酶活性浓度测定的主要影响因素及控制
实验五影响酶活力的因素
实验10 影响酶活力的因素——正交实验法（碘量法测定酶活力）四个班，每班分16组两个同学一组目的要求：初步掌握正交实验设计法（简称正交法）的使用，运用正交法测定底物浓度、温度和pH这三种因素对酶活力的影响。
实验原理：酶反应受到多种因素的影响，如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶的反应速度。
这种多因素的实验可通过正交法即用—特制的表格——正交表来安排试验，计算和分析实验结果。
这样就能通过少量实验取得较好的效果。
实践证明正交法是一个多、好、快、省的方法，目前已广泛用于农业生产和科学实验中。
本实验运用正交法测定酶浓度、温度、PH值这三个因素对酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、温度和pH值时酶的活性最大。
酶活力用硫代硫酸钠滴定法测定。
过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。
被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。
当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵做催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。
其反应为：H2O2+2KI+H2SO4→I2+K2SO4+2H2OI2+Na2S2O4→2NaI+Na2S4O6反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。
实验器材：试管15毫升试管9*16=144支吸管1毫升2*16=32支吸管5毫升2*16=32支吸耳球16个漏斗1个研钵（或者搅碎机）1个（1台）恒温水浴锅3台铁架台16个蝴蝶夹16个酸碱两用滴定管16个100毫升的三角烧瓶3*16=48个烧杯500毫升18个（装好水放到恒温水浴锅里）实验所需药品：1. 0.01 mol/L 的过氧化氢溶液每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升1.1毫升过氧化氢溶液，用蒸馏水定容至1000毫升。
（用带盖白色试剂瓶分装10瓶。
分装1000毫升即可，其余3000用白色大试剂瓶装好备用）2. 1.8 mol/L 的硫酸溶液（每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升）共配4000毫升95毫升浓硫酸，用蒸馏水定容至1000毫升。
酶活性测定的主要影响因素及控制
2.4 正向反应与逆向反应
LDH测定的选择目前尚有争议。 国内多采用正向反应（L→P），与IFCC在 2001年发表的操作手册一致。
正向反应有利于LD1的活性表达，同时试剂成本低 廉，稳定性好。
L 乳酸 NAD LD 丙酮酸 NADH H
国外常用方法曾是逆向反应（P→L），
EDTA、草酸盐和柠檬酸盐等抗凝剂，它们为金属 离子螯合剂； 在去除Ca2+同时也去除其中Mg2+、Mn2+等离子， Ca2+是AMY的激活剂，Mg2+是ALP、CK和5′-核苷 酸酶（5′-NA）的激活剂。
1.2 肝素
是一种粘多糖， 是对酶活性影响最小的抗凝剂， 对ALT、AST、CK、LD和ACP无影响， 适于急诊时迅速分离血浆进行测定。
酶的概念
酶活性浓度测定的主要影响因 素
1.
标本及标本采集和处理因素 2. 试剂及方法学因素 3. 仪器因素的影响 4. 测定条件与参数设置
1.标本及标本采集和处理因素 的影响及控制
1.标本及采集和处理的影响因素
1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7
溶血 抗凝剂 温度 空气与光线 标本副反应 酶蛋白浓度 其他
1.1 溶血
最重要的影响是RBC内酶的大量释出。
大部分酶在细胞内外浓度差异明显，且其活性 远高于血清； 如RBC内的LD、AST和ALT活性分别较血清中高 100、15和7倍左右。
RBC释放的Hb在300～500nm可见光波段能 使吸光度值明显升高，干扰分光光度计的 测定。
生物化学检验中酶的测定综述
定时法
通常是酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、
蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内 底物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应 的平均速度。
定时法中酶促反应的过程
注意事项
用定时法测定酶活性浓度， 必须了解不同酶促反应速率和时间的关系， 应先做预试验找出酶促反应速率恒定的时期，
CK-MB
这些方法适用于临床自动化分析，具有测定时
间短（最快仅需7min）、灵敏性高（最低检测 限<µg/L）和准确性好的特点，明显优于其他 分析测定CK-MB的方法，1990年后逐渐被广泛 接受。 为使CK-MB质量分析标准化，AACC成立了专门 的标准化委员会，最近已研制成功采用重组基 因技术的CK-MB参考材料（Rck-2）。
由于同工酶（及其亚型同工型）一级结构的不
同，导致其在理化性质、催化性质、生物学等 方面有明显的性质差异，这些差异为同工酶的 分析和鉴定提供了理论基础。 临床同工酶的分析大致可分为两步，即首先精 确地分离出某酶的各同工酶组分，然后测定酶 的总活性和各同工酶组分的活性。
电泳法
在研究同工酶的所有方法中，电泳法的使用最
CK-MB
是诊断AMI、测定心肌梗塞面积的重要指标。 近年来，国外对AMI诊断效率评价时多采用测
定CK-MB质量，即测定CK-MB的酶蛋白质量浓度 （Mass）的方法。 CK-MB质量的测定通常是制备抗CK-M抗体和抗 CK-B抗体或采用CK-MB抗体，用CLIA、ELISA、 FEIA等方法测定。
同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多
肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化 作用，但其分子构成、空间构像、理化性质、 生物学性质以及器官分布或细胞内定位不同的 一组酶称为同工酶。 凡酶蛋白结构不同的同工酶称为原级同工酶， 而将经加工或修饰后的同工酶称为次级同工酶 或酶的多种形式。
临床生物化学检验技术试题及答案大全(二)
临床生物化学检验技术试题及答案一选择题（单项选择）1.下列可降低血糖的激素是A 胰高血糖素B 胰岛素C 生长素D 肾上腺素2．长期饥饿后，血液中下列哪种物质含量升高：A 葡萄糖B 血红素C 乳酸D 酮体3．检测静脉血葡萄糖，如果血浆标本放置时间过长，会造成测定结果：A 升高B 降低C 不变D 无法确定4．脑组织主要以什么为能源供给：A 葡萄糖B 氨基酸C 蛋白质D 脂肪5.当血糖超过肾糖阈值时,可出现： A 生理性血糖升高B 病理性血糖升高C生理性血糖降低D 尿糖6.下列哪种物质不属于酮体： A 丙酮 B 乙酰乙酸 C β-羟丁酸 D 丙酮酸7．正常情况下酮体的产生是在B脑垂体C 胰脏D 肾脏8．胆固醇可转化为下列化合物，但除外：A 胆汁酸B 维生素D3C 雄激素D 绒毛膜促性腺激素9．血浆中催化脂肪酰基转运至胆固醇生成胆固醇酯的酶是： A 血浆卵磷脂胆固醇脂酰转移酶B内质网脂酰COA胆固醇脂酰转移酶C 天冬氨酸氨基转移酶D 脂蛋白脂肪酶10．由胆固醇转变成的维生素是A VitAB VitBC VitCD VitD11．蛋白质占人体固体重量的百分率（%）是A 90B 45C 20D 1012．蛋白质的元素组成是A C、P、S、OB C、H、S、OC C、H、O、ND C、P、O、N13．组成蛋白质基本单位的氨基酸种类有B 20种C 21种D 23种14．某溶液中蛋白质的含量为50﹪，此溶液的蛋白质氮的百分浓度为：A 9.0﹪B 8.0﹪C 8.4﹪D 9.2﹪15．蛋白质结构中的α-螺旋属于A 一级结构B 二级结构C 三级结构D 四级结构16.酶活性测定中,对米-曼氏常数(Km)的叙述，那一种是不正确的：A ν=Vmax[S] /（Km + [S]）B 反应速度为最大反应速度一半时，Km =[S]C Km对选择底物浓度有重大意义D Km作为酶的一种特征常数，与酶的性质与浓度有关17.关于同工酶的叙述正确的是A 催化相同化学反应B 不同组织中的含量相同C分子结构相同D 理化性质特性相同18．SI制定义酶活性单位时，代号为：A pmolB U/LC g/LD Katal19．根据国际酶学委员会的决定，酶的一个国际单位是指A．最适条件下，每小时催化生成1mmol产物所需的酶量B．37℃下，每分钟催化生成1μmol产物所需的酶量C．25℃下，其他为最适条件，每分钟催化生成1μmol产物所需的酶量D．在特定条件下，每分钟转化一个μmol底物所需的酶量20．乳酸脱氢酶是由两种亚基组成的四聚体，一般情况下共形成几种同工酶： A 2 种B 3种C 4种D 5种21．胆红素主要由下列何种物质分解代谢产生A 白蛋白B 球蛋白C 血红蛋白D 氨基酸22．肝中参与胆红素生物转化的主要物质是A 甘氨酰基B 乙酰基C 葡萄糖醛酸D 甲基23．结合胆红素是A 胆素原B 间接胆红素C 直接胆红素D 胆红素-Z蛋白24.血清标本溶血，对下列哪种检测指标影响最大 A 钾离子B 钠离子C 氯离子D 葡萄糖25.在正常情况下体液中细胞内液与细胞外液钾离子浓度分布是A 细胞外液大于细胞内液B 细胞外液等于细胞内液C 细胞内液大于细胞外液D 以上都不对26.既能增强神经肌肉兴奋性，又能降低心肌兴奋性的离子是： A 钙离子B 镁离子C 氢离子D 钾离子27．嗜铬细胞瘤患者血中下列那项指标升高：A TSHB 儿茶酚胺C 17-酮类固醇D 17-皮质类固醇28.下列哪一组属于急性时相反应蛋白 A．α1-酸性糖蛋白，结合珠蛋白，铜蓝蛋白，C反应蛋白B．转铁蛋白，血红素结合蛋白，甲胎蛋白，结合珠蛋白C．甲胎蛋白，铜蓝蛋白，C反应蛋白，血红素蛋白D．铜蓝蛋白，结合珠蛋白，转铁蛋白，血红素蛋白29.对LDL描叙正确的是 A．运输内源性胆固醇B．运输内源性甘油三酯C．运输外源性胆固醇D．运输外源性甘油三酯30.临床上用于诊断肝脏疾病的酶，下列那组检测最恰当 A．CK GGT ALP AMY B．ALT AST ALP GGTC．AMY LDH α-HBD GGTD．ACP AST CK LDH31.醋酸纤维素薄膜电泳可把血清蛋白分成五条带，由正极到负极的顺序是A. A、α1 、β、γ、α2B.A、β、α1 、α2、γC.A、α1 、α2、γ、βD.A、α1 、α2、β、γ32.唯一能降低血糖的激素是A. 胰岛素E.肾上腺素F.生长素G.甲状腺素33. 下列对血清蛋白质叙述错误的是 A．白蛋白/球蛋白比值为1.5～2.5∶1 B．白蛋白参考范围为35～50g/LC．总蛋白参考范围为60～80g/LD．白蛋白和球蛋白均由肝实质细胞合成34. 血气分析仪直接测定的三项指标是： A.pH、PCO2、TCO2 B.pH、PO2、SATO2 C.pH、PO2、PCO2 D.pH、SB、AB35.正常糖耐量的OGTT结果为 y：A.空腹血糖6～7mmol/L υ?傊鲲?B.口服葡萄糖30～60分钟达最高峰蒪氙C.葡萄糖峰值>10mmol/L 冾赞LQ?瀁D.2小时血糖水平在7～8mmol/L36.. 有关C-反应蛋白(CRP)错误的论述是：D A.是结合肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质稫愒 b?C.在急性创伤和感染时血浆浓度升高 ;座弆`瞰?D.在肝细胞内分解37. 反映肾小球滤过功能最可靠的指标是： A.血尿酸 B.血肌酐 C.尿肌酐 D.内生肌酐清除率38.阻塞性黄疸的特征是A.血结合胆红素增多,尿胆原增高B.血结合胆红素增多,尿胆红素阳性C.血未结合胆红素增多,尿胆原增高捩uヾ)D.血未结合胆红素增多,尿胆红素阳性39.gv以下有关酸碱平衡的说法哪项是不正确的 A.血液正常pH为7.35～7.45??B.血液pH<7.35为失代偿性酸中毒C.血液pH>7.45为失代偿性碱中毒 ? 杅禟3?D.