如何进行石蜡切片制作

一、固定液（波恩氏液）

饱和苦味酸75mL+40%甲醛25mL+冰醋酸5mL

二、苏木精染液（实验前至少3个月要配好）[Harris’ solution]

1.A液：KAl（SO4）2（硫酸铝钾）40g+蒸馏水900ml，加热溶解

2.B液苏木精5g+无水乙醇100ml

3.将B液倒入A，继续加热至沸腾

4.C液，1.5g氧化汞溶于10ml蒸馏水

5.将C倒入AB混合液，边加边搅拌，缓慢，加完后加热至再度沸腾

6.将上混合液放入冷水中迅速冷却

7.装瓶，临用前加入10ml冰乙酸

使用之前要过滤！

三、熬蜡

3-4天，每天6-7 h，至金黄为止。

四、脱水

如果用的是波恩氏液，则可以从50%或者70%乙醇开始脱水。如果当天不能完成透明过程，到70%处可以停止，否则得一直做到透明过程。如果用的是甲醛-PBS缓冲液固定，则必须从30%处脱水。

30%（乙醇）1 h--------50% 1h--------70% 1 h（可以过夜）----------85% 1 h----------95% I 30min------95% II 30min-------100% I,II 100%处时间须自己摸索，不同组织脱水时间不一样。如果脱水时间过长，则会导致切片的时候有刀痕并且组织不容易切完整。如果脱水时间过短，细胞间隙水分不能完全脱去，透明的时候会变得浑浊，导致透明液不能完全代替乙醇。一般说来，像肾脏、胰腺等管状、泡状结构比较多的组织脱水时间可稍微减短，像心脏、肝脏等结构比较致密的组织，脱水时间可稍微长点，一般两次100%乙醇处，每次都不超过30min。

五、透明

（1）1/2二甲苯+1/2乙醇30min

（2）二甲苯I 30 min

（3）二甲苯II 30min。如果用二甲苯透明，则须完成后续的包埋工作。如果二甲苯里是浑浊状态的，表明组织间隙水没脱干净。

也可以用水杨酸甲酯透明，一般要18-24 h。

六、包埋

（1）1/2二甲苯+1/2 石蜡20~30 min

（2）石蜡I 20~30 min

（3）石蜡II 30 min

七、切片

一般4-7°角，4-5微米厚度

八、染色（最后再做）