牛奶中酪蛋白和乳糖的分离

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离

、原理

牛奶是一种乳状液，主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖等组成。牛奶蛋白分为四种： B -乳球蛋白、丫 -乳清蛋白、乳清蛋白和酪蛋白。其中酪蛋白对牛奶蛋白的贡献最大， 占了 80%含有10%的磷，对促进大脑发育起至关重要的作用； 乳清蛋白分子比较 小，相对酪蛋白更加易消化；而乳球蛋白多是牛奶中的生物活性物质，如免疫球蛋 白、乳铁蛋白、溶菌酶 等。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混 合物。蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH 达到酪蛋白的等电点(pH = 4. 8)时, 蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出 来,以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚 ,可用此两种溶剂除去酪蛋白中的 脂肪。

乳糖是一种二糖,由一分子B -D-半乳糖的半缩醛羟基与另一分子葡萄糖 C4k 的 醇性羟基缩去一分子水通过B -1 , 4糖苷键结合而成。乳糖也不溶于乙醇,当乙醇混 入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。

orD-葡萄糖

H 0H

CHOH tt-D- ( + )-葡萄糖(占36%) H H H

CH20H CH20H

HOH

p-D-半乳糖残基D-葡萄糖残基

、实验材料和试剂

脱脂乳或脱脂奶粉

醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH=4.7）, 95聽醇，乙醚，碳酸钙粉末，苯肼试剂。

三、实验步骤

1.从牛奶中分离酪蛋白

在烧杯中加入2g脱脂奶粉，再加入40ml40C, PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液

40ml，用PH精密试纸检验液体的PH fi（使牛奶pH = 4. 8 ），放置冷却、澄清后，用

尼龙布过滤酪蛋白。（在滤液中加入少量粉状碳酸钙，留作乳糖的分离。）依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白，去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算牛奶中酪蛋白的含量。

2.从牛奶中分离乳糖

在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5g CaCO3粉末，搅拌均匀后加热至沸。加CaCO的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另方面又能使乳白蛋白沉淀。过滤除去沉淀，在滤液中加入1〜2粒沸石，加热浓缩至3〜5ml，加入10ml 95% 乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清。加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%L醇洗涤产品。

3.乳糖成脎试验

取自制乳糖溶于少量水中，浓度约为5%在试管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼试剂①，摇匀，试管口用棉花塞住，在沸水浴中加热，并不时振摇，加热10〜15分钟后，取出放置冷却，乳糖脎成结晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形

态，可证实为乳糖

①苯阱试剂有毒，小心使用，勿触及皮肤，如触及皮肤先用稀醋酸洗，再用水洗。

四、实验注意事项

①酪蛋白等电点随温度不同而变化,等电点pH为4. 6〜4. 8。分离酪蛋白时,边加醋酸，边搅拌，边测pH,同时观察沉淀。开始快搅拌，接近等电点时，应慢搅拌。

②酪蛋白沉淀用200目的尼龙布过滤比较好,同时进行抽滤。用滤纸很难过滤; 而用纱布过滤, 酪蛋白容易粘在其上。

③用乙醇和乙醚清洗酪蛋白沉淀时,应将酪蛋白捣碎,并在溶剂中搅拌、浸泡, 充分洗净脂肪。纯净的酪蛋白应为白色,若发黄表明脂肪未洗干净。