仅从pH改变即可确定是代谢性还是呼吸性酸碱中毒40. 胰淀粉酶的活性改变可出现在下列哪种疾病：A.心肌病变 ?皞湡(4赣B.前列腺疾病 a/@.%驛縞?C.骨髓疾病嚛G)儂辺D.胰腺疾病41.Ⅱa型高脂蛋白血症l?j?FAAAAA.血清外观清,总胆固醇值明显升高,甘油三酯正常,脂蛋白电泳β脂蛋白深染B.血清外观混浊,总胆固醇值升高,甘油三酯升高,脂蛋白电泳前β脂蛋白深染攻yd( 1韋?C.血清外观上层有奶油盖、下层透明,总胆固醇值升高,甘油三酯正常,脂蛋白电泳CM深染潠皼u{：?D.血清外观上层有奶油盖、下层混浊,总胆固醇值升高,甘油三酯明显升高,脂蛋白电泳CM深染,前β脂蛋白拖尾 ?jg?pa痝42.&主要用于诊断急性心肌梗死A.CK-MB?B.AMY u?C.ASTm测定D.γ-GT测定? 43.血钙减低常见于：A.甲状旁腺功能亢进 e飸驝崰B. 急性坏死性胰腺炎C.Addison病€? 1沰W?D.慢性肺功能不全44. 代偿性代谢性酸中毒时： ?酰 4"X? A. PCO2↓,pH↓B. PCO2↓,pH不变C. PCO2↓,pH ↑螠馚D. PCO2↑,pH不变45. 下列哪种不是反映肝细胞损伤的酶A.ALTB. ASTC.ACPD. CHE46. 氧饱和度是指是：A.血中存在游离氧的量 9锝竟葧g?B.血液完全被氧气饱和时的氧含量C.血液与空气平衡后的氧气含量 m皫?D.血中氧含量与氧结合量之比值47. A/G倒置可见于：A.肝硬化B.胆结石症C.急性肝炎D.营养不良48. 高蛋白饮食不影响血清哪种物质的检测：A. 尿素B. 血糖C. 尿酸D. 血氨49.以下哪种物质对光敏感，测定时血标本应尽量避光：A. 总蛋白B. 胆红素C. 葡萄糖D. 甘油三酯50. 剧烈运动会使以下哪种指标浓度增高：A. 总蛋白B. 尿素C. 葡萄糖D. ALT51. 离子选择电极法临床常用于下列哪些物质的测定：A. AST ,ALTB. 肌酐，尿素C. 胆固醇，甘油三酯D K+，Na+，Cl-，HCO3-52. 火焰光度法时什么样的血标本会出现假性低血钠或低血钾：A. 高脂或高蛋白血B. 低脂或低蛋白血C. 高溶血D. 高黄疸血53. 利用以下哪种支持介质电泳具有电泳和分子筛双重作用：A. 琼脂糖凝胶B. 醋酸纤维素薄膜C. 聚丙烯酰胺凝胶D. 淀粉胶54. 以下哪种电泳的主要缺点是本底着色高及膜保存较困难：A. 琼脂糖凝胶电泳B. 醋酸纤维素薄膜电泳C. 聚丙烯酰胺凝胶电泳D. 淀粉胶电泳55. 血清蛋白电泳时通常用pH8.6缓冲液，此时各种蛋白质带有的电荷为：A. 白蛋白带正电荷，其他蛋白带负电荷B. 白蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷C. 白蛋白和其他蛋白均带负电荷D. 白蛋白和其他蛋白均带正电荷56.下列哪项不是自动生化分析仪特点：A. 快速、准确、节省试剂B. 提高了工作效率C. 减少了系统误差D. 减少了人为误差57.半自动生化分析仪所用试剂约为全自动生化分析仪的:A. 三分之一B. 一半C. 三倍D. 两倍58.自动生化分析仪自动清洗取样针是为了：A. 提高分析精密度B. 防止试剂干扰C. 防止样品间的交叉干扰D. 提高反应速度59.以NAD+还原成NADH反应为基础的生化分析采用的波长及吸光度变化为：A. 340nm，从小到大B. 400nm，从小到大C. 400nm，从大到小D. 340nm，从大到小60.反渗透水不能去除以下哪种物质：A. 悬浮物B. 微小离子C. CO2D. 微生物61.IFCC 推荐的酶活性浓度测定温度为：A. 38℃B. 20℃C. 37℃D. 25℃62.用双波长测定样品时，有关副波长不正确的是： A. 副波长能补偿发光灯每次闪动给结果造成的差异B. 样品在副波长处的吸光度应为“0”C. 副波长可有助于去除内源性色源D. 副波长应远离主波长63.自动生化分析仪测定时应尽可能减少试剂用量，一般情况下，样品体积占反应总体积的：A. 2%B. 5%C. 10%D. 20%64.多数免疫比浊法采用的校正方法是：A. 二点校正B. 多点校正C. 线性校正D. 单点校正65.如果样本对测定单色光有干扰吸收，为抵消这一影响应采用：A. 平行操作空白B. 样品空白C. 试剂空白D. 溶剂空白66.胆固醇测定试剂中的赋型胆酸盐对血清哪种物质测定有干扰，应设法防止交叉污染：A. 胆红素B. 总胆汁酸C. ALTD. 尿素67.有关干化学法不正确的是：A. 仪器操作不需纯净水B. 仪器校正一次可稳定半年C. 仪器操作需酸碱冲洗液等辅助设备D. 重复性好、快速二填空题１．调节血糖浓度最主要的激素是________和________。
【资料】酶活性测定的主要影响因素及控制要点汇编
1.5 副反应
副反应是指酶促反应体系中，除待测酶反应 外，其他非待测酶和物质引起的干扰待测酶 测定的反应。
NAD（P）H是目前使用最多的指示反应物质。
体内存在数以百计的氧化还原酶，它们的辅酶 很多是一致的。
若存在内源性代谢物，必然会相互干扰。
1.5 副反应(酶偶联法测ALT)
由于反应体系中含有大量NADH和LD，可与血 液标本中所含丙酮酸反应，引起340nm波长处 吸光度下降，从而引起ALT活性测定误差。
费时间是最经济的方法。
1.6 酶蛋白浓度
酶蛋白在低浓度时易失活，可能是亚基易 解离、易吸附于容器上和易发生表面变性 之故。
酶蛋白在高浓度时较稳定，但活性过高超 过检测仪器的线性范围时，需将样品进行 稀释或减少样品用量后再行测定。
样品稀释后所测得的活性常偏高，可能与 抑制剂被稀释有关。
1.7 其他
室温（25℃） 1周 2d 2d 2d 3d 1周 1周 2～3d 4h※ 24h 1月 1周
冷藏（0～4℃） 冰冻（-25℃）
1～3d§
1～3d§
1周
1月
2d
不稳定*
5d
不稳定*
1周
1月
1周
1月
1周
1周
2～3d
1月
3d#
3d#
1周
3月
7月
2月
3周
3周
*酶不耐融化；§与同工酶类型有关；※标本未酸化；#标本加枸橼酸或醋酸至pH 5
2. 试剂及方法学的影响因素
酶的测定大多使用商品试剂盒
不同厂家酶试剂盒的测定原理、试剂配方（包 括缓冲液、底物、添加剂等）、产品质量、技 术含量等常有区别。
