牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白含量的测定牛奶是一种营养丰富的饮品，其中富含多种蛋白质，而酪蛋白是牛奶蛋白质中的主要成分之一。
准确测定牛奶中酪蛋白的含量对于评估牛奶的质量、了解其营养价值以及在相关的食品加工和研究中都具有重要意义。
酪蛋白是一种磷蛋白，在牛奶中以胶束的形式存在。
它的性质相对稳定，在一定的条件下可以从牛奶中沉淀分离出来。
目前，测定牛奶中酪蛋白含量的方法主要有以下几种：一、等电点沉淀法酪蛋白在其等电点（pH 46 48）时溶解度最低，容易沉淀析出。
实验操作时，首先将新鲜牛奶用脱脂棉过滤，以去除其中的杂质。
然后将牛奶缓慢加入到预先调节好 pH 值至 46 48 的醋酸醋酸钠缓冲溶液中，并不断搅拌。
搅拌均匀后静置一段时间，使酪蛋白充分沉淀。
接着通过离心分离的方式将沉淀的酪蛋白收集起来，用蒸馏水多次洗涤，以去除残留的乳清蛋白和其他杂质。
最后将沉淀烘干至恒重，通过称重计算出酪蛋白的含量。
这种方法的优点是操作相对简单，成本较低。
但缺点是沉淀过程中可能会有少量的乳清蛋白一同沉淀下来，导致测定结果偏高。
二、盐析法盐析是指在蛋白质溶液中加入大量的中性盐，以破坏蛋白质的水化膜并中和其电荷，从而使蛋白质沉淀析出。
对于牛奶中酪蛋白的测定，可以使用硫酸铵等盐类进行盐析。
实验时，将牛奶与一定浓度的硫酸铵溶液混合，搅拌均匀后静置一段时间，使酪蛋白沉淀。
同样通过离心、洗涤、烘干等步骤，最终得到酪蛋白的质量并计算其含量。
盐析法的优点是沉淀效果较好，能够较为有效地分离酪蛋白。
但需要注意的是，盐的浓度和使用量需要严格控制，否则可能会影响测定结果的准确性。
三、电泳法电泳是指带电粒子在电场中向着与其所带电荷相反的电极移动的现象。
利用电泳技术可以分离和测定牛奶中的酪蛋白。
首先，对牛奶样品进行预处理，使其中的蛋白质溶解并带电。
然后将处理后的样品加入到电泳槽中，施加电场。
由于酪蛋白和其他蛋白质的带电性质、分子量等不同，它们在电场中的迁移速度也不同，从而实现分离。
牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定一、实验原理1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%）牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种二糖，它由D-半乳糖分子和D-葡萄糖分子通过β-1,4-糖苷键连接而成。
乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。
2、等电点沉淀法：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂来增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。
同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pI偏离了4.7，通常偏酸。
3、酪蛋白的提纯根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙醚洗涤，由于乙醚很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。
4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法）考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm。
在一定范围内，考马斯亮蓝G520-蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度测定
第21卷 第3期大学化学2006年6月牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度测定周夏衍 夏春兰 楚延锋 付晓平 邓立志 周鑫玉(武汉大学化学与分子科学学院 武汉430072) 摘要 分离牛奶中的酪蛋白和乳糖,并对其纯度进行测定。
以此作为物理化学设计实验的部分内容。
“牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及鉴定”作为物理化学的设计实验,其主要实验内容包括:①通过调节pH分离牛奶中酪蛋白和乳糖;②试验酪蛋白和乳糖的鉴定方法;③通过酪蛋白电泳实验分离不同形态的酪蛋白。
实验综合了分离技术、分光光度法、旋光度测定、电泳等内容。
“牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度测定”作为其中的一部分,具体内容如下。
1 牛奶中酪蛋白的分离 牛奶是一种乳状液,主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖和盐组成。
酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,是含磷蛋白质的复杂混合物。
蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH=4.8)时,蛋白质所带正、负电荷相等,呈电中性,此时酪蛋白的溶解度最小,会从牛奶中沉淀出来,以此分离酪蛋白。
因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。
取50mL新鲜牛奶,在恒温水浴中加热至40℃,边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH=4.8,放置冷却、澄清后,用尼龙布过滤酪蛋白。
(在滤液中加入少量粉状碳酸钙,留作乳糖的分离。
)依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白,去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算牛奶中酪蛋白的含量。
2 牛奶中乳糖的分离上的醇羟基 乳糖是一种二糖,它由D2半乳糖分子C′上的半缩醛羟基和D2葡萄糖分子C4脱水通过β21,4苷键连接而成。
乳糖是还原性糖,绝大部分以α2乳糖和β2乳糖两种同分异构体型态存在,α2乳糖的比旋光[α]20=+86°,β2乳糖的比旋光[α]20D=+35°,水溶液中两种乳D糖可互相转变,因此其水溶液有变旋光现象。
乳糖也不溶于乙醇,当乙醇混入乳糖水溶液中,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。
实验三 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定
弃去上清液。
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四、实验步骤
1、酪蛋白的制备： （ 3 ）往沉淀物中加入 5mL 蒸馏水，混匀后 2000r/min 离心5min， 弃去上清液。 （ 4 ） 将 洗 净 的 沉 淀 物 加 入 3mL 无 水 乙 醇 ， 混 匀 后
2000r/min离心5min， 弃去上清液，得酪蛋白粗制品。
（ 5 ）将沉淀物全部摊开在已称过重的滤纸上，置于 25℃烘箱中烘干。
各管中酪蛋白的溶解度。
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四、实验步骤
3、酪蛋白的颜色反应（双缩脲反应）： 取少量尿素结晶，放入干燥的试管，微火加热使尿素熔
化，熔化的尿素开始硬化时停止加热，尿素放出氮，形成双 缩脲。冷却后，加入1mL 10％NaOH溶液，振荡混匀，再加 入数滴 1％CuSO4溶液，振荡，观察实验现象。（此步骤由 教师演示。） 向另一支试管中加入少量酪蛋白溶液，加入 2mL 10％ NaOH溶液，摇匀，再加入数滴1％CuSO4溶液，随加随摇， 观察实验现象。
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四、实验步骤
1、酪蛋白的制备： （1）量取10mL牛奶置于25mL刻度试管中，水浴中加 热至40℃。在搅拌下慢慢加入10mL预热至40℃的乙酸-乙 酸钠缓冲液（pH4.6）。用精密试纸调pH值至4.8（可选择 1%氢氧化钠或10%乙酸溶液进行调整）。40℃保温10min， 使沉淀完全。 （ 2）将上述悬浮液冷却至室温。 2000r/min离心 5min ，
（6）准确称重，计算牛乳中酪蛋白含量（g/100mL）, 并与理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
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四、实验步骤
2、酪蛋白的溶解度鉴定： 取6支试管，分别加入蒸馏水、10%氯化钠、0.5%碳 酸钠、0.1mol/L氢氧化钠、0.2%盐酸及饱和氢氧化钙各 1mL。于每管中加入少量酪蛋白，不断摇荡，观察并记录
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
牛奶中提取酪蛋白的实验报告
牛奶中提取酪蛋白的实验报告牛奶中提取酪蛋白的实验报告一、引言牛奶是我们日常生活中常见的饮品，而酪蛋白则是牛奶中的重要营养成分之一。
酪蛋白是一种高质量的蛋白质，对人体具有重要的营养和生理功能。
提取牛奶中的酪蛋白并对其进行实验分析具有重要的理论和应用意义。
本文将从实验方法、实验步骤、实验结果以及个人理解等方面进行深入探讨。
二、实验目的本次实验的主要目的是通过简单的化学方法，从牛奶中提取酪蛋白，并对其进行分析和检测。
通过实验，我们旨在掌握酪蛋白的提取方法，加深对其性质和结构的理解，同时培养实验操作的能力和科学精神。
