霉菌的形态观察

霉菌的形态观察

09级生物科学（3）班张刚刚 200900140165

组员：岳永胜俞华军余振洋谢英健

2010/11/10

一．实验目的

1.了解并掌握霉菌形态观察的基本方法

2.了解根霉、曲霉、毛霉、青霉的基本形态特征

二．实验原理

霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可观察不同发育期的菌体结构特征变化。对霉菌可利用乳酸石炭酸棉蓝染液进行染色，盖上盖玻片后制成霉菌制片镜检。石炭酸可以杀死菌体及孢子并可以防腐，乳酸可以保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。同时，这种霉菌制片不易干燥，能防止孢子飞散，用树胶封固后可制成永久标本长期保存。

三．实验材料

1.菌种

根霉、毛霉、黑曲霉、青霉的平板培养物

2.仪器和其他用品

酒精灯；接种环；镊子；滤纸；吸管，平皿，载玻片，盖玻片，解剖针，显微镜等。

四．操作步骤

1.配培养基配制200mL马铃薯培养基

2.准备小室 在平皿底部铺一张略小于皿底的圆形滤纸片，在其上放一个U 形玻棒，在U 形玻棒上放一块载玻片和四片盖玻片，盖上皿盖。准备九套小室，与两套空白平皿一起用牛皮纸包好。

3.灭菌 将培养基、平皿、包好的吸管、镊子、解剖刀及30mL20%的甘油放入灭菌锅中灭菌。

4.制备琼脂块 通过无菌操作，用解剖刀由马铃薯琼脂薄平板上切下1cm ×1cm 左右的琼脂块，将其移至小室的载玻片上，每片两块。

5.接种 通过无菌操作，用接种环从根霉、曲霉、毛霉或青霉的琼脂平板培养物中挑取很少量孢子，接种于小室中琼脂块边缘上，将盖玻片覆盖在琼脂块上。

6.培养 通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加3-5mL 灭菌的20%甘油，盖上皿盖，于28℃培养7天。

7.镜检 取出后直接用低倍镜和高倍镜镜检。

五．注意事项

1.在载玻片培养观察中，在注意无菌操作，接种量要少并尽可能将分散孢子接种在琼脂块边缘，避免培养后菌丝过于密集便于观察。

2.加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。

3.标本制好后，先用低倍镜观察，再用高倍镜观察加盖玻片时勿压入气泡。

六．实验结果

根霉（10×40倍） 根霉（10×40倍）

假根 假根

孢子囊

孢子梗

曲霉（10×40倍）根霉（10×40倍）

毛霉（10×10倍）毛霉（10×40倍）

青霉（10×40倍）

顶囊

分生孢子梗足细胞

孢子囊

孢囊梗

分生孢子

菌种描述

根霉

菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。

毛霉菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。菌丝体上直接生出孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊

曲霉

菌丝有隔膜，菌丝体产生大量的分生孢子梗。分生孢子梗顶端膨大成为顶囊，一般呈球形。项囊表面长满一层或两层辐射状小梗，最上层小梗瓶状，顶端着生成串的球形分生孢子。

青霉

菌丝有横隔，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆形或短柱形，

七．思考题

1.黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别？

答：根霉菌丝无隔膜，产生匍匐枝，匍匐枝末端长有假根。曲霉菌丝体分枝并具有横隔，分生孢子从分化了的菌丝上直立长出。

附：马铃薯培养基配方

马铃薯 200g

蔗糖（或葡萄糖） 20g

琼脂 15-20g

水 1000mL

pH 自然