全国感染性疾病抗原抗体快速检测
全国感染性疾病抗原抗体快速检测
2007年第一次室间质量评价小结
2007年共有54家实验室报名参加感染性疾病抗原抗体快速检测室间质评活动。第一次共有48家实验室回报了结果，其成绩分布和试剂使用情况如下：
血小板抗体检测 宣传
血小板抗体检测项目（固相凝集法） 一、基本原理： 血小板抗体检测是检测患者血清中是否存在针对血小板的免疫性抗体，包括三类：1.ABO血型系统和HLA系统产生的血小板相关抗体，2.血小板特异性抗原（HPA）产生的特异性抗体，3.药物所致的血小板抗体 二、血小板抗体检测的临床应用 (一)在临床辅助诊断中的作用 1、特发性血小板减少性紫癜（ITP）：ITP的临床症状很重要，但仍为排除性诊断。如结合血小板抗体检测，则对ITP的确诊有重要价值。 2、血液系统疾病辅助诊断：对白血病、再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合症、溶血性贫血、新生儿血小板减少症有辅助诊断意义。 3、孕期流产风险评估：血小板抗体筛查可对孕期流产风险做出评估，尤其适用于有多次妊娠史、习惯性流产史以及不孕不育情况查因。（二）在临床输血治疗中的应用 1、预防红细胞输注中非溶血性发热反应：血小板抗体阳性患者输注红细胞悬液后发生非溶血性发热反应明显高于阴性者，对于血小板抗体阳性采取干预措施后非溶血性发热反应明显降低，极大提高了输血的安全性。 2、预防血小板输注无效：血小板抗体是引起免疫性血小板输注无效最重要的原因，特别是多次输血后出现的血小板输注无效。检测血小板抗体对提高血小板治疗效率和保证输血安全有重要意义。 三、血小板抗体检查的筛查对象 1、血液肿瘤科病人：评价患者体内血小板抗体水平，辅助诊断血液系统疾病：如白血病、再障、溶血性贫血、血小板减少性疾病、骨髓异常增生综合症。 2、需治疗性输注血小板患者：特别是需多次输注血小板患者，建议提前筛查血小板抗体，防止血小板输注无效。 3、妇产科孕检：评价孕期流产风险，尤其适用于有多次流产史患者查因。
抗原抗体的最佳反应
第一节抗原抗体反应的原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）与抗体超变区的沟槽分子表面的结构互性与亲合性而结合的。 一、抗原抗体的结合力 抗原抗体间结合为非共价键结合，有四种分子间引力参与。 （1）静电引力：是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力。这种引力的大小与两电荷间的距离的平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越强。 （2）范德华引力：是抗原与抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生吸引力。能促使抗原抗体相互结合，这种引力的能量小于静电引力。 （3）氢键结合力：是抗体上亲水基团与相应抗原彼此接近时，相互间可形成氢键，使抗原抗体相互结合。氢键结合力较范德华引力强。 （4）疏水作用力：是抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步相互吸引，促进其结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体结合作用最大。 二、抗原抗体的亲合性和亲合力 亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适应而存在的引力，它是抗原抗体之间固有的结合力，可用平衡常数K来表示：K=K1/K2，K值越大，亲合性越高；亲合性越高，与抗原结合越牢。 抗体的亲合力是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关，即所谓多价优势，如IgG为两价，亲合力为单价的103倍，IgM为5～10价，亲合力为单价的107倍。由于抗原抗体的结合反应是可逆的，若抗体的亲合力高，与抗原分子结合牢固，不易解离；反之即容易解离。 二、亲水胶体转化为疏水胶体 大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，它们溶解在水中皆为胶体溶液，不会发生自然沉淀。这种亲水胶体的形成机制是因蛋白质含有大量的氨基和羧基残基，在溶液中这些残基带有电荷，由于静电作用，在蛋白质分子周围出现了带相反电荷的电子云并形成了水化层，由于电荷的相斥，就避免了蛋白质分子间靠拢、凝集和沉淀。当抗原抗体结合后，使水化层表面电荷减少或消失，水化层变薄，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。再加入电解质，如NaCl，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。
[资料]血小板抗体检测意义