三、实验方法1. 实验仪器：酪蛋白提取仪、离心机、紫外-可见分光光度计等。
2. 实验试剂：硫酸、乙醇、盐酸、酚酞指示剂等。
3. 实验步骤：（1）取适量牛奶，加入盐酸搅拌，使牛奶凝固。
（2）用离心机离心，将凝固的混合物分离。
（3）将分离得到的固体与乙醇反复洗涤。
（4）用酚酞指示剂检测酪蛋白。
四、实验结果通过实验操作，我们成功地从牛奶中提取得到了酪蛋白的固体物质，并经过乙醇洗涤后，得到了较纯净的酪蛋白样品。
经过紫外-可见分光光度计检测，酪蛋白在特定波长下呈现出明显的吸收峰，证明其成功提取。
经过比色法测定，我们得到了酪蛋白的溶液浓度，为XX mg/L。
五、个人理解通过本次实验，我深刻理解了酪蛋白在牛奶中的提取方法和技术，并对其在生物学和营养学领域的重要作用有了更加深入的认识。
酪蛋白的提取实验也启发我对科学研究的兴趣，我希望能在未来的学习和实验中进一步探索酪蛋白的性质和功能，为人类健康和营养贡献自己的一份力量。
六、总结本次实验通过从牛奶中提取酪蛋白的过程，让我们更加直观地了解了酪蛋白的存在和特性。
实验结果也验证了酪蛋白的成功提取，并为我们以后的相关研究提供了基础和参考。
希望通过今后的努力，能进一步挖掘和应用酪蛋白这一珍贵的营养成分。
在本文中，我们根据提供的内容和主题，详细介绍了牛奶中提取酪蛋白的实验过程和结果，同时分享了个人对这一实验的理解和展望。
牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白含量的测定牛奶是我们日常生活中常见且重要的营养饮品，而酪蛋白作为牛奶中主要的蛋白质成分，其含量的测定对于评估牛奶的质量和营养价值具有重要意义。
酪蛋白是一种含磷蛋白质，在牛奶中以胶束形式存在。
要测定牛奶中酪蛋白的含量，需要先了解一些基本的原理和方法。
目前，常用的测定牛奶中酪蛋白含量的方法主要有等电点沉淀法和凯氏定氮法。
等电点沉淀法是基于酪蛋白在其等电点（pH46 48）时溶解度最低，从而沉淀析出的原理。
具体操作步骤如下：首先，将新鲜牛奶置于离心管中，在一定温度下以适当的转速离心一段时间，去除其中的脂肪。
然后，用稀盐酸缓慢调节牛奶的 pH 值至 46 48，使酪蛋白沉淀。
沉淀完全后，再次离心，倒掉上清液，收集沉淀。
沉淀用蒸馏水反复洗涤，以去除残留的乳清蛋白和其他杂质。
最后，将沉淀烘干至恒重，称重计算酪蛋白的含量。
凯氏定氮法是一种经典的测定蛋白质含量的方法。
其原理是将牛奶中的有机氮转化为无机氮（氨），然后通过酸碱滴定来测定氮的含量，再乘以相应的换算系数（一般为 638），从而得到蛋白质的含量。
因为酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质，所以可以近似认为所测定的蛋白质含量即为酪蛋白的含量。
在进行酪蛋白含量测定时，需要注意一些关键的操作要点和影响因素。
比如，在等电点沉淀法中，调节 pH 值时要缓慢加入盐酸，边加边搅拌，以避免局部 pH 值过低导致其他蛋白质沉淀。
离心的转速和时间要适当，转速过低或时间过短可能导致沉淀不完全，而转速过高或时间过长则可能造成沉淀损失。
在凯氏定氮法中，消化过程要控制好温度和时间，确保样品完全消化。
同时，在蒸馏和滴定过程中，要严格按照操作规范进行，以减少误差。
此外，实验中所使用的试剂和仪器的质量和精度也会对测定结果产生影响。
例如，盐酸的浓度要准确标定，天平的精度要满足要求，离心机的性能要稳定可靠。
准确测定牛奶中酪蛋白的含量，不仅对于牛奶生产企业控制产品质量具有重要意义，对于消费者了解所购买牛奶的营养价值也很有帮助。
牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白含量的测定简介酪蛋白是牛奶中的一种重要蛋白质，它具有丰富的营养价值和生物活性。
酪蛋白含量的测定是牛奶品质控制和生产管理的重要指标之一。
本文主要介绍牛奶中酪蛋白含量的测定方法，包括Kjeldahl法、Biuret法和Bradford法。
这三种方法都是常用的酪蛋白测定方法，各有优缺点，选择合适的方法需要根据实际情况来决定。
Kjeldahl法Kjeldahl法是一种经典的氮测定方法，也是牛奶中酪蛋白含量测定的传统方法之一。
其基本原理是将样品中的氮化合物在硫酸和氢氧化钠的共同作用下转化为氨，然后通过蒸馏收集氨水，用盐酸滴定来测定氮的含量，从而计算酪蛋白的含量。
Kjeldahl法的优点是准确性高，适用于各种样品，但需要较长的操作时间，且消耗的试剂比较多。
Biuret法Biuret法是一种比较简单、快捷的蛋白质测定方法，也适用于牛奶中酪蛋白的测定。
其基本原理是将样品中的蛋白质经氢氧化钠处理后，加入一定体积的Biuret 试剂，在碱性条件下形成紫色络合物，经过比色测定可以得到蛋白质的含量。
Biuret法的优点是反应快速、操作简便，而缺点是对含有反应物的干扰较为敏感。
Bradford法Bradford法是一种基于吸光度比色的蛋白质测定方法，也适用于牛奶中酪蛋白的测定。
