薄层色谱-偶氮苯

（一）实验目的： 1、了解薄层层析分离有机化合物的原理及应用范围； 2、掌握薄层的制备、点样、展开、显色的操作； 3、了解紫外灯检出斑点及常用的薄层展开系统、显色剂；
4、了解值Rf 值的意义及计算。

（二）实验内容： 应用薄层层析分离顺反偶氮苯
1、制备薄层
2、配制展开剂
3、检出斑点
4、计算Rf 值
(三)实验用仪器、设备： 名称 线路或示意图中符号 规 格 实验室编号 备注 薄板
载玻片
2块 硅胶G
青岛海洋化工厂AR CMC
0、5-1%浓度 偶氮苯
尺
层析缸
环己烷
AR 苯
AR
(四)实验用详细线路图或其他示意图:
点样 薄层层析展开
(五)实验有关原理及原始计算数据,所应用的公式:
薄层层析是六十年代发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。

它兼具了柱色谱和纸色谱的优点，既可用于少量样品（0、01微克）的分离，也可用于 制备分离，应用极为广泛。

R f 值是衡量物质在薄层上分离及鉴定的一个数值，R f 值彼此相差较远，
说明物质分离较好
O
B
R f 值=原点至斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离
=AO/BO
偶氮苯的光化异构体
N N
C 6H 5
C 6H 5
hv
活化分子
N N
C 6H 5C 6H 5
N N
C 6H 5
C 6H 5
+
反式
偶氮苯最常见的形式是反式异构体，反式偶氮苯在光的照射下能吸收紫外光形成活化分子，活化分子失去能量会回到顺式或反式基态
(六)实验数据记录: 1、薄层板的制备：
称取2克硅胶于8毫升1%CMC 溶液中，调成糊状，用研钵的杵在薄板上
涂布均匀，用手轻轻振动，使其成平整薄层，平铺在玻板上，空气下干燥。

2克硅胶可铺8块载玻片。

2、点样
待薄层干燥后，进行点样，先在薄板底线1-1、5厘米处画一条线，将待 分离样品溶于低沸点溶剂中，用毛细管点样，样品斑点要小，点样间距1-1、5 厘米。

1.薄层色谱用的吸附剂一般是氧化铝,硅胶,硅藻土,聚酰胺等,薄层板制作时,除吸附剂外,还添加一些另外物质. 硅胶H 即为纯硅胶 硅胶G 硅胶+石膏,适合于板上作记号 硅胶GF254 含石膏可在254纳米紫外灯下观察荧光的物质 硅胶GF254+365 含石膏可在254,365纳米紫外灯下观察荧光的物质 粘合剂石膏(2CaSO 4.H 2O)还可用淀粉，羟甲基纤维素钠（CMC）代替，加 粘合剂的薄板叫硬板。

2、具有较大极性的化合物在薄层板上呈现较强吸附力，
它们的Rf 值较小， 因此利用化合物极性不同，在不同展开剂上显示不同Rf 值，可以达到分离。

3、薄层板制作方法分干法，湿法两种。

3、展开：
配制的展开剂置于密闭层析缸中，展开剂用量约在缸底部1厘米高，将薄板轻轻放入，用上行法展开。

4、显色：
待展开剂距上沿约1厘米处，取出薄板，溶剂挥发，紫外灯下看萤光，或 用显色剂显色。

5、计算Rf 值
（六）　注意事项
(八)对实验结果实验中某些现象的分析讨论：
1、薄板涂布不匀，有气泡，致使分离不佳，在硅胶与CMC混合时要研磨，清除气泡。

2、光照后的顺式斑点不明显，有时Rf值计算有误，可以在紫外灯下再观察。

3、如是分离别的化合物，应该加显色剂。

4、点样时斑点尽可能小，以免在展开时造成扩散，分离不佳。

通过本试验，要求学生掌握不同色谱技术的特点，原理及其应用。

一般讲：
1、薄层色谱应用简单，普及，应该牢固掌握，作为今后化学研究中不可 缺少的工具，并应用该技术来探索柱色谱分离的最佳条件。

2、柱色谱用于纯品制备，特别是较大量混合物的分离，结构鉴定，离不开柱色谱的应用。

3、气相色谱用于定量、定性分析，但对于加热易分解，不挥发性物质不 适用。

(九)实验方法指示及注意事项:
1、光异构化：0、1克反偶氮苯溶于5毫升无水苯中，将此溶液分为二个试管，置一试管在太阳光下照射一小时，另一试管用黑纸包好，照射要完全，使 分离现象明显。

2、薄板制成后可以在105-1100C的烘箱中活化1-2小时，然后置干燥器中备用，不活化之薄板分离效果也可。

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