[资料]血小板抗体检测意义 血小板抗体检测意义 因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注，成为临床亟待解决的问题。 血小板抗体检测(或筛选)包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。 白细胞、血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要原因，非溶血性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应，文献报道输注红细胞为 2,6%，输注血小板为20,30%，多次输血患者高达 27,,63,，而非溶血性发热性输血反应与血小板抗体密切相关，是影响临床安全输血的严重因素。血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意义。 (一)输注红细胞悬液: 1.血小板抗体检测阳性患者的非溶血性发热反应明显高于血小板抗体检测阴性患者;血小板抗体检测阳性患者经干预后非溶血性发热反应明显下降。 2. 干预措施: 1)建议使用去白的红细胞(血库型或床旁型白细胞滤器) 2)建议使用洗涤的红细胞 3)使用药物 (二) 输注血浆: 1)输血性急性肺损伤(transfusion related acute lung injury， TRALI): 文献报道，输血后发生的一系列严重呼吸窘迫病,其80%病例输入的血液中含有血小 抗体。研究已经证实:血小板抗体是引起TRALI的重要因素之一。
上海市血液中心杨颖教授认为中国免疫性TRALI发病虽少，但严重型较多。 2)不同国家TRALI发生\死亡率 UK SHOT 德国丹麦法国加拿大 1996-2003 1995 – 2002 1999 – 2002 1994 –1998 2000 –2003 例数 139 101 6 34 21 发生率% 7 3 7 0-15 0-5 死亡率% 9 NR NR 20 9 检测患者、供者血液的血小板抗体是可行的、必要的，目的是进一步保证输血安全。 (三)输注血小板 临床血小板输注无效发生率为30%,70%，其中免疫因素引起的血小板输注无效约为20%。 血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因，文献报道20,80%多次 输血的患者出现免疫性血小板输注无效，血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费，同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。 血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体有关的疾病的重要依据，其对不孕 不育和因子宫肌瘤引起死胎都有极大的影响。 鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该项目得到2011年11月1日卫生厅质量检 查组的充分肯定。目前我省兄弟医院已相继开展，有浙一、浙二、邵逸夫医院、浙江省中医院、浙江医院，我市有李惠利医院、市一、鄞州医院、鄞州二院等。收费:
血小板抗体检测输血科篇4稿
血小板抗体检测和交叉配型项目推广要点（输血科） 一、临床背景 随着输血科学科建设的高速发展，如何指导临床安全、合理、科学、有效的血液成分（主要是红细胞和血小板）输注，是提高输血科学科地位，保障临床输血安全的重要工作。 在国内临床常规输血工作中红细胞和血小板的输注和输注前检测都是在输血科完成，而采供血机构供给临床的红细胞存在滤白细胞和未滤白细胞并存的现象，即使是滤白细胞虽然其白细胞大多数被滤除但血小板仍然存在未被滤除，这样的红细胞供给临床会带来非溶血性输血不良反应的风险。而目前国内血小板的输注则更为不规范，99%以上的临床机构血小板输注仍然采用随机输注（即“盲输”），不相合的血小板输入患者体内后迅速被机体免疫系统破坏清除，导致血小板输注无效症频繁发生，不仅浪费了宝贵的血小板资源，而且延误了患者的最佳治疗时机，还增加了患者痛苦和经济负担，危害极大。 二、在输血科开展血小板抗体检测和交叉配型的临床意义 1.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。 2.指导临床输血，保障输血安全：在输血科常规术前备血的血型鉴定中加入血小板抗体筛检，可对临床输血中出现发热、黄疸、急性肺损伤等非溶血性输血不良反应的风险作出评估,同时可响应国家号召，
