木质素酶活测定方法
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115木质素酶活测定方法
仪器: 多功能紫外可见光分光光度计(CE M u lt imode compu t ing UV Spect rophotometer (6 000 Series) )。1 m l 比色皿。反应试剂: 按测定反应液体总量1m L, 酶粗液样用量100～200 Ll; 反应缓冲溶液为pH 2.75 磷酸二氢钾缓冲溶液; 藜芦醇: 按缓冲溶液的5% (V öV ) 加入到20 mM 藜芦醇溶液中。使用20 Ll 20mM H2O 2 溶液启动反应, 于310 mM 测吸光率的变化。按吸光率计算藜芦醛产量。酶活单位定义: 每分钟氧化生成1 Lmo l 藜芦醛所需的酶量。
1. 2. 5 木质素降解酶类活性测定
1. 2. 5. 1 漆酶(愈创木酚法,朱显峰改良) 10 mL反应体系中,含50 mmol ·L - 1琥珀酸钠缓冲溶液(pH 值4. 5) ,0. 4 mmol·L - 1的愈创木酚和0. 5 mL的酶液,30 ℃条件下反应30 min 后,于465 nm 处测OD 值. 酶活力定义为:以灭活的酶液反应混合物做对照,1 min 内催化氧化1 nmoL 愈创木酚的酶量为1 U[6 ] .
1. 2. 5. 2 木质素过氧化物酶(藜芦醇法) 藜芦醇2 mmol ·L - 1 ,酒石酸缓冲液50 mmol ·L - 1 (pH 值2. 5) ,0. 4 mmol·L - 1的H2O2 ,室温条件下测定,于310 nm 紫外光处测OD 值. 酶活力定义为: 每min合成1μmol 藜芦醛所需的酶量为1U[5 ,9 ] .
1. 2. 5. 3 锰依赖过氧化物酶反应体系中含50mmol·L - 1的乳酸钠缓冲液(pH 值4. 5) 3. 4 mL ,1. 6mmol·L - 1的硫酸锰溶液0. 1 mL ,1. 6 mmol 的H2O2 0. 1 mL 启动反应. 室温条件下测240 nm 紫外光处反应4 min 时OD 改变值. 酶活力定义为:每min 使1μmol ·L - 1 Mn2 + 转化为Mn3 + 所需的酶量为1U[4 ,8 ] .