒精浓度梯度和时间依次为:80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min(2次)。

(3)透明:1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h,纯二甲苯1h、40 min(2次)。

最后加入少量二甲苯(浸没材料即可)和碎蜡,放入38℃温箱中过夜。

(4)浸蜡:将温箱温度调至56℃,计时1h;换成二级蜡1h;三级蜡(3次)各1h、1h、40min(从温度上升到56℃开始计时)。

(5)包埋:将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中,迅速放入冰水中使蜡凝固,防止气泡产生,以及凝蜡不匀。

(6)切片:修整蜡块,用Lica RM2126切片机切片,厚度5-10 μm。

(7)贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂,将切好的蜡带放入温水中,捞至载玻片上,最后置于37℃恒温箱过夜烤片。

(8)脱蜡及染色:①番红-固绿对染ⅰ脱蜡:二甲苯60min,二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。

ⅱ染色:80%乙醇5 min,1%固绿(用95%酒精配制)迅速蘸一下,大约10s,直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min(2次)。

②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡:二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。

石蜡切片的操作方法

石蜡切片的操作方法

石蜡切片的操作方法石蜡切片是一种常用的组织切片制备方法,用于细胞学和组织学的研究。

下面是石蜡切片的操作方法:1. 收集样本:选择要制备切片的组织样本或细胞样本。

样本可以是动物组织、植物组织或细胞培养物。

2. 选择合适的浸渍剂:石蜡切片需要将样本浸渍在石蜡之中,以固定和保护样本。

常用的浸渍剂包括甲醇、乙醇和二甲苯。

3. 固定样本:将样本固定在固定剂(如甲醛)中,以保持其形态结构。

固定时间根据样本的类型和大小而定,一般在4C下静置数小时或过夜。

4. 脱水:在一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液中,将固定的样本从水中脱水,使其逐渐转移到纯度较高的乙醇中。

5. 渗透:将脱水的样本浸渍在二甲苯或其他有机溶剂中,使其渗透并置换乙醇。

浸渍时间根据样本的大小和组织特性而定,一般在一到数小时之间。

6. 包埋:将渗透后的样本置于石蜡中,使其完全浸润。

石蜡块可以预先加热至液态,然后将样本放入其中,或者将样本以及适量的石蜡放入模具中,然后通过加热使其固化。

7. 切片:将制备好的石蜡块放入石蜡切片机中,使用旋转切片刀将其切成薄片。

切片厚度一般为4-10微米。

8. 取片:用切片刀或镊子将切好的石蜡切片取出,并放置在清洁的显微镜载玻片或切片架上。

9. 脱脂:将石蜡切片置于加热的二甲苯或其他脱蜡剂中,使其脱去石蜡。

10. 染色:根据需要,可对石蜡切片进行染色,例如常用的血液和组织标本染色方法如伊红染色(H&E染色)。

11. 干燥:将染色的切片在室温下晾干或在加热台上加热至干燥。

最后,将切片用显微镜载玻片覆盖,并封口保存。

以上就是石蜡切片的一般操作方法,每个实验室可能会根据具体需求进行微调。

在操作过程中要注意安全,避免接触有毒溶剂和使用锋利的刀片时的切割操作。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

石蜡切片具体过程及操作步骤
固定:
组织块大小:1.5×1.5×0.2 CM
固定液>4倍组织体积
福尔马林固定
市售为40%甲醛水溶液,应放入小量碳酸钠放置一段时间
福尔马林固定液:40%甲醛溶液1份,水9份
固定数小时后用水洗24小时
优点:克服了乙醇固定的缺点
脱水(组织块)
70%乙醇片刻
80%乙醇2-4小时
95%乙醇2-4小时
95%乙醇2-4小时
100%乙醇2-4小时
100%乙醇2-4小时
注:为保证100%乙醇无水,可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分,变蓝后更换。