指导临床精准输血，节约血液资源，合理控制输血费用。 3.临床拓展 血液病科 1）.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。 2）.自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。 3）.药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能，使血小板的生成减少，同时应用某种药物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小板膜上与补体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏血小板，造成血小板破坏增多，从而引发血小板减少。 妇产科 1).反复流产、不孕不育查因：对于反复和习惯性流产史（尤其是孕早期）和不孕不育史的患者，检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平，可对其造成流产和不孕不育的原因作出辅助诊断。 2).产检（尤其针对高龄和二胎产妇）
抗原抗体反应
免疫学检测 抗原抗体反应(antigen-antibody reaction)是指抗原与相应抗体所发生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的特点 （一）特异性抗原抗体的结合本质是抗原决定簇与抗体超变区的结合。抗原决定簇与抗体超变区在一级结构和空间构型上呈互补关系，所以它们的结合具有高度特异性。抗原抗体结合力的大小，常用亲和力（affinity）或亲合力（avidity）来表示，前者指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之间的结合强度，后者指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。抗原与抗体的结合为非共价的可逆结合，它们空间构象的互补程度不同，结合力强弱也不同，互补程度越高，亲和力越高。 （二）可逆性抗原抗体结合反应不是化学反应，而是非共价键的结合。4种分子间引力参与了抗原抗体间的结合，分别是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用。抗体和抗原之间的亲和力源自抗体超变区和抗原决定簇在空间构型上的互补性。抗原和抗体分子均是极性分子，反应温度、酸碱度和离子浓度对它们的极性有重要影响，从而影响着两者的空间构型和亲和力。抗原抗体结合反应是可逆反应。正向反应产物是抗原抗体复合物，复合物解离则是逆向反应。（三）抗原和抗体的浓度及合适比例 抗原和抗体的浓度及合适比例是可见现象能否出现的关键。当比例不合适时，少量的小分子抗原抗体复合物停留在反应的第一阶段，不能进一步交联和聚集，故不出现肉眼可见的现象。一般用电解质溶液来调整抗原和抗体的浓度，使两者的比例合适。 （四）抗原抗体反应的阶段性 抗原抗体反应的过程可分为两个阶段。第一阶段是抗原抗体发生特异性结合，此阶段的抗原抗体复合物量很少，分子小，肉眼看不见。当抗原抗体比例合适并且具备一定的环境因素(如电解质、pH、温度、补体)时，抗原抗体复合物进一步交联和聚集，反应也进入第二阶段，即可见反应阶段。第二阶段的抗原抗体
血小板抗体检测意义
血小板抗体检测意义 因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注，成为临床亟待解决的问题。 血小板抗体检测（或筛选）包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。 白细胞、血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要原因，非溶血性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应，文献报道输注红细胞为2?6%，输注血小板为 20?30%，多次输血患者高达27%?63%,而非溶血性发热性输血反应与血小板抗体密切 相关，是影响临床安全输血的严重因素。血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意义。 （一）输注红细胞悬液： 1. 血小板抗体检测阳性患者的非溶血性发热反应明显高于血小板抗体检测阴性患者；血小板抗体检测阳性患者经干预后非溶血性发热反应明显下降。 2. 干预措施： 1）建议使用去白的红细胞（血库型或床旁型白细胞滤器） 2）建议使用洗涤的红细胞 3）使用药物 （二）输注血浆： 1）输血性急性肺损伤（transfusion related acute lung injury , TRALI）：文献报道,输血后发生的一系列严重呼吸窘迫病,其80%病例输入的血液中含有血小 抗体。研究已经证实：血小板抗体是引起TRALI 的重要因素之一。 上海市血液中心杨颖教授认为中国免疫性TRALI 发病虽少,但严重型较多。 2）不同国家TRALI 发生死亡率 德国丹麦法国加拿大UK SHOT 1996-20031995 - 20021999 - 20021994 -19982000 -2003 例数139********
