肿瘤细胞培养

具体做法是：
1）收集培养的肿瘤细胞，用无血清培养液洗一遍；2）计数 后将0.2ml含2×106～2×107个细胞的细胞悬液注射到动物皮下。 约一个月左右（最短在3天后），可见注射局部有肿瘤出现，甚至 有转移瘤形成。经病理组织学检查可以确定肿瘤是否由接种的细 胞产生。也可接种到腹腔或通过鼠尾静脉注射。
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同一肿瘤内细胞的活力有差别，有的细胞衰老 退化，有的处于周期阻滞状态，那些呈活跃增 殖状态的细胞称肿瘤干细胞。只有肿瘤干细胞 才是支持肿瘤生长的成分。
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7、细胞遗传
大多数肿瘤细胞有遗传学改变，如失去二倍体 核型、呈异倍体或多倍体等。
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体外培养肿瘤细胞的三个显著 基本特征：
永生性 不受控增殖性 致瘤性
3、永生性
永生性也称不死性。在体外培养中表现为细胞 可无限传代而不凋亡。体外培养中的肿瘤细胞 系（株）都表现有这种性状。
永生性和恶性（包括浸润性）是两种性状，受 不同基因调控。从一些具有永生性而无恶性的 细胞系，如NIH3T3、Rat-1、10T1/2等细胞可以 证明。
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4、致瘤性Fra Baidu bibliotek
细胞接种同种动物或裸鼠后的致瘤性是客观反 映细胞恶性程度的指标。
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二、体外培养肿瘤细胞的特征
肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体 内或在体外，在形态、生长增殖、遗传性状等 方面都有显著的不同。
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1、形态
培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多 数镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮 廓明显，核浆比例大。
电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微丝 走行不如正常细胞规则。
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5、浸润性
浸润性是肿瘤细胞的扩张性增殖行为，培养癌 细胞仍持有这种性状。
在与正常组织混合培养时，能浸润入其它组织 细胞中，并有穿透人工隔膜生长的能力。
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6、异质性
通过肿瘤细胞培养及克隆分析发现，同一肿瘤 是由具有不同生物学特征的细胞亚群构成的。 这些细胞亚群的浸润性、生长率、转移能力、 核型、对激素的反应、对抗癌药物的敏感性均 不同，这种特性被称为肿瘤细胞的异质性 （heterogeneity）。
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1、肿瘤病因和发病机制的研究
体外试验证明了物理因素（如射线）、化学因素（化学 致癌剂）及生物因素（致癌病毒、EB病毒、SV40和多 发瘤病毒等），均能使正常细胞发生转化，致使正常细 胞永生化或恶性化，为癌的诱发因素和环境提供了实验 依据。
环境因素或药物的致畸、致突变研究也可为该环境条件 或药物的致癌性提供实验依据，因此细胞培养是癌的发 生和发展研究的理想实验研究手段。
一般转化细胞系只具有无限生长能力，不具有 恶性细胞的表型，此种细胞系可相似于正常细 胞的模型而被应用。
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癌细胞系的建立
癌细胞培养的最主要的问题是从体内到体外环 境的改变。
培养中发现，有些肿瘤在体内生长，但在体外 却难以生长。
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癌细胞系的建立
肿瘤细胞在体外不易生长的可能原因：
①依赖性： 肿瘤细胞虽有较强克隆生长力，但仍有一定的群体
血癌往往是由低分化的幼稚细胞的单克隆恶性增生所引 起，若将血癌的体细胞通过体外诱导分化，促使向终未 细胞分化成为功能性血液细胞，这就可使血癌患者获得 完全缓解或达到治愈的目的。
这些试验只有采用细胞培养法才能在短期内观察到细胞 的变化，动物试验很难判定药物的直接作用，因此细胞 培养及癌的细胞诱导分化的细胞工程是进行抗癌研究、 癌细胞的恶性逆转研究理想的实验诱导模型。
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2、抗癌药物筛选方面的研究
不同的癌细胞对不同的化疗药物具有不同的敏感性。 采用癌细胞体外培养方法，既可研究某种药物对不同癌
细胞的敏感性，为药物抗癌敏感谱提供依据； 同时又可采用某种癌细胞开展对不同药物，不同剂量的
敏感性研究，以筛选出对该肿瘤最敏感的化疗药物和使 用剂量，供人体治疗时参考。
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5、癌细胞的杀伤效应研究
抗癌的间接效应，往往是药物作用于机体免疫系统促使 免疫细胞发生对肿瘤细胞的特异性和非特异性的免疫应 答，如释放免疫调节因子（如IFN、IL-2等）或细胞毒 因子（LT、TNFα/β），以及激活杀伤肿瘤的淋巴细胞 发挥杀肿瘤效应。
这种效应均可通过体外杀肿瘤细胞试验来证实，取同体 淋巴细胞经体外培养后，并加入IL-2/IFN-γ等，能明显 增强NK、TCL、LAK和TIL杀肿瘤活性。经扩增达一定 数量后再回输给病人，其疗效明显。
3、癌基因和抑癌基因方面的研究
实验证明癌的发生和发展与癌基因（原癌基因）和抑癌 基因两种基因的表达调控密切相关。
体外细胞培养既利于测定癌基因及癌基因表达产物，又 可以测定抑癌基因的表达水平。癌细胞的体外培养是定 量研究癌基因和抑癌基因表达调控的理想工具。
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4、癌细胞的诱导分化和逆转方面的研究
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三、肿瘤细胞系的建立
恶性肿瘤细胞培养建立细胞系，包括从人或动 物恶性肿瘤取材建立癌细胞系和正常细胞在体 外经理化、生物因素诱发的转化细胞系。
转化细胞系可以是恶性转化细胞和一般转化细 胞两种。
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恶性转化细胞系和癌细胞系一样具有永生性和 恶性表型，对此两种来源的细胞系鉴定也是相 似的，为研究恶性肿瘤提供了有用模型。
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2、生长增殖（不受控增殖性）
失去接触抑制，细胞能相互重叠向三维空间发展， 形成堆积物。
失去锚着依赖性，可在琼脂、甲基纤维素等支撑 物上生长。
低血清要求，不依赖生长因子，因其可自分泌产 生促增殖因子。
癌细胞或培养中发生恶性转化后的单个细胞培养 时，形成集落（克隆）的能力比正常细胞强。
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性或与其它细胞相依存关系。一是肿瘤细胞与肿瘤细胞 的相互依存，二是肿瘤细胞与基质成纤维细胞的依赖。 体外分散培养和排除成纤维细胞后也会同时消除或减弱 这些依存关系，可能影响癌细胞增殖生长的活性。
肿瘤细胞培养
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内容纲要
肿瘤细胞体外培养的重要性和应用 体外培养肿瘤细胞的特征 肿瘤细胞系的建立
癌细胞系的建立 转化细胞系的建立
癌细胞系和转化细胞系的鉴定
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一、肿瘤细胞体外培养的重要性和应用
肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，当前 建立的细胞系中癌细胞系是最多的。
肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、 肿瘤细胞和癌分子生物学极其重要的手段。肿 瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量 的作用。