其基本原理是在酸性条件下，用Bradford试剂使蛋白质发生结合反应，生成一种蓝色色素，在595nm处测定吸光度，从而计算蛋白质的含量。
Bradford法的优点是准确性高、灵敏度高、操作简便，而缺点是比较依赖于蛋白质的种类和组成。
，牛奶中酪蛋白含量的测定方法有很多种，包括Kjeldahl法、Biuret法和Bradford法等。
在选择测定方法时，应根据实际情况选取适合的方法，以达到准确、快捷、经济、方便的目的。
同时，要注意相应的仪器和试剂的购置和储存，以及正确的操作步骤。
文末：以上所述仅为基础知识介绍，具体实验操作请参考相应的实验方法和标准操作规范。
酪蛋白检测实验报告
一、实验目的1. 掌握酪蛋白的提取方法。
2. 学习利用等电点沉淀法检测酪蛋白的含量。
3. 了解蛋白质的沉淀、溶解等性质。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，会以沉淀形式从牛奶中析出。
本实验通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使酪蛋白沉淀，然后通过离心、洗涤等步骤提取酪蛋白，并利用沉淀重量法检测酪蛋白的含量。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：- 95%乙醇- 无水乙醚- 0.2mol/L pH 4.7醋酸-醋酸钠缓冲液- 0.2mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 精密pH试纸或酸度计- 离心机- 烧杯- 温度计- 研钵- 天平四、实验步骤1. 酪蛋白提取- 取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边加入稀醋酸溶液约2mL，观察白色沉淀析出。
- 继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心15min。
- 离心完毕后，弃去上清液，得到酪蛋白沉淀。
2. 酪蛋白洗涤- 将酪蛋白沉淀用少量去离子水洗涤2次，弃去上清液。
- 用95%乙醇洗涤沉淀2次，弃去上清液。
- 用无水乙醚洗涤沉淀2次，弃去上清液。
3. 酪蛋白干燥- 将洗涤后的酪蛋白沉淀置于研钵中，用研棒轻轻研磨，使酪蛋白沉淀充分干燥。
- 将干燥后的酪蛋白沉淀转移到称量瓶中，于105℃烘干2小时，取出，置于干燥器中冷却至室温，称量。
4. 酪蛋白含量测定- 取一定量的酪蛋白沉淀，加入0.1mol/L盐酸溶液，使酪蛋白溶解。
- 将溶液转移至容量瓶中，定容至刻度线，摇匀。
- 取一定量的溶液，加入0.2mol/L氢氧化钠溶液，使溶液pH值调至4.7，观察酪蛋白沉淀析出。
- 将沉淀转移至离心杯中，于3000r/min离心15min。
- 弃去上清液，称量沉淀重量，计算酪蛋白含量。
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定共34页
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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牛奶中酪蛋白的提取及含量测定
11、用道德的示范来造就一个人，显然比用法律来约束他更有价值。—— 希腊
12、法律是无私的，对谁都一视同仁。在每件事上，她都不徇私情。—— 托马斯
13、公正的法律限制不了好的自由，因为好人不会去做法律不允许的事 情。——弗劳德
14、法律是为了保护无辜而制定的。——爱略特 15、像房子一样，法律和法律都是相互依存的。——伯克
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
牛奶中酪蛋白含量的测定
在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负 电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相 互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点 时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为左右（不同结构的酪蛋 白等电点有所不同），本实验中将牛乳的 pH 调值时，酪蛋白就沉淀出来。
称取的酪蛋白样品质量为，稀释倍数为 500 倍。 =
=%
五、误差分析与讨论
1、本次制备实验中得到的蛋白质量较多，但纯度较低，分析原因如下： 1）得到的蛋白质略呈黄色，且有些发粘，说明可能脱脂不彻底，蛋白质产品中 含有脂质。 2）考马斯亮蓝 G520 染液中有沉淀，最后影响考马斯亮蓝-蛋白质复合物溶液的 吸光度。 3）配制标准溶液时操作上可能有误差，如往试管中加入溶液时挂在管壁，且最 终也没有与下方溶液混合均匀，导致标准溶液的浓度可能不准，致使标准曲线不 准，数据处理时也发现数据线性并不好，尤其是浓度较大时，虽然可能是超出考 马斯蓝线性范围，但不能排除操作失误的可能。 2、注意事项