发生率% 7370-150-5 死亡率% 9NR NR209检测患者、供者血液的血小板抗体是可行的、必要的,目的是进一步保证输血安全。 （三）输注血小板 临床血小板输注无效发生率为30%?70%，其中免疫因素引起的血小板输注无效约为20%。 血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因，文献报道20?80%多次 输血的患者出现免疫性血小板输注无效，血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费，同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。 血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体有关的疾病的重要依据，其对不孕不育和因子宫肌瘤引起死胎都有极大的影响。 鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该项目得到2011年11月1日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省兄弟医院已相继开展，有浙一、浙二、邵逸夫医院、浙江省中医院、浙江医院，我市有李惠利医院、市一、鄞州医院、鄞州二院等。 收费： 1 白细胞特异性和组织相容性抗体： 1）针对HLA- I类抗原（HLA-A、HLA-B 抗原和少量HLA-C 抗原）的HLA- I类抗体 （50-80% ）。 2）物价收费目录：编码—260000016 ；项目名称—白细胞特异性和组织相容性抗体检测； 价格—90 元/次。 3）现医保限定支付范围：无限定支付范围；甲乙分类—甲。 2 血小板特异性和组织相容性抗体： 1）针对血小板特异性抗原（HPA 抗原）的HPA 抗体（17-25%）。 2）物价收费目录：编码—260000017 ；项目名称—血小板特异性和组织相容性抗体检测；价格—90 元/次。 3）现医保限定支付范围—限列入支付范围的器官移植；甲乙分类—甲。（输血就是器官移 植的一种） 收费参考文件： 《浙江省基本医疗保险医疗服务项目名称》，浙江省劳动和社会保障厅，2005 年版，第65 页。
血小板抗体检测及交叉配血
血小板抗体检测及交叉配 血 Last revision on 21 December 2020
邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血一、目前血小板输注状况 随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。 血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR 比较少见。由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。 由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。 二、输血科开展的新项目 1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方法筛查 HLA I类IgG抗体。
第六章沉淀反应.
第六章沉淀反应 PreCipitation 第一部分目的要求和教学内容 一、目的要求 ， 掌握：凝胶内沉淀试验、免疫浊度分析、免疫电泳法的原理；熟悉：凝胶内沉淀试验、免疫浊度分析、免疫电泳的应用；了解：液相沉淀试验的原理，各种沉淀反应方法的技术要点和影响因素。 二、教学内容 1．液相沉淀试验：絮状沉淀试验，环状沉淀试验。 2．凝胶内沉淀试验：单向琼脂扩散试验，双向琼脂扩散试验。 3．免疫电泳技术：免疫电泳，火箭免疫电泳，对流免疫电泳，免疫固定电泳。 4．免疫浊度分析技术：透射免疫比浊法，散射免疫比浊法，速率抑制免疫比浊法， 免疫胶乳浊度测定法，免疫浊度分析的影响因素和免疫浊度测定法的应用。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1．Fahey曲线适用于 A．小分子抗原，长时间扩散(48h) B．小分子抗原，短时间扩散(24h) C．大分子抗原，长时间扩散(48h) D．大分子抗原，短时间扩散(24h) E．不论分子大小 2．ManCini曲线适用于 A．小分子抗原，长时间扩散(48h) B．小分子抗原，短时间扩散(24h) C．大分子抗原，长时间扩散(48h) D．大分子抗原，短时间扩散(24h) E．不论分子大小 3．ManCini曲线 A．适用于小分子抗原，扩散时间大于48h B．适用于小分子抗原，扩散时间小于24h C．适用于大分子抗原，扩散时间小于24h D．抗原浓度与沉淀环直径的平方呈线性关系 E．使用半对数坐标纸作图 4．Fahey曲线 A．适用于大分子抗原，扩散时间大于48h B．适用于小分子抗原，扩散时间大于48h C．适用于大分子抗原，扩散时间小于24h D．抗原浓度的对数与沉淀环直径呈线性关系 E．使用普通坐标纸作图 5．单向琼脂扩散试验，抗体与融化琼脂混合的温度 A．约37℃ B．约45℃ C．约50℃ D．约60℃ E．室温 6．单向琼脂扩散法可用于
