医院感染监控中常用的检测方法

医院感染监控中常用的检测方法

采样及检查原则：采样后必须尽快对标本进行相应指标的检测，送检时间不得超过6 h；若标本4 ℃保存时，送检时间可延长，但不得超过24 h。

1．医务人员手的微生物学监测

（1）采样时间：在接触患者或从事医疗活动前进行采样。

（2）采样面积及方法：被检人五指并拢，将浸有无菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子一支在双手曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米cm2) 计算。（3）细菌菌落总数检查：1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放35℃温箱内培养24~48 h计数菌落。

手细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数30×2（4）判断标准：见表6-3-1。

2．物体表面的微生物学监测

（1）采样时间：消毒处理后4 h内采样。

（2）采样面积：被采表面<100 cm2，取全部表面；被采表面≥100 cm2，取100 cm2。

（3）采样方法：用5cm×5 cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有灭菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样式1～4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子入装10ml采样液的试管内送检。门把手等小

型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。

（4）细菌菌落总数检查：1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放35℃温箱内培养24~48 h计数菌落。

物体表面细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数

采样面积（cm2）

（5）判断标准：见表6-3-1。

3．空气的微生物学监测

（1）采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。（2）采样高度：与地面垂直高度80～150 cm。

（3）布点方法：室内面积≤30 m2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处取一点；室内面积>30 m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。

（4）采样方法：用90mm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5~30 min后送检培养。

（5）细菌菌落总数检查：将平板置37℃温箱内培养24 h计数菌落。

空气细菌菌落总数（cfu/ m3）= 50000NAT

式中：A—平板面积（cm2）

T—平板暴露时间（min）

N—平均菌落数（cfu/平板）

（6）判断标准：见表6-3-1。

4．使用中消毒剂和无菌器械保存液的微生物学监测

（1）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。（2 ）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入到9ml稀释液中混匀。醇类和酚类消毒剂用普通营养肉汤作稀释液。含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒液需在肉汤内加入%硫代硫酸钠作稀释液。季铵盐类消毒液需在肉汤中加入3% Tween 80和％卵磷脂作稀释液。含有表面活性剂的各种复方消毒剂需在肉汤中加入3％Tween 80作稀释液。常用消毒剂的中和剂见表6-3-2。

(3) 细菌菌落总数检查：分别取1ml采样液放入2只灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，将其中一只平板置20℃培养7d,观察真菌生长情况；另一平板放37℃温箱内培养72 h计数菌落。平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌）；若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，不宜再用。

（4）判断标准：使用中消毒剂，细菌菌落总数≤100 cfu/ ml，病原微生物不得检出；无菌器械保存液必须无菌。

5．医疗用品的微生物学监测

（1）采样时间：在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。

（2）采样量及采样方法：可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射针等均参照《中华人民共和国药典》2000年版二部附录中“无菌检查法”规定执行。对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面<100 cm2，取全部表面；被采表面≥100 cm2，取100 cm2。

（3）无菌检查：参照《中华人民共和国药典》2000年版二部附录中“无菌检查法”。

（4）细菌菌落总数检查：1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放37℃温箱内培养24~48 h计数菌落。

物体表面细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数×采样面积（cm2）

（5）判断标准：进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数≤20 cfu/g或100 cm2, 不得检出病原微生物。

6．血液和腹膜透析所用的水及透析液的微生物学监测

（1）采样点：透析用水出口（自来水经过过滤、软化、活性炭吸附、去离子逆渗透等步骤处理后的出口）、透析液出口（即透析结束时透析液离开透析器的出口）。如疑有透析液污染或严重感染病例，应增加采样点，如原水口、透析液配比机、反渗水出口、贮水罐出口、透析液进口等。

（2）细菌菌落总数检查：取透析用水或透析液1ml放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放37℃温箱内培养24~48 h计数菌落。细菌菌落数（cfu/ ml）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数×所取液体的容积（ml）

（3）判断标准：透析用水的细菌落菌总数≤100cfu/ml；透析结束时，透析液细菌落菌总数≤2000cfu/ml，并且无致热原物质存在。

表6-3-1 各类环境空气、物体表面、医护人员手细菌菌落总数卫生标