1）试管提前一周清洗干净并晾干，否则制作标准曲线时无法保证各管浓度。并 且不干净的试管在加溶液时容易挂管壁，不利于控制标准蛋白液浓度。 2）在配制不同浓度标准蛋白液时，各组分的体积要准确移取，特别是量较少的 标准蛋白液，只要稍微洒出一点就会导致较大的相对误差 3）蛋白质粗品的洗涤一定要按照规范做，每一次离心洗涤时要将搅匀，在布氏 漏斗上洗涤时要先微接抽气管，待洗出液缓慢流出后，再接紧橡皮管抽干。
酪蛋白的实验报告
一、实验目的1. 学习从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的操作技巧。
3. 了解酪蛋白的性质和特征。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，含量约为3.5%。
它是一种含磷蛋白质，具有等电点为4.7的特点。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使其沉淀出来。
沉淀物经过离心、洗涤、干燥等步骤，可以得到纯净的酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶、离心机、烧杯、温度计、pH计、抽滤装置、布氏漏斗、玻璃棒等。
2. 试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 酪蛋白的提取（1）取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边加入2mL稀醋酸溶液，观察白色沉淀的形成。
（2）继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心15min。
（3）离心完毕后，弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白的纯化（1）用水洗涤沉淀3次，每次离心10min，弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌，悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
（3）用乙醇和乙醚混合液清洗沉淀2次。
（4）最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
（5）沉淀风干，得到纯净的酪蛋白。
3. 酪蛋白的性质研究（1）观察酪蛋白的外观，记录其颜色、形状等特征。
（2）取少量酪蛋白加入蒸馏水中，观察其在水中的溶解情况。
（3）用pH计测定酪蛋白的等电点。
（4）对酪蛋白进行缩二脲反应、蛋白黄色反应和茚三酮反应，观察其颜色变化。
五、实验结果与分析1. 酪蛋白的提取实验中观察到白色沉淀的形成，表明牛奶中的酪蛋白已经沉淀出来。
通过离心、洗涤、干燥等步骤，得到了纯净的酪蛋白。
2. 酪蛋白的纯化经过洗涤、抽滤、干燥等步骤，得到了纯净的酪蛋白。
酪蛋白呈白色粉末状，无异味。
3. 酪蛋白的性质研究（1）酪蛋白在水中溶解性较差，部分溶解。
牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定一、实验原理1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%）牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种二糖，它由D-半乳糖分子和D-葡萄糖分子通过β-1,4-糖苷键连接而成。
乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。
2、等电点沉淀法：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂来增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。
同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pI偏离了4.7，通常偏酸。
3、酪蛋白的提纯根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙醚洗涤，由于乙醚很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。
4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法）考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm。
在一定范围内，考马斯亮蓝G520-蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定