血小板抗体检测及交叉配血
血小板抗体检测及交叉 配血 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血一、目前血小板输注状况 随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。 血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR 比较少见。由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。 由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。 二、输血科开展的新项目 1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方法筛查 HLA I类IgG抗体。
(完整版)沉淀反应
沉淀反应 沉淀反应特点： 沉淀反应是指可溶性抗原和相应抗体在特定的条件下特异性结合所出现的沉淀现象。 沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素、核酸等可溶性的小分子物质。 一、概念 可溶性抗原与其相应抗体特异结合，出现肉眼可见的免疫复合物，称为沉淀反应。沉淀反应属于体外抗原抗体反应，其反应也分两个阶段：第一阶段位抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小复合物，肉眼不可见；第二阶段为形成大的可见免疫复合物，如沉淀线、沉淀环等。 二、液相内的沉淀反应 液相内的沉淀反应类型有絮状沉淀反应、环状沉淀反应和免疫浊度试验。 1、絮状沉淀反应在电解质溶液中，可溶性抗原与相应抗体特异性结合，当抗原和抗体 分子比例合适的时，可形成絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。直接影响絮状沉淀的试验最重要的因素是抗原和抗体分子比例合适。 ①抗原稀释法抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗体反应 ②抗体稀释法抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应 ③方阵滴定法方阵滴定法即棋盘滴定法（二维的，既稀释抗原也稀释抗体） 2、环状沉淀反应先将适量已知抗血清价值毛细玻璃管（2~3mm）底部，再沿管壁缓缓 加入等体积待测样品溶液，使样品与抗血清分层清晰。如果样品中有与已知抗体对应的可溶性抗原，会在两种液体的交界面出现白色沉淀环。 3、免疫浊度试验 ⑴原理：在特殊缓冲液中，分子比例合适的可溶性抗原与相应抗体形成抗原抗体复合物，使反应液出现浑浊，其浊度与免疫复合物的量成正比，利用光学测量仪器结合自动分析检测系统检测，并与一系列的标准品对照，即可计算出被检抗原或抗体的含量。 免疫浊度法按照仪器设计的不同，分为使用透射比浊仪的免疫透射比浊法和使用散射比浊仪的免疫散射法。 免疫浊度法可用于液体中的微量抗原、抗体及小分子半抗原（如药物等）的定量检测。其优点是自动检测、操作简便快速、适合大批量标本检测、灵敏度高（可达毫微克水平）、且无放射性污染。 A、免疫透射比浊法原理及用途：当抗原抗体特异结合形成IC时，溶液浊度增加。到一定波长的光线通过此溶液时，由于溶液中IC吸收光而导致透光量减少，利用透射比浊仪测量出溶液的入射光衰减，求得的溶液吸光度（A）可用于表示浊度。在一定范围内A值与IC 值成正相关，若固定抗体量，则根据A值可以推算出抗原的量。 免疫透射法快速，检测可进行自动化，常用于临床体液蛋白的检测。 B、免疫散射比浊法原理及用途：当光束沿水平轴照射被检溶液时，碰到小颗粒的IC可导致光线偏转（光散射），用散射比浊仪可测定溶液散射光强度（I）。当入射光波长固定时，I
血小板抗体检测及交叉配血
邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血 一、目前血小板输注状况 随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。 血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR比较少见。由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。 由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。 二、输血科开展的新项目