常见的影响因素
2.1 定时法与连续监测法 2.2 检测底物或检测产物 2.3 底物启动模式与样品启动模式 2.4 正向反应与逆向反应 2.5 试剂的干扰作用
酶活性测定的主要影响因素及控制.ppt
K V 10 6
v L
3.4 K的校准（酶校准物）
使用公认的酶校准物对K值进行校准，它是 国际上目前酶测定标准化新途径。
使用酶校准物的优点， 除具有实测ε值换算出的校准K值所具有的 一切优点外， 还可促进方法间的一致性和增加常规酶方 法的可靠性，可使不同实验室之间的测定 结果相对统一。
只是在延滞期去除部分干扰物。 这种模式可采用单一试剂剂型。
2.3 底物启动模式与样品启动模式
双试剂与单试剂酶促反应时间进程曲线
2.3 需要注意
某些双试剂剂型是基于试剂稳定性考虑， 并没有将底物单独作为第二试剂，也起不 到消除内源性干扰的作用。
2.4 正向反应与逆向反应
一般根据测定底物或产物的难易程度来决定。 除原则上选择对底物亲和力大，酶转换率高的
检测系统
光度计的准确性、重复性、线性范围和杂散光等 均会造成结果的偏差。
3 仪器影响因素的控制
在日常工作中，除常规做好仪器和设备的 正确使用和维护外，
重点应注意仪器的校准问题。
3.1 酶活性浓度的计算公式
U / L A K min
K V 10 6
vL
摩尔吸光系数 和系数 K 均为常数， 和 K受仪器诸多因素的影响，
反应时底物浓度高，反应时间短； 这也是淀粉酶的碘淀粉比色法逐渐被色素源底物
所取代的原因之一。 除部分测定NADH减少可以看成测底物的消耗量外，
已很少采用测定底物消耗量的项目。
2.2 检测底物或检测产物的选择
底物与产物
举例
ALT测定（赖氏法-定时法） L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 A LT α-丙酮酸 + L-谷氨酸
唾液淀粉酶酶活性的影响因素及测定方法综述
唾液淀粉酶酶活性的影响因素及测定方法综述摘要：唾液淀粉酶是唾液蛋白的重要组成部分，并且唾液淀粉酶的活性是反映自主神经系统最为灵敏的指标，有理想的应用研究价值。
本文总结介绍了影响唾液淀粉酶的常见因素，以及五种唾液淀粉酶活性的测定方法，对于临床实验以及后续研究提供一定参考。
关键词：唾液淀粉酶，酶活性影响因素，淀粉酶活性测定一、引言生物酶几乎参与了生物体内所有的生物化学反应，并且酶是生命运动、细胞活动中的不可缺少的一部分。
它是一种具有生物催化活性的生物大分子[1]。
唾液淀粉酶（salivary alpha-amylase,sAA）是唾液蛋白的重要组成部分，约占唾液总蛋白的40% ~ 50%[2]，常用作唾液蛋白分泌的主要指标。
交感神经系统与副交感神经系统协调作用于唾液蛋白的分泌[3]，而唾液淀粉酶活性是交感神经最灵敏的指标。
随着技术发展，唾液淀粉酶的活性测定的准确度及可靠性日渐增加，且常被运用于中医脾虚证的临床辩证、治疗等方面[4]。
而唾液淀粉酶作为一种生物催化剂，具有专一性和高效性的同时，它相较于常见的化学催化剂更易受外界环境影响，导致其活性下降，甚至失活，为临床研究造成困扰。
本文就对常见的影响唾液淀粉酶活性的因素与其活性测定方法的相关资料进行了收集与整理，便于进行实验验证与探究。
二、影响唾液淀粉酶活性的因素（1）温度大多数生物酶的化学本质都为蛋白质，其抗热性较差。
在0℃~40℃的温度范围内，酶催化作用速度随着温度的升高而加快。
温度超过60℃时，绝大多数的酶都会失去活性。
唾液淀粉酶的最适温度约为37℃。
（2）pH值酶对环境中的pH十分敏感，只有在一定的pH范围内才能表现出活性，超过这个范围，酶就失活了。
一般酶的最适pH在4~8之间。
唾液淀粉酶的最适pH值约为6.8。
（3）AMY1基因拷贝数及多态性唾液淀粉酶的编码基因AMY1位于染色体1p21上，不同个体之间该基因的拷贝数存在差异，变化范围为2至15倍，研究显示口腔中的唾液淀粉酶含量与AMY1基因拷贝数正相关[5]。
实验报告影响酶活性的因素
实验报告影响酶活性的因素实验报告-不同因素对酶的影响实验报告课程名称：生物化学实验（甲）指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）三、主要仪器设备（必填）五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1. 了解酶的专一性。
2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。
3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。
二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。
酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。
酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。
根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。
2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。
如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。
如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。
3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。
如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。
本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。
采用Benedict 试剂检测反应产物。
Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。