3 称重
❖ 取下接受瓶，回收乙醚，待接受瓶内乙醚剩 1 ～2 ml 时，在水浴上蒸干，再于100～ 105℃干燥 2小时，取出放干燥器内冷却30分 钟，称重，并重复操作至恒重（m6）。
❖ 取出滤纸包，于户外晾至无乙醚味，置入恒 温箱内，烘干，然后移入干燥缸内冷却后称 重，重复操作至恒重（m7）。
六 结果处理
❖ 方法一 脂肪(％)＝(m6-m5) / m4 ×100
❖ 方法二 脂肪(％)＝(m3-m7) / m4 ×100
m6——接受瓶和脂肪的质量，g； m5——接受瓶的质量，g； m4——样品的质量(如为测定水分
后的 样品质量计)，g。
m3——未抽提滤纸包的质量，g； m7——抽提后滤纸包的质量，g； m4——样品的质量(如为测定水分
以上OD绘59制5n标m为准纵曲坐线标。，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸
2. 酪蛋白浓度的测定
称取一定量的酪蛋白，用0.9%NaCl溶液溶解定容至 一定体积（使其测定值在标准曲线的直线范围内）。 测定方法同上，根据所测定的OD595nm值，在标准曲 线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知 样品的蛋白质浓度(g/mL)。
实验报告从牛奶中分离酪蛋白
实验报告-从牛奶中分离酪蛋白实验报告-从牛奶中分离酪蛋白1.实验目的本实验的主要目的是通过酸沉淀法从牛奶中分离酪蛋白，理解酪蛋白的性质和用途。
通过实验，我们希望能够掌握以下内容：•牛奶的成分及其特性•酸沉淀法的基本原理和应用•酪蛋白的分离和纯化过程•实验参数对酪蛋白产率和质量的影响2.实验原理牛奶是一种复杂的液体，含有多种蛋白质，如血清蛋白、免疫球蛋白、乳球蛋白、乳蛋白等。
这些蛋白质的含量和性质受奶源、饲料、奶牛的健康状况等多种因素的影响。
其中，酪蛋白是牛奶中最主要的蛋白质，含量约为3.5-4.5%。
酸沉淀法是利用酸性条件下，牛奶中的蛋白质会逐渐沉淀，最终形成凝胶状物质的过程。
通过控制pH值，可以使得酪蛋白率先沉淀，从而达到与其他蛋白质分离的目的。
3.实验步骤（1）准备试剂和设备：本实验需要用到牛奶、浓盐酸、乙醇、去离子水、烧杯、磁力搅拌器、pH计等。
（2）将100ml牛奶加入烧杯中，用磁力搅拌器搅拌并维持温度在30℃。
（3）用pH计测定牛奶的初始pH值，并记录。
（4）向牛奶中缓慢加入一定量的浓盐酸，并不断搅拌，使得牛奶的pH值维持在3.5-4.5之间。
在此过程中，要避免盐酸加入过快导致局部pH值过低。
（5）维持此pH值并继续搅拌30分钟，使得酪蛋白充分沉淀。
（6）将上清液倒出，并加入95%乙醇，使得乙醇的体积分数为20%，继续搅拌10分钟。
（7）将沉淀物过滤，并用乙醇清洗。
将过滤后的沉淀物放入烘箱，在40℃下烘干。
（8）收集烘干后的酪蛋白，测定其质量并计算产率。
4.结果分析表1：实验参数记录表实验方法是有效的。
从表1可以看出，实验过程中各个参数的控制对实验结果有着重要影响。
例如，如果pH值过低或过高，都会导致产率和纯度的下降；酸加入量过多或过少也会影响酪蛋白的沉淀效果；沉淀时间和烘干时间的长短也会影响产率和纯度。
因此，在实验过程中，需要严格控制各项参数。
5. 结论总结通过本次实验，我们成功地使用酸沉淀法从牛奶中分离出了酪蛋白。
牛奶中酪蛋白含量的测定电子版本
精品资料
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定
一、实验原理
1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维 生素、微量元素（Ca、P 等矿物质）、水（87%）
牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它由 D-半乳糖分子和 D-葡萄 糖分子通过β-1,4-糖苷键连接而成。乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖 水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。
仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除 谢谢3
精品资料
用蒸馏水洗涤沉淀 3 次（每次约 20mL），离心 5min（3000r/min），弃去
上清液。在沉淀中加入约 20mL95%乙醇，搅拌片刻，将全部的悬浊液转移到布
氏漏斗中抽滤，用乙醇-乙醚混合溶液洗涤沉淀 2 次，最后用乙醚洗涤沉淀 2
次，抽干。将沉淀摊开在培养皿中，风干，保存至下周。
上述蛋白液，转移至另一个 50mL 容量瓶中，用 0.9%NaCl 稀释定容至 50mL。
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精品资料
另取一支干净试管，加入样品液 1.0mL 及考马斯亮蓝染液 4.0mL，混匀，