1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方 法筛查HLA I类IgG抗体。 2.血小板交叉配型：采用双抗体夹心ELISA方法检测针对血小 板GP IIb/IIIa和HLA I类抗原的IgG抗体，方法快速、灵敏，并可区分血小板特异抗体和HLA I类抗体。 三、临床意义 1. HLA抗体检测 （1）对于血小板输注无效的病人，通过检测血小板HLA I类抗体，可以协助医生寻找病人血小板输注无效的原因。 （2）指导医生为HLA I类抗体阳性的病人选择合适的血小板输注方案，使宝贵的血液资源得到合理有效的利用。 （3）对于反复输注血小板的病人，定期测定血清中的HLA抗体可以预测血小板输注效果，并能及时发现导致病人血小板输注无效的免疫性因素。 2. 血小板交叉配型 （1）区分病人血小板抗体的类型。 （2）对于免疫性血小板输注无效的病人，通过进行血小板配型，可以为病人选择相对应抗原阴性的血小板进行输注，从而提高血小板输注效果，并能减轻病人的经济负担。 四、检测说明 采用不抗凝的采血管采集血液标本。标本要求无溶血，无乳糜，无杂物。
抗原抗体反应及应用
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 抗原抗体反应及应用 不论天然的还是人工合成的分子，只要能被机体的免疫系统识别的都可以诱导机体的免疫应答，产生相应的抗体。 大多数抗体和抗原本身是既有免疫原性(诱发产生特异抗体) ，又有反应原性(与特异的抗体相结合) 。 抗原与抗体的特异性反应不仅可以在体内进行，而且可以在体外进行。 一切利用血清学技术方法所进行的各种测试都是基于这一根本的特性。 抗体反应技术的应用之广泛已经远远超出了免疫学、医学、甚至生命科学的范围，成为类微量，灵敏，快速的检测分析方法。 本章着重介绍抗体制备，抗体抗原反应原理及技术方法的应用。 第一节抗体的制备环境中的大部分生物(包括病原生物) 及其产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫系统而言是外源抗原，这些抗原能通过侵染或其他的途径刺激免疫系统，产生以抗体为主的体液免疫应答。 同样用抗原人工免疫实验动物，可以获得含有特异性抗体的血清，称为抗血清(antiserum) ，因血清中抗体是多个抗原决定簇刺激不同 B 细胞克隆而产生的抗体，所以称多克隆抗体(polyclonal antibody) 。 一个 B 细胞克隆所分泌的抗体即为单克隆抗体。 1 / 3
用免疫动物的 B 细胞与骨髓瘤细胞融合，在体外可以分离出许多单个 B 细胞克隆，以此方法可制备单克隆抗体(monoclonal antibody) 。 随着分子生物学技术的发展，已经可以用抗体基因文库(antibody combinatorial library) 筛选制备单克隆抗体。 应用基因工程技术，根据需要对抗体进行改造，获得基因工程抗体(engineering antibody) ，以及催化性抗体(catalytic antibody 或 abozyme) 等的全新的抗体。 一、抗血清的制备 1．免疫动物 (1) 抗原： 免疫动物是制备抗血清的第步。 免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必须与大分子载体连接，连接剂见表71。 抗原的用量视抗原种类及动物而异，次注射小鼠可以少至几个微克，免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加，从几百 g ／次至几 mg／次。 〔2) 佐剂及乳化： 佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。 佐剂有完全和不完全佐剂之分。 完全佐剂加有灭活的分枝杆菌(如卡介苗) 或棒状杆菌。 福氏佐剂可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按 1：
抗原抗体反应及其应用