最好能将100%乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。

透明(组织块)
100%乙醇:二甲苯(1:1)15分钟
二甲苯15分钟
二甲苯15分钟
注意:时间太长变脆
浸蜡(组织块)
石蜡熔点52—56℃
温箱:56℃
二甲苯:石蜡(1:1)1-2小时
石蜡1-2小时
石蜡1-2小时
包埋
将熔化了的石蜡倾入包埋框内,随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内,平置底面。

注意组织切面,放入冷水,冷固后将蜡块修齐,固定于木块上。

石蜡切片
切片机:调整好。

刀:磨刀时一个方向,液体石蜡。

切下的片子,右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片,左手用干燥毛笔将切片取下,放入盛温水(约
30℃)的玻璃皿内,将切片摊于温水面上,光亮的切面向下,用弯镊子细心张开皱纹。

然后将水温加到40℃,使切片更平均地展开于水面上,再用弯镊子细心分开各蜡片,将涂过少许蛋白甘油的载玻片沉至切片下面,然后将切片从水面取出。

最后将切片置于56℃保温箱内烘干,需时2小时。

刀的倾角:20—30°
冬天石蜡52-54℃,夏天56-58℃
HE染色法
石蜡切片
Ⅰ二甲苯2-5分钟(冬季56℃温箱)
Ⅱ二甲苯2-5分钟(冬季56℃温箱)
100%乙醇1min
95%乙醇1min
80%乙醇1min
70%乙醇1min
先用自来水而后用蒸馏水洗0.5min
Harris氏苏木紫液5min。

苏木紫为盐基性染料可染细胞核。

在冬季可预先放入保温箱内,使染剂保持在30℃左右,如此染5min即已足够。

染色时间与气候和染液的浓度都有密切关系,须灵活掌握。

自来水洗2秒钟。

用1%酸性酒精(1mLHCl和99mL70%酒精混合液)分化5秒钟。

用自来水洗少许时候,而后入饱和碳酸锂水溶液中,使切片变蓝色,共需时约10秒钟。

(此步后须用镜检细胞核是否适当,如细胞核过淡,可用自来水和蒸馏水洗一下,再用苏木紫重染,如细胞核过深,可用水洗一下,再在酸酒精中分化一下,其余步骤与上相同。

此步骤镜检很重要,不可忽视。


充分流动自来水冲洗2-10min,冲洗时间愈久,分化愈清楚(但不要超过12小时)。

而后入80%酒精中1分钟。

入0.5%伊红酒精溶液中1-2min(伊红为酸性染色剂,可染细胞浆,100mL溶液中加入1-2滴冰醋酸,冰醋酸为促染剂,使伊红容易着色,经酒精是不易脱色)。

经Ⅰ95%乙醇脱水2min
经Ⅱ95%乙醇脱水2min
经Ⅰ100%乙醇脱水1min
经Ⅱ100%乙醇脱水1min
浸入石炭酸二甲苯混合液(1:3)透明和吸水5min。

再经Ⅰ二甲苯1min洗净石炭酸,并使其更为透明。

再经Ⅱ二甲苯1min,切片自二甲苯中取出,用干纱布揩净切片以外的二甲苯,立刻滴上一小滴加拿大树胶液,并迅速用镊子取洁净盖玻片盖上(勿留气泡)。

结果:细胞核呈蓝紫色,细胞浆呈红色。

Harris氏苏木紫染色液配制法
甲液:苏木紫1g
100%乙醇10mL
(可稍加热使苏木紫溶解于酒精中)
乙液:钾明矾20g
蒸馏水200mL
(可稍加热使明矾溶解于蒸馏水中)
混合甲乙二液,煮沸后,即加氧化汞(HgO)0.5g,热至染液变深紫色,立即将烧瓶放入流动冷水中冷却。

次日进行过滤,可暴露于日光中,使其氧化为苏木红,这个过程叫做成熟。

使用时加冰醋酸4mL,可增加细胞核染色。

相关文档
最新文档