室温静置 3min，于波长 595nm 处比色，读取吸光度，由样品液的吸光度查标准
2、标准曲线的制作
取 7 支干净干燥试管，按下表进行编号并加入试剂。
混匀，室温静置 3min，以第一管为空白，于波长 595nm 处比色，读取吸光
度，以吸光度为纵坐标，各标准液浓度为横坐标得标准曲线。
表 1 标准曲线的制作 试剂\编号 1（空
标准蛋白液 /mL 0.9%NaCl/mL 考马斯亮蓝 染液/mL 蛋白质浓度 /(μg/mL)
市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂来增加粘稠度，以致即使 pH 调至等电 点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将 pH 稍微调过多一点再调回等电点。同 时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使 pI 偏离了 4.7，通常偏酸。 3、酪蛋白的提纯
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定前言牛奶是营养最完备的食品之一，这一点已为许多人认识并接受。
尤其是在婴儿及青少年时期，每天一定量的牛奶能促进身体健康成长。
牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，这些都是人体发育所必不可少的物质。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白。
酪蛋白是含磷蛋白质的复杂混合物，在牛奶中以其钙盐形式存在，即酪蛋白钙。
利用蛋白质在等电点时溶解度最小的特性，把牛奶的ＰＨ值调到酪蛋白的等电点(pＨ=4. 8)来沉淀分离酪蛋白。
酷蛋白不溶于乙醇和乙醚，所以可用乙醇和乙醚将其中的脂肪洗涤除去。
牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种二糖。
它是唯一由哺乳动物乳糖合成的糖，它是在乳腺中被合成的。
乳糖是成长中的婴儿建立其发育中的脑子和神经组织所需的物质。
乳糖也是不溶于乙醇的，所以，当乙醇混入水溶液中时,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。
1材料与方法1.1材料（1）实验仪器恒温水浴锅、抽气抽滤瓶、布氏漏斗、蒸发皿、烧杯600ml、100ml各一个、表面皿、天平、玻璃棒。
（2）主要试剂10%醋酸溶液、95%乙醇、乙醚、奶粉、精密pH试纸（pH=3~5）、碳酸钙、滤纸、1%CuSO4溶液、10%NaOH溶液、茚三酮溶液、30% Acr单体贮液、浓缩胶缓冲贮液等。
1.2方法1.2.1酪蛋白的分离称取29g奶粉溶解于100ml温水中，取三份20ml牛奶于100ml烧杯中，在恒温水浴中加热至45℃，边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液，通过pH试纸测量至牛奶pH分别为4.8、4.6和3.8。
放置冷却、澄清后，抽滤。
注意先将上层清液滤出一部分，再将沉淀倾入漏斗中进行抽滤得沉淀（滤完后，收集滤液，并在滤液中加入少量粉状碳酸钙留作乳糖的分离）。
用蒸馏水洗沉淀2次，离心10min （3500r/min），弃去上清液，在沉淀中加入30ml乙醇。
搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
再用乙醇-乙醚混合液（1:1）洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀1次（用乙醚洗涤时，注意用玻璃棒捣碎成团的固体，并反复翻洗，保证脂肪被洗净），抽滤得沉淀。
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牛奶中酪蛋白的提取及含量测定
一、实验原理
1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%）
牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种二糖，它由D・半乳糖分子和D・葡萄糖分子通过P -1,4-糖昔键连接而成。
乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。
2、等电点沉淀法：
在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零（即正负电荷相等），此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出來。
市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂來增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。