抗原抗体反应及其应用 摘要抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。免疫印迹，又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。双转印法、天然电泳及western blot 分析等是最近几年出现的新型蛋白印迹技术。单克隆抗体技术是20世纪后20年内最为重要的生物高技术之一。单克隆抗体药物在肿瘤治疗、抗感染等方面具有重要的作用。关键词抗原抗体反应、Western blotting、单克隆抗体技术 一、抗原抗体反应 抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化，包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段，以及由亲水胶体转为疏水胶体的变化[1]。抗原是能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原表位是抗原上与抗体结合的区域。蛋白质抗原的表位是由相邻的连续的或非连续的氨基酸序列形成的局部表面结构[2]，如图1所示。抗体是指宿主对体内存在的外来分子、微生物或其他因子的应答而产生的蛋白质。抗体主要由B淋巴细胞系的终末分化细胞-浆细胞产生，并且循环在血液和淋巴液中，在那里与抗原结合。抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。抗体上与抗原表位结合的位点由重链和轻链的可变区构成[3]，如图2所示。抗原抗体复合物通过大量非共价键连接。某些免疫复合物中抗体或抗原的结构未发生改变，而另一些则出现巨大的构像改变。研究抗原抗体复合物最有说服力的的方法是抗体-抗原共结晶的X射线衍射技术。
血小板抗体检测及交叉配型
随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或 随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。 血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，但作用不强，单独由血小板特异性抗体引起的PTR极其少见。 由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。 一、临床意义 1. HLA抗体检测 （1）对于血小板输注无效的病人，通过检测血小板HLA I类抗体，可以协助医生寻找病人血小板输注无效的原因。 （2）指导医生为HLA I类抗体阳性的病人选择合适的血小板输注方案，使宝贵的血液资源得到合理有效的利用。 （3）对于反复输注血小板的病人，定期测定血清中的HLA抗体可以预测血小板输注效果，并能及时发现导致病人血小板输注无效的免疫性因素。 2. 血小板交叉配型 （1）区分病人血小板抗体的类型。 （2）对于免疫性血小板输注无效的病人，通过进行血小板配型，可以为病人选择相对应抗原阴性的血小板进行输注，从而提高血小板输注效果，并能减轻病人的经济负担。 二、检测说明 采用不抗凝的采血管采集血液标本。标本要求无溶血，无乳糜，无杂物。
经典的抗原抗体凝集反应
经典的抗原抗体凝集反应 关键词：细菌红细胞电解质试管试剂样品标准物质北京标准物质网 与沉淀反应不同的是，在凝集反应中抗原均为颗粒性抗原，如细菌、红细胞等天然颗粒性抗原，或是吸附有可溶性抗原的非免疫相关颗粒。颗粒性抗原与相应抗体在电解质参与下相互作用，当两者比例适当时，形成肉眼可见的凝块即凝集反应。根据参与反应的颗粒不同，凝集反应分为直接凝集和间接凝集反应两大类，常用方法有玻片法、试管法和微量板法。玻片法常用于定性检测，试管法常用于半定量的检测。 1.直接凝集反应指天然颗粒抗原(如细菌、细胞等)在适当电解质的参与下和相应抗体相互作用，当两者比例适当时出现的肉眼可见凝块。直接凝集反应可分为玻片凝集试验和试管凝集试验两种。玻片凝集试验是在玻片上颗粒性抗原直接与相应抗体结合所出现的凝集现象，称为直接玻片凝集试验，常用于对细菌、ABO血型等的鉴定，多为定性试验。试管凝集试验是将待测的血清在试管中进行一系列稀释后，直接与一定量抗原悬液混合，孵育一定时间后根据是否出现凝集及凝集的程度，判断待测血清中是否含有对应抗体及抗体含量，是检测未知抗体的一种半定量试验方法。 2.间接凝集反应是将可溶性抗原(或抗体)吸附或偶联在与免疫无关的颗粒性载体的表面(如绵羊红细胞、细菌、胶乳微粒等)，形成颗粒性抗原(或抗体)，在适当电解质存在条件下与相应抗体(或抗原)发生特异性结合反应并出现凝集的现象。根据反应方式，间接凝集反应可分为正向间接凝集反应、反向间接凝集反应和间接凝集抑制反应。正向间接凝集反应是将已知可溶性抗原吸附于微球上形成免疫微球，检测待测标本是否含有相应的抗体，常用于检测血清中的自身抗体如类风湿因子、抗核抗体及针对某些病原微生物的抗体。反向间接凝集反应是将抗体先吸附于与免疫无关的微球上形成为免疫微球，检测待测标本是否含有相应的抗原，可用于患者血清中乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白等的检测。 3.间接凝集抑制反应检测试剂为抗原微球及相应抗体，检测时先将被检样品与抗体反应，然后再加入抗原微球，如出现凝集表明被检样品中不存在与抗原微球相同的抗原。如标本中存在相应抗原，则能与相应抗体发生结合，当再加入抗原微球时就不会出现凝集现象，故该试验在本质上属于竞争凝集抑制试验，如免疫妊娠诊断试验对血清中绒毛膜促性腺激素的检测。同样，也可以把抗体与载体相连，通过类似的竞争抑制检测被测样本中是否含有相应抗体。例如用于检测红细胞表面不完全抗体的直接Coombs试验及检测游离在血清中不完全抗体的间接Coombs试验。
