人工授精

一、精液品质检查

1. 精子活力的检查
检查时，用生理盐水或稀释液将精液加以稀释，在载玻片上涂成薄层，放在37～38℃显微镜恒温台或保温箱内，在400～600倍下观察。
评定精子活力的等级一般采用0～1．0的十级评分，即所观察的精子100%呈直线前进运动的评为1．0分，90%的评为0．9分，以下类推。
应用新鲜精液授精的精子活力要求不低于0．5分。制作冷冻精液时，冷冻前活力应在0．6分以上，解冻后应在0．3分以上。

2. 精子畸形率的检查
凡是形态不正常的精子都是畸形精子，一般分为头部畸形、颈部畸形、中段畸形和主段畸形。精子畸形率过高会影响受胎率。公牛精子畸形率要求不超过18%，如果超过20%就不能使用。
检查方法是用玻璃棒蘸一滴经稀释后的精液于洁净的载玻片的一端，用另一载玻片的短边与精液接触并以30°角平稳地向前推，使精液均匀地涂抹在载玻片上。待干后，用95%的酒精固定2～5分钟，然后用蒸馏水轻轻冲洗，阴干后用0．5%龙胆紫溶液(或红、蓝墨水)染色3分钟，再用蒸馏水冲洗。干燥后在显微镜400～600倍下检查500个以上的精子，计算出其中畸形精于的百分率。


二、解冻与输精

(一)解冻
冷冻精液的解冻温度、解冻方法都直接影响精子解冻后的活率。通常用35～40℃水浴解冻较方便，但也有人用冰水解冻(0～5℃)和高温解冻(50～70℃)。由于冷冻精液的剂型不同，解冻方法也有差别，细管、安瓿或袋装精液可直接投入35～40℃温水中，精液溶化一半时取出备用。颗粒精液有干解冻和湿解冻两种方法，干解冻是将灭菌试管置于35～40℃水中恒温后，投入精液颗粒，摇动至溶化，加入1mL20～30℃的解冻液。湿解冻是将1mL解冻液装入灭菌试管内，置于35～40℃温水中预热，然后投入1颗冻精颗粒，摇动至融化，取出使用。

(二)输精

1. 输精前的准备
(1)输精器材的准备：输精用具在使用前必须彻底洗涤、消毒。用前输精管内壁用稀释液冲洗。玻璃瓶或金属输精器可用蒸汽、75%酒精或放入高温干燥箱内消毒；输精胶管不耐高温，可用酒精或蒸汽消毒。输精器在用前用稀释液冲洗内壁2～3次。开膣器以及其他金属用具洗净后浸泡在消毒液中。或在使用前用酒精、火焰消毒。输精管以每头母畜准备一支为宜。
(2)精液的准备：保存精液需要升温到35℃左右，活率不低与0.6；冷冻精液解冻后不低于0.3，才能输精。
(3)输精员的准备：输精员的指甲必须剪段短磨光，洗涤擦干，用75%酒精消毒手臂；带长臂手套外涂润滑剂。

　

　2. 输精要求
输精量须视母畜
的年龄和生理状况而变动。对体型大、经产、产后配种和子宫松弛的母畜，应适当增加输精量。液态保存精液的输精量一般比冷冻精液多。要保持畜群有较高的受胎率，输入足量有效精子数显得更重要。
适宜输精时间是根据排卵时间和进入母畜生殖道内精子获能并保持受精能力时间来决定的。奶牛是在发情后10～20h，生产上一般采取早晨发情，晚上配；晚上发情，次日早晨配的方法。
输精次数和间隔时间视输精时间和母畜排卵时间的距离来定，应保证有受精能力的精子和卵子在受精部位相遇。生产上常用外部观察法鉴定发情，很难确定排卵时间。为增加精卵相遇机会，往往采用一个情期两次输精，两次间隔8～l0h。输精部位与受胎率有关，牛采用子宫颈深部输精。

3. 输精方法
(1)膣器输精法：使用开膣器扩开阴道，借助光源(如手电、额镜、额灯)，找到子宫颈口，用另一只手将输精管插人子宫颈1～2cm，徐徐注入精液，随之取出输精管及开膣器。开膣器输精可以观察子宫颈变化，确定发情时间。开膣器输精法操作繁琐，输精部位浅，目前在牛已很少使用。
(2)直肠把握子宫颈深部输精法：将牛尾系到直肠把握手臂的同侧，露出肛门和阴门。按直肠检查法将左手伸入直肠内，掏出过多的宿粪,握住子宫颈后端,压开阴门裂，右手持输精导管插入阴门，先向上倾斜避开尿道口，再转入水平前伸至于宫颈口，左、右手配合绕过子宫颈螺旋皱折，通过子宫颈内口，到达子宫体底部。左手前移，用食指抵住角间沟，确定输精导管前端的位置，二则防止用力过猛刺破子宫壁。然后将输精导管往后拉2cm使导管前端处于子宫体中部，将导管内精液推入输精导管抽出后，左手顺势对子宫角按摩1～2次，但不要挤压子宫角。此法优点是方法简单、安全，可对子宫角、卵巢进行直肠检查。直肠把握子宫颈输精法受胎率比开膣器法高。目前牛的人工授精多用直肠把握子宫颈法输精。对牛进行直肠把握子宫颈输精法，一定要注意在直肠内的手握子宫颈的位置。