Na2CO3+ 2H2O2NaOH + H2CO3 CuSO4+2+ Na2SO4 还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O(砖红色或黄色) + 2H2与Benedict试剂无呈色反应。
酶活性浓度测定的主要影响因素及控制
酶活性浓度测定的主要影响因素及控制影响酶促反应的因素主要有酶浓度、底物浓度、温度、pH及离子强度、电解质、辅酶、激活剂及抑制剂等。
（一）酶浓度在底物浓度远大于酶浓度时，酶促反应速率随酶浓度的增加而增加，即反应速率与酶的浓度成正比。
酶浓度特别高的标本，底物将过快且过多地消耗，影响酶活性测定，故需进行适当稀释，但要注意稀释产生的基质效应影响。
（二）反应系统温度的影响温度对酶促反应影响有两重性。
一方面，按照一般催化反应规律，温度升高可促进分子热运动，增加碰撞机会，提高酶促反应速率；另一方面，温度过高可因酶蛋白变性反而使酶反应速率下降。
多数酶在60℃时开始变性，80℃时已不可逆变性。
酶反应速率最大时的反应系统温度称为酶反应的最适温度（optimumtemperature）。
低于最适温度时，温度每升高10℃反应速率可增加1.7～2.5倍。
当高于最适温度时，反应速率则可能因酶变性失活反降低。
测定酶活性的温度长期未统一，学术团体推荐主要有3种：①德国临床生化学会（GSCC）推荐25℃；②国际临床化学联合会（IFCC）推荐30℃；③斯堪地那维亚临床生化学会（SSCC）推荐37℃。
我国推荐温度为37℃，现IFCC也改为推荐37℃。
测定酶活性时，温度的误差不能大于±0.1℃，以保证测定结果的准确性。
不同温度测定酶活性结果之间，不推荐使用酶的温度校正系数转换。
因此，不同反应温度测定酶活性应有相应参考区间，不能混用。
（三）底物的种类和浓度底物专一性不强的酶，可作用于多种底物，测定酶活性时，应优先考虑有较高诊断价值的底物。
底物专一性强的酶，如其所催化的为可逆反应，则需要从测定技术和实用方面考虑选择测定正向或负向反应。
在米氏方程中，当底物浓度［S］≫Km时，Km可忽略不计，则v=Vmax=K2［E］，即反应速率与底物浓度无关，仅和酶浓度［E］成正比，此为零级反应（图28-1中的c段）。
因此，临床测定酶活性时，一般均给予充分的底物浓度，最好为Km的10～20倍，保证反应速率与酶浓度［E］成正比，以准确测定酶活性。
酶活力的测定
4. 抑制剂和激活剂
抑制剂和激活剂是影 响酶活力的其他因素 。抑制剂会抑制酶的 活性，而激活剂则会 增强酶的活性。在测 定酶活力时，需要排 除抑制剂和激活剂的 影响，并进行适当的 样品处理和数据处理 以确保实验结果的准 确性
酶活力的测定
酶活力的测定
三、实验步骤与操作要点
酶活力测定的实验步骤包括样品准备、反应体系配制、温度控制、时间记录、产物或底物 浓度测定等。在操作过程中需要注意以下几点
酶活力是指酶催化特定化学反应的能力， 通常以单位时间内转换底物的摩尔数来 表示
通过测定酶活力，可以了解酶的性质、 作用机制以及底物特异性等方面的信息一、酶活力测 定的基本原理
酶活力测定的基本原 理是利用酶催化的化 学反应速率与酶浓度 成正比的性质，通过 测定反应速率来推算 酶的浓度和活力。常 用的方法有终点法、 动力学法和连续监测 法
酶活力测定结果受到多种因素 的影响，包括温度、pH值、底 物浓度、抑制剂和激活剂等。 为了获得准确的测定结果，需 要严格控制实验条件，并进行 适当的样品处理和数据处理
酶活力的测定
1. 温度
温度是影响酶活力的 重要因素之一。大多 数酶在一定的温度范 围内具有最佳活性， 温度过高或过低都会 影响酶的活性。因此 ，在测定酶活力时， 需要选择适当的温度 ，并进行温度控制以 确保实验结果的准确 性
酶活力的测定
四、时间记录
时间记录是酶活力测定的关键步骤之一。在酶促反应过程中，需要准确记录反应时间，以 便计算反应速率和产物生成量。在时间记录过程中，需要注意控制反应时间，避免过长或 过短的反应时间对实验结果的影响
酶活力的测定
五、产物或底物浓 度测定
产物或底物浓度的测定是酶活力 测定的关键步骤之一。通过测定 产物或底物的浓度，可以计算出 酶的活性。在浓度测定过程中， 需要注意选择适当的测定方法， 并进行准确的浓度计算。常用的 浓度测定方法有分光光度法、色 谱法等
2017年临床检验技师考试生化检验第五章重要考点(1)
2017年临床检验技师考试生化检验第五章重要考点（1）诊断酶学本章考点：1.血清酶(1)分类、生理变异与病理生理机制(2)酶活性与酶质量测定方法及其评价(3)同工酶及其亚型测定的临床意义2.血清酶活性检测技术(1)酶活性概念和表示方法(2)酶活性测定方法分类、原理、优缺点及应用(3)影响酶作用的因素(4)工具酶的概念、代谢物测定中常用的指示反应3.常用血清酶及同工酶测定的参考值及临床意义(1)肌酸激酶及同工酶和其亚型(2)乳酸脱氢酶及同工酶(3)氨基转移酶及同工酶(4)碱性磷酸酶及同工酶(5)谷氨酰基转移酶及同工酶(6)淀粉酶及同工酶(7)酸性磷酸酶及同工酶4.代谢物酶法测定第一节血清酶一、血清酶的分类根据酶的来源及其在血清中发挥催化功能的情况，可将血清酶分为两大类。
(一)血浆特异酶在血浆中发挥特定催化作用的酶。
如凝血酶、胆碱酯酶(CHE)、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶等。
它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚至超过器官细胞内浓度。
有的可以作为肝功能试验的一部分。
血浆特异酶活性的改变，除了反映血液功能外，还反映来源器官的功能。
(有少部分酶在细胞合成后分泌到血液中行使其功能，如凝血因子及有关的纤溶因子。
它们以酶原状态分泌人血，在一定的条件下被激活，引起相应的生理或病理变化。
)(二)非血浆特异酶在血浆中浓度很低，且无功能，分为两种。
1.分泌酶：来源于消化腺或其他外分泌腺的酶。
如α-淀粉酶(AMY)、前列腺酸性磷酸酶(ACP)、脂肪酶(LPS)、胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、ALP等。