经典抗原抗体沉淀反应
经典抗原抗体沉淀反应 关键词：样品聚乙二醇聚苯乙烯苯巴比妥庆大霉素试剂标准物质北京标准物质网 指可溶性抗原(主要为蛋白类物质)与相应抗体结合后形成肉眼可见的沉淀物的现象。沉淀反应一般在抗原抗体分子可咀自由扩散且彼此接触的固体状琼脂凝胶中进行，抗原抗体在二者比例合适处结合并形成较稳定的白色沉淀线。沉淀反应一般分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳和免疫比浊。免疫扩散试验和免疫电泳均可在琼脂凝胶中形成肉眼可见的沉淀线(或沉淀环)，一般用于对免疫球蛋白、补体等的检测。免疫比浊是在一定量的已知抗体中分别加入递增量的抗原，经一段时间反应后用浊度仪测量抗原抗体沉淀物的浊度，由于浊度与抗原浓度成正比，故可根据浊度推算出样品中的抗原含量。 1.单项免疫扩散试验先将一定量的抗体或抗血清(或抗原)均匀地分散于固相琼脂凝胶中，然后加入抗原或待测血清(或抗体)。加入的抗原或待测血清(或抗体)向周围扩散，在抗原与抗体的量达到一定比例时即可形成肉眼可见的沉淀环。在一定条件下，沉淀环的大小与抗原浓度成正相关。用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则被测标本中的抗原含量即可从标准曲线中查出。 单向琼脂扩散实验可分为平板法和试管法。平板法是将抗体或抗血清(或抗原或待测血清)与琼脂糖溶液(浓度一般为0. 9％左右，温度在50℃至60℃)均匀混合，在凝固前倾注成平板，待琼脂糖溶液完全凝固后用打孔器在琼脂凝胶板上打孔(孔径一般为3mm、孔距为12～15mm，孔要尽可能打得圆整光滑、不要破裂)，将抗原加入孔中，置于37℃让其自然扩散，一般在24～48小时后可见孔周围出现沉淀环，通过测定环的直径或面积可计算标本中待测抗原的浓度。试管法是将一定量的抗体均匀混于50℃至60℃的0．7％琼脂糖溶液中并注入小试管内，待琼脂糖溶液凝固后在上层加抗原溶液，待测抗原在凝胶中自然扩散，在抗原抗体比例恰当处形成沉淀环。试管法较为简单，但平板法因易于定量故更为常用。 单向琼脂扩散实验常用于对抗原的检测，使用的抗体或抗血清需具有较高特异性和较强的亲和力。应用单克隆抗体测量多态性抗原时，测定值易于偏低：反之用多克隆抗体测量单克隆病时(即单分子改变性疾病)，测定值易于偏高。琼脂质量、浓度、加样孔大小、加入抗体时琼脂糖溶液的温度及抗体是否与琼脂糖溶液充分混匀等对结果均有较大影响，需予以注意。同时每次测定都必须做标准曲线，要用质控血清对实验进行质控。
抗体的应用
单克隆抗体在临床医学上的应用 动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，重排后具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。 单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，并且来源容易。 一、作为亲合层析的配体 单克隆抗体能与其相应的抗原特异性结合，因而能够从复杂系统中识别出单个成分。只要得到针对某一成分的单克隆抗体，利用它作为配体，固定在层析柱上，通过亲合层析，即可从复杂的混和物中分离、纯化这一特定成分。 如用抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)亲合层析柱，就可从孕妇尿中提取到纯的hCG。与其它提取方法(沉淀法、高效疏水色谱法等)相比，具有简便、快速、经济、产品活性高等优点。 二、作为免疫抑制剂 抗人T淋巴细胞单抗(McAb)作为一种新型免疫抑制剂，已广泛应用于临床治疗自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反应。其作用机理有赖于McAb的种类及其免疫学特性。 注射抗小鼠Thy-1抗原的单抗，可以抑制小鼠同种皮肤移植的排斥反应。此外，对用于同种骨髓移植的供体骨髓，在体外经抗T细胞单抗加补体处理，能减轻移植物抗宿主病的发生。 三、作为研究工作中的探针 单克隆抗体只与抗原分子上某一个表位(即抗原决定簇)相结合，利用这一特性就可把它作为研究工作中的探针。此时，可以从分子、细胞和器官的不同水平上，研究抗原物质的结构与功能的关系，进而并可从理论上阐明其机理。 如用荧光物质标记单抗作为探针，能方便地确定与其结合的相应生物大分子(蛋白质、核酸、酶等)在细胞中的位置和分布。 四、增强抗原的免疫原性 抗体对抗原免疫原性的增强作用由来已久，60年代就已发现幼猪对破伤风类毒素难以产生抗体，注射相应特异性抗体IgG，就能有效地提高对委内瑞拉马脑炎病毒的免疫应答。