同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pl偏离了 4.7,通常偏酸。
3、酪蛋白的提纯
根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙瞇洗涤，由于乙瞇很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。
4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法）
考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm o当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm o在一定范围内，考马斯亮蓝G520- 蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。
二、实验器材与试剂
1、器材：恒温水浴锅、离心机、抽滤装置、蒸发皿、精密pH试纸、旋涡混合器、紫外分光光度计、试管四、5mL吸管、50mL容量瓶、100mL ft筒、电子分析天平
2、试剂：鲜牛奶、pH4.7醋酸■醋酸钠缓冲溶液、乙醇■乙艇混合液（95%乙醇、无水乙瞇体积比1： 1）、0.9%NaCl溶液、标准蛋白液（0.1mg/mL牛血清蛋白）、考马斯亮蓝G520染液
三、实验操作记录
1、酪蛋白的制备
将20mL牛奶盛于100mL的烧杯中加热到40*C,在搅拌下慢慢加入预热至40・C、pH4.7的醋酸缓冲溶液20mLo用冰醋酸调节溶液pH至4.7,此时即有大量的酪蛋白沉淀析出。
将上述悬浮液冷却至室温，离心Smin (4000r/min),弃去上清液，沉淀即为酪蛋白粗品。
用蒸饰水洗涤沉淀3次(每次约20mL),离心5min (3000r/min),弃去上清液。
在沉淀中加入约20mL95%乙醇，搅拌片刻，将全部的悬浊液转移到布氏漏斗中抽滤，用乙醇-乙醯混合溶液洗涤沉淀2次，最后用乙醯洗涤沉淀2次，捕干。
将沉淀摊开在培养皿中，风干，保存至下周。
2、标准曲线的制作
取7支干净干燥试管，按下表进行编号并加入试剂。
混匀，室温静置3min,以第一管为空白，于波长595nm处比色，读収吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准液浓度为横坐标得标准曲线。
表1标准曲线的制作
3
准确称取25mg自制酪蛋白，置于50mL烧杯中,加入约20mL0.9%NaCh再准确加入Imol/LNaOH 5mL,当酪蛋白溶解后,准确加入lmol/L乙酸5mL,充分振摇直至酪蛋白完全溶解为止(不溶可在50°C水浴加热至溶)，全部转移至50mL 容最瓶中，加0.9%NaCI稀释定容至50mL,充分摇匀。
取5mL上述蛋白液，转移至另一个50mL容量瓶中，用0.9%NaCI稀释定容至50mLo
另取一支干净试管，加入样品液l.OmL及考马斯亮蓝染液4.0mL,混匀，室温静置3min,于波长595nm处比色，读取吸光度，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
四、实验结果
2
由散点图可以看出，后两个点与前面几个点的线性关系并不好，出现了明显 的负偏差。
故在线性拟合时舍去后两个点，取前5个点进行拟合。
拟合出的直线 R”达到0.983,线性较好。
2、样品液的吸光度是0.324,对照标准曲线得酪蛋白浓度为28.40yg/mLo
称取的酪蛋白样品质最为0.0267g,稀释倍数为500倍。
五、误差分析与讨论
1、 本次制备实验中得到的蛋白质量较多，但纯度较低，分析原因如下： 1） 得到的蛋白质略呈黄色，且有些发粘，说明可能脱脂不彻底，蛋白质产品中
含有脂质。
2） 考马斯亮蓝G520染液中有沉淀，最后影响考马斯亮蓝■蛋白质复合物溶液的
3（酪蛋白）=
能蛋白浓度
xlXhnLxSOO
样品质虽 X 100%= 28.40x10一
6x1x500
0.0267
X 100%=53.2%
|
蛋白质浓度（pg/mL ）
吸光度。
3）配制标准溶液时操作上可能有误差，如往试管屮加入溶液时挂在管壁，且最终也没有与下方溶液混合均匀，导致标准溶液的浓度可能不准，致使标准曲线不准，数据处理时也发现数据线性并不好，尤其是浓度较大时，虽然可能是超出考马斯蓝线性范围，但不能排除操作失误的可能。
2、注意事项
1）试管提前一周清洗干净并晾干，否则制作标准曲线时无法保证冬管浓度。
并且不干净的试管在加溶液时容易挂管壁，不利于控制标准蛋白液浓度。
2）在配制不同浓度标准蛋白液时，各组分的体枳要准确移取，特别是量较少的标准蛋白液，只要稍微洒出一点就会导致较大的相对误差
3）蛋白质粗品的洗涤一定要按照规范做，每一次离心洗涤时要将搅匀，在布氏漏斗上洗涤时要先微接抽气管，待洗出液缓慢流出后，再接紧橡皮管抽干。