正常体液中外分泌酶活性低而稳定，不发生催化作用。
在血液中的浓度和其分泌腺体的功能活动和疾病有关，来源增加或排泄受阻时，血浆中此类酶活性增高。
例如，急性胰腺炎时，血淀粉酶就会升高。
2.代谢酶：(细胞酶)在细胞内发挥催化功能的酶。
正常时这些酶存在于组织细胞中，血浆中酶活性很低。
细胞内、外浓度差异悬殊。
当酶来源的组织细胞发生病变，细胞膜通透性增加或细胞坏死时，细胞内酶大量进入血浆，导致血浆酶活性显著增高。
临床生物化学检验技术试题及答案
临床生物化学检验技术试题及答案一、名词解释1.临床检验生物化学(Clinical Biochemistry)2.组合试验(profile tests)二、问答题1.试述临床检验生物化学的研究领域。
2.试述临床检验生物化学在医学中的地位及应用。
3.简述临床检验生物化学的进展及发展趋势。
第一章绪论答案一、名词解释1. 临床检验生物化学(Clinical Biochemistry): 临床检验生物化学是在人体正常生物化学基础上，研究病理状态下生物化学改变，寻找这些改变的特征性标志并建立可靠实用检测方法，通过对这些特征性标志物的检测，为健康评估、疾病预防、诊断、治疗、病情和预后判断等提供生物化学信息和决策依据的一门学科。
2. 组合试验(profile tests): 在循证检验医学基础上，将某些疾病或器官系统功能的有关检验项目，进行科学合理的组合，以便获取更全面完整的病理生物化学信息的方法。
如了解肝脏功能的组合试验。
二、问答题1. 试述临床检验生物化学的研究领域。
临床检验生物化学的学科领域主要包括以下三方面： 1. 揭示有关疾病的病理生物化学改变，从本质上阐明疾病发生、发展、转归的生物化学机制，为疾病的预防、诊断、疗效及预后评估，提供理论基础。
2. 在上述研究基础上，寻找具有疾病特异性的生物化学标志物，并建立特异度、灵敏度高，简便而高性价比的检测方法，从而在临床开展有关项目的检测，提供反映这些标志物改变的客观数据。
3. 将检测项目的数据，转化为预防、诊断和疗效及预后评价信息。
2. 试述临床检验生物化学在医学中的地位及应用。
在医学中，临床生物化学是阐明疾病发生、发展及转归的分子机制，从本质上认识病变准确部位及具体环节，为寻找有效的预防和治疗靶点，疾病的诊断及病情和预后判断，提供理论基础的一门重要病理学学科。
其在医学中的应用主要包括：1. 揭示疾病发生的分子机制。
2.通过对有关疾病生物化学改变的特征性生物标志检测方法的建立和实施，为判断有无及何种疾病提供客观依据。
探究影响酶活性的因素
1．探究温度对酶活性的影响(1)实验原理①反应原理：②鉴定原理：温度影响酶的活性，从而影响淀粉水解，滴加碘液，根据是否出现蓝色及蓝色的深浅来判断酶的活性。
(2)实验步骤取试管分组编号(1、2、3号)→加入等量可溶性淀粉溶液→分别控制温度(60 ℃、沸水、冰块)5 min →加等量淀粉酶溶液5 min →加等量碘液→观察溶液颜色。
[思考] ①在上述实验操作中先加入等量淀粉酶再分别控制温度可行吗？为什么？提示：不可行。
因为酶具有高效性，先加入酶液后，酶在常温下就可以发挥催化作用，影响实验结果。
②上述实验的实验结果是什么？提示：1号试管溶液(60 ℃)不变蓝色，2号、3号试管溶液变蓝色。
(3)实验结论：温度影响酶的活性。
2．探究pH 对酶活性的影响(1)实验原理 ①反应原理：H 2O 2――→过氧化氢酶2H 2O ＋O 2(反应式)。
影响酶的活性，从而影响氧气的生成量，可用带火星的卫生香燃烧的情况来检验O 2产生量的多少。
(2)实验步骤取试管分组编号(1、2、3)→分别注入等量过氧化氢酶溶液→调节pH(分别加入等量的蒸馏水、5%的盐酸、5%的NaOH 溶液)→分别注入等量的3%的H 2O 2溶液→观察气泡产生→带火星的卫生香检验。
[思考] ①上述实验步骤中，调节pH 和注入等量3%的H 2O 2溶液能否调换？说明理由。
提示：不能调换。
酶与底物一接触，就会发生催化作用，使H 2O 2分解，影响实验结果。
②本实验观察到的实验现象是什么？提示：(3)实验结论：pH 能影响酶的活性。
角度一 以实验分析的形式，考查影响酶活性的因素1．(2013·江苏高考稍改动)为了探究温度、pH 对酶活性的影响，下列实验设计合理的是解析：选B过氧化氢受热易分解，不宜用过氧化氢酶探究温度对酶活性的影响，实验①不合理；蔗糖酶不能催化淀粉水解，实验③不合理；斐林试剂呈碱性，能与酸性物质发生反应，不适合用于探究pH对酶活性的影响，实验④不合理。
影响酶活力的因素
1
酶作用曲线
绘制曲线图（折线图）的基本常规：
■标题（以明确图的内容）； 【格式：自变量与因变量之间的关系】 ■坐标轴：【直尺画】 ●恰当的变量名称和单位： 通常，X轴表示自变量（如处理），Y轴表示因变量。 【测定的数值很大或很小时，用10的乘方表示】 【★读图时，首先是了解轴的含义】 ●每条轴要有刻度和数值参照标记。 【轴有时不一定从0刻度开始】 【取值范围必须包含所有数据】 ■绘点连线（至少需要5个点；不可以随意延伸） 一幅图中有几条曲线时，要在右上角表示出图例。 2
3.底物浓度——反应速度
反 应 速 率
B · · A
· C
底物浓度 描述曲线特征： （当酶浓度、温度和pH恒定时）在底物浓度很低的范围 内，反应速度与底物浓度成正比；继续增加底物浓度， 反应速度增加转慢；达到最大后保持不变。
O
解释：酶数量一定时，底物浓度越大，形成的酶—底物 复合物越多；达到一定程度后，有限的酶全部与底物 结合而达到饱和。 BC段有限的酶被饱和，反应速度达到最大，再增加 底物浓度，底物浓度并不影响酶的活性。 11
酶活性易受多种因素制约，常用坐标图来表示. 在解读坐标图题型时，要注意以下要点： ●看坐标轴含义——了解两个变量的关系 ●看曲线走势——掌握变量的增减快慢特征与 意义 ●看特殊点——理解特殊点的意义 （起止点、拐点、交叉点） ●看不同曲线的异同——理解曲线之间的内在 联系与区别
3
反应速度的测定：
●青霉素为何能够阻止细菌的繁殖？青霉素为何对一般的人无 害？但人又为何不能滥用抗生素？ 【阻止细菌繁殖的原因】： 抑制细菌形成细胞壁的酶，即：是细胞壁合成酶的抑制剂。 【无害的原因】： 人没有合成细胞壁的酶。但青霉素对某些人来说是过敏原。 【不能滥用】： ①青霉素会杀死肠道中对人体有益的细菌，降低免疫力和 维生素的供应； ②增加了对病原菌的选择压力，加速了耐药性进化。 ●为何用含青霉素的选择培养基能筛选出酵母菌和霉菌等？ 青霉素是细菌细胞壁合成酶的不可逆抑制剂。真菌的细胞壁与 细菌细胞壁的化学成分不同，合成细胞壁有关的酶也不同。青 霉素对酵母菌和霉菌中合成细胞壁的酶不起作用。 ●不可逆抑制剂如很多毒气和有机磷农药能对乙酰胆碱酯酶产 生不可能抑制作用，一旦被抑制，肌肉受到连续刺激将处于永 21 久收缩状态。
酶活性浓度的测定技术
按监测方法分类可分为量气法、分光光度
法、荧光法和放射性核素法、电极法和其 他方法。
以分光光度法最为常用。
1．量气法 测定原理是通过测量一封闭反应系统中 气体变化后的气体体积或压力，从而计算出气体
的变化量。适用于测定那些在反应中产生或消耗
气体的酶，如氧化酶反应涉及氧气的消耗，脱羧
酶会产生二氧化碳等。
（一）连续监测法的种类
1．直接法 这类方法是在不终止酶促反应条 件下，直接通过测定反应体系中底物或产 物理化特性的变化如吸光度、荧光、旋光 性、pH、电导率、粘度等，从而计算出酶 活性浓度。
其中以分光光度法应用最为广泛，也是方法学上
最成熟的一种。利用NAD(P)H在340nm处的吸光
度的变化测定各种脱氢酶的方法是应用最广的一 类方法。NAD(P)H在260nm波长和340nm波长处 有吸收峰，而氧化型NAD＋／NADP＋只在260nm 波长处有吸收峰，这是因为分子中有腺嘌呤的缘
故。340nm波长处吸光度的变化可以反映
反应体系中NAD(P)H量的增减。
A+NAD(P)＋
脱用一类人工合成的所谓“色素原”
底物，其本身为无色或微黄色，酶作用后 生成有色化合物，如目前应用硝基苯酚和 硝基苯胺的衍生物进行水解酶和一些还原 酶的测定。
A 酶促反应 B 显色反应 C
结合各种工具酶的偶联反应，如应用NAD(P)H和
NAD(P)＋吸收光谱差异建立的测定各种脱氢酶活
性浓度的方法，使分光光度法得到了进一步发展， 几乎可应用于各种血清酶活性的测定。随着各种 自动生物化学仪和配套用试剂盒的普及应用，这 一方法在临床酶学测定中起着十分重要的作用。
3．荧光法和放射性核素法 对于一些酶浓度 很低的标本，用普通的分光光度法往往测 不出来，此时可考虑改用灵敏度较高的荧 光法或放射性核素法。
酶活性大学实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解酶的催化作用原理。
2. 掌握测定酶活性的方法。
3. 探究温度、pH值、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂等因素对酶活性的影响。
二、实验原理酶是一种具有催化功能的蛋白质，能够加速化学反应的速率。
酶的活性受到多种因素的影响，如温度、pH值、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂等。
本实验通过测定酶催化特定反应的速率，分析不同因素对酶活性的影响。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：试管、烧杯、量筒、胶头滴管、恒温水浴锅、秒表、pH计、温度计、冰箱、显微镜等。
2. 试剂：淀粉酶、淀粉溶液、碘液、氢氧化钠、盐酸、葡萄糖标准液、葡萄糖氧化酶、磷酸盐缓冲液、硫酸铜、氯化钠等。
四、实验步骤1. 温度对酶活性的影响（1）分别配制不同温度（如0℃、20℃、40℃、60℃、80℃）的淀粉酶溶液。
（2）取等量淀粉溶液，分别加入上述不同温度的淀粉酶溶液，混匀。
（3）观察淀粉溶液在酶作用下的颜色变化，记录所需时间。
2. pH值对酶活性的影响（1）分别配制不同pH值（如2、4、6、8、10）的淀粉酶溶液。
（2）取等量淀粉溶液，分别加入上述不同pH值的淀粉酶溶液，混匀。
（3）观察淀粉溶液在酶作用下的颜色变化，记录所需时间。
3. 底物浓度对酶活性的影响（1）配制不同浓度的淀粉溶液。
（2）取等量淀粉酶溶液，分别加入上述不同浓度的淀粉溶液，混匀。
（3）观察淀粉溶液在酶作用下的颜色变化，记录所需时间。
4. 酶浓度对酶活性的影响（1）配制不同浓度的淀粉酶溶液。
（2）取等量淀粉溶液，分别加入上述不同浓度的淀粉酶溶液，混匀。
（3）观察淀粉溶液在酶作用下的颜色变化，记录所需时间。
5. 抑制剂和激活剂对酶活性的影响（1）分别配制含有不同抑制剂（如硫酸铜、氯化钠）和激活剂（如氢氧化钠、盐酸）的淀粉酶溶液。
（2）取等量淀粉溶液，分别加入上述不同抑制剂和激活剂的淀粉酶溶液，混匀。
（3）观察淀粉溶液在酶作用下的颜色变化，记录所需时间。
第8讲 影响酶活性的因素
pH为9
④7 ＋
70
58
D.尚需补充实验才能确定该酶是否能水 ⑤ 5 ＋
40
30
解其他反应物
注：＋/－分别表示有/无添加，
反应物为Ⅰ型胶原蛋白。
解析：分析②③组可知，没有添加CaCl2，降解率为0，说明该酶的催化活性依赖于 CaCl2，A正确；分析①②变量可知，pH均为9，都添加了CaCl2，温度分别为90 ℃、 70 ℃，故自变量为温度，B正确；②组酶的活性最高，此时pH为9，温度为70 ℃， 但由于分组较少，不能说明最适温度为70 ℃，最适pH为9，C错误；该实验的反应 物为Ⅰ型胶原蛋白，要确定该酶能否水解其他反应物还需补充实验，D正确。
（1）实验设计思路 取 2 支试管（每支试管代表一个组），各加入等量的酶A溶液，再分别加等 量甲物质溶液、乙物质溶液 ，一段时间后，测定各试管中酶的活性。然后将各 试管中的溶液分别装入透析袋，放入蒸馏水中进行透析处理。透析后从透析袋中取 出酶液，再测定各自的酶活性。
（2）实验预期结果与结论 若出现结果①： 透析后，两组的酶活性均比透析前酶的活性高 。 结论①：甲、乙均为可逆抑制剂。 若出现结果②： 透析前后，两组的酶活性均不变 。 结论②：甲、乙均为不可逆抑制剂。 若出现结果③： 加甲物质溶液组，透析后酶活性比透析前高；加乙物质溶液组， 透析前后酶活性不变 。
1 mL （5 min）
1滴
1 mL （5 min）
1滴
不出现蓝色 蓝色
①
②
③
（4）实验结论：温度 过高、过低 都会影响酶的活性， 的活性高。
适宜
温度下酶
2.探究pH对酶活性的影响 （1）实验原理
过氧化氢酶 2H2O2
2H2O＋O2↑。
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1.5 副反应
副反应是指酶促反应体系中，除待测酶反应 外，其他非待测酶和物质引起的干扰待测酶 测定的反应。 NAD（P）H是目前使用最多的指示反应物质。
体内存在数以百计的氧化还原酶，它们的辅酶 很多是一致的。 若存在内源性代谢物，必然会相互干扰。
1.5 副反应(酶偶联法测ALT)
由于反应体系中含有大量NADH和LD，可与血 液标本中所含丙酮酸反应，引起340nm波长处 吸光度下降，从而引起ALT活性测定误差。 ALT活性测定的反应式如下：
溶血 抗凝剂 温度 空气与光线 标本副反应 酶蛋白浓度 其他
1.1 溶血
最重要的影响是RBC内酶的大量释出。
大部分酶在细胞内外浓度差异明显，且其活性 远高于血清； 如RBC内的LD、AST和ALT活性分别较血清中高 100、15和7倍左右。
RBC释放的Hb在300～500nm可见光波段能 使吸光度值明显升高，干扰分光光度计的 测定。
1.6 酶蛋白浓度
酶蛋白在低浓度时易失活，可能是亚基易 解离、易吸附于容器上和易发生表面变性 之故。 酶蛋白在高浓度时较稳定，但活性过高超 过检测仪器的线性范围时，需将样品进行 稀释或减少样品用量后再行测定。 样品稀释后所测得的活性常偏高，可能与 抑制剂被稀释有关。
1.7 其他
样本器皿的质地和洁净度，采血部位，以 及血清中过量的胆红素、脂质，样品制备 过程中的振摇等，均可引起酶活性改变。 季节
ALT L 丙氨酸 2 氧代戊二酸 L 谷氨酸 L 丙酮酸
L 丙酮酸 NADH H LD L 乳酸 NAD
1.5 副反应的控制
可通过加入副反应抑制剂， 或对样品进行预处理等方法给予排除。 双试剂底物启动模式因不增加成本、不耗 费时间是最经济的方法。
1.1 注意: RBC中酶的干扰
不仅表现在溶血影响上，采血后如不及时 将血清和血凝块分离，血细胞中酶同样可 以透过细胞膜进入血清， 所以，静脉采血后，必须在1～2h内及时 离心，将血清与血细胞、血凝块分离，以 免引起误差。
1.2 抗凝酶，一 般都应以血清作为首选测定标本。 大多数抗凝剂都在一定程度上影响酶活性，
ALD
ALT AST CK ChE ALP ACP 5’-NT AMY LPS
2d
2d 3d 1周 1周 2～3d 4h※ 24h 1月 1周
2d
5d 1周 1周 1周 2～3d 3d# 1周 7月 3周
不稳定*
不稳定* 1月 1月 1周 1月 3d# 3月 2月 3周
*酶不耐融化；§与同工酶类型有关；※标本未酸化；#标本加枸橼酸或醋酸至pH 5
酶的概念
酶活性浓度测定的主要影响因 素
1.
标本及标本采集和处理因素 2. 试剂及方法学因素 3. 仪器因素的影响 4. 测定条件与参数设置
1.标本及标本采集和处理因素 的影响及控制
1.标本及采集和处理的影响因素
1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7
酶活性浓度测定的 主要影响因素及控制
广州医学院医学检验系 临床生化教研室
酶（enzyme）
酶的应用
临床诊断酶学产生至今已有100年的历史。 用于诊断的酶类已超过100多种，常用的数十种。 酶测定约占目前临床化学总工作量的1/4到1/2。 是一种由活细胞产生，具有高度专一性、高度催化活性的特 殊蛋白质，又称为生物催化剂。 酶的测定方法分为绝对定量法和相对定量法两大类，以后者 为主。 酶催化化学反应的能力称为酶活性（activity）。 酶活性浓度的测定受许多因素的影响。
EDTA、草酸盐和柠檬酸盐等抗凝剂，它们为金属 离子螯合剂； 在去除Ca2+同时也去除其中Mg2+、Mn2+等离子， Ca2+是AMY的激活剂，Mg2+是ALP、CK和5′-核苷 酸酶（5′-NA）的激活剂。
1.2 肝素
是一种粘多糖， 是对酶活性影响最小的抗凝剂， 对ALT、AST、CK、LD和ACP无影响， 适于急诊时迅速分离血浆进行测定。
冬季气温低，血液凝固慢，血清分离时间延长， 可引起血细胞内酶释至血清，加上血清与空气 长时间接触，可使某些抑制剂遭到破坏，故冬 季测定LD的活性较夏季高。
2. 试剂及方法学因素 的影响及控制
2. 试剂及方法学的影响因素
酶的测定大多使用商品试剂盒
不同厂家酶试剂盒的测定原理、试剂配方（包 括缓冲液、底物、添加剂等）、产品质量、技 术含量等常有区别。 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 定时法与连续监测法 检测底物或检测产物 底物启动模式与样品启动模式 正向反应与逆向反应 试剂的干扰作用
1.3 温度
由于血清清蛋白对酶蛋白有稳定作用，如 无细菌污染，某些酶（如AST、-GT和ALP 等）可在室温保存1～3天活性不受影响。 有些酶极不稳定，如血清前列腺ACP，在 37℃放置1h，活性可下降50%。
1.3 贮存不同室温体液酶的稳定性 （活性变化小于10%）
酶 LD -GT 室温（25℃） 1周 2d 1周 冷藏（0～4℃） 1～3d§ 冰冻（-25℃） 1～3d§ 1月
1.1 Hb的吸光度曲线
1.1 溶血影响的控制
减少溶血
体外溶血可通过实施样品制备技术的标准化加 以克服； 分清体内溶血与体外溶血。 可通过设置样品对照，或使用双波长比色、连 续监测法以及改进商品试剂等措施，克服对分 光光度分析的影响。 应用血清(溶血)指数直接判断溶血程度。
减少溶血的干扰
1.3 温度影响的控制
及时检测 低温贮存
大部分酶在低温中比较稳定，因此当天不能测 定时，应在血清分离后置冰箱中冷藏。
1.4 空气与光线
血清置于空气中时， 血中CO2丧失极快，pH可在15min内由 7.4增至8.0，从而使对碱性环境敏感 的ACP活性迅速下降。 某些酶易受光线破坏， CK可因吸收蓝光而引起酶发生不可逆 地失活，其失活程度与暴光时间的长 短成正比。