基因工程的复习

基因工程的复习（2012-12-3、韩小进）

一．考纲解读

1．基因工程的原理及技术（A）2．基因工程的应用（B）

二．主干知识

练1：在基因表达载体的构建中,下列说法错误的是（）B

①一个表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子②有了启动子才能驱动基因转录出mRNA③终止子的作用是使转录在所需要的地方停止④所有基因表达载体构建是完全相同A．②③B．①④C．①②D．③④

练2：为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。

（1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性核酸内切酶作用于图中的__________处，DNA连接酶作用于___________处。（填“a”或“b”）

（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的最常用方法是_____________法,如果是单子叶植物,可以考虑用______________法。

（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，即要用放射性同位素标记的_____________作探针进行分子杂交检测，如何从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性?______________。2．（1）a a（2）农杆菌转化基因枪（花粉管通道）（4）耐盐基因（目的基因）一定浓度盐水浇灌（或移栽到盐碱地中）

易混淆的问题：

问题1：从基因组文库和cDNA文库中获取的目的基因相同吗？由此你联想到？

问题2：PCR技术中引物的作用和种类？

问题3：在什么情况下用化学方法直接人工合成目的基因？

问题4：限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆转录酶的作用分得清吗？问题5：你对基因探针的理解？

练3：科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶蛋白。以下有关该基因工程的叙述错误的是（）A

A．采用反转录的方法得到的目的基因有内含子

B．基因非编码区对于目的基因在块茎中的表达是不可缺少的

C．马铃薯的叶肉细胞可作为受体细胞

D．同一种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNA，可产生黏性末端而形成重组DNA分子练4：甲、乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法，以下说法中错误的是（C ）

A．甲方法可建立该细菌的基因组文库B．乙方法可建立该细菌的cDNA文库C．甲方法要以脱氧核苷酸为原料D．乙方法需要逆转录酶参与

练5：下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（）C

A．①②③④B．①②④③C．①④②③D．①④③②

练6：PCR技术通过对目的基因进行扩增，可以得到大量的目的基因，下面对该技术的叙述，不正确的是（）C

A．遵循的基本原理是DNA半保留复制和碱基互补配对

B．扩增仪内必须加入两种引物、原料和DNA聚合酶

C．每扩增一次，温度都要发生90℃→75℃→55℃的变化

D．成指数式扩增，约为2n（n为扩增次数）

练7：下列有关“基因探针”的叙述，不正确的是（）C

A．基因探针的工作原理是碱基互补配对B．待测的DNA分子首先要解旋变为单链，才可用基因探针测序C．待测的DNA分子可以直接用基因探针测序

D．基因探针技术可用于疾病诊断和环境监测

三．能力点

1．限制性内切酶

练8：限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后。用凝胶电泳分离各核酸片段，实验结果如图所示：

请问：3种不同的限制性内切酶在此DNA片段上相应切点的位置是（）

练9．下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点。如下图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点。现用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是（A ）

（）

A．1 为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ

B．1 为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ

C．1 为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ

D．1 为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ

练10．下表为几种限制酶识别的序列及切割位点，下图所示，抗原基因用EcoRⅠ和AluⅠ酶切，载体质粒上有EcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ酶的识别位点，但只用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，再通过DNA连接酶形成重组质粒T。若再用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒T，将可得到DNA片段的种类数是（ A ）

A．1 B．2 C．3 D．4

练11．在DNA 测序工作中，需要将某些限制性内切酶的限制位点在DNA上定位，使其成为DNA 分子中的物理参照点。这

项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假

设有以下一项实验：用限制酶

HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分

别降解一个4kb(1kb即1千个碱基

对)大小的线性DNA 分子，降解产

物分别进行凝胶电泳，在电场的作

用下，降解产物分开，如右上图所示。据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA 分子上的

限制位点数目是以下哪一组？（ A ）A ．Hind Ⅲ1个，BamH Ⅰ2个 B ．Hind Ⅲ2个，BamH Ⅰ3个

C ．Hind Ⅲ2个，BamH Ⅰ1个

D ．Hind Ⅲ和BamH Ⅰ各有2个

练12：一对等位基因经某种限制性内切酶切割后形成的DNA 片段长度存在差异，凝胶电泳分离限制酶切割的DNA 片段，与探针杂交后可显示出不同的带谱(如图I 所示)。根据该特性，就能将它作为标记定位在基因组的某—位置上。现有一对夫妇生了四个儿女，其中I 号性状表现特殊(如图Ⅱ)，由此可推知四个儿女的基因型（用D 、d 表示一对等位基因）正确的是（ ）

C

A ．1号为X d X d

B ．2号为X D Y

C ．3号为Dd

D ．4号为DD 或Dd

2． PCR 技术

练13：“X 基因”是DNA 分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR 技术特异性地拷贝“X 基因”，需在PCR 反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA 分子，如图2所示，其中第⑤种DNA 分子有几个（ D ）

A ．2

B ．4

C ．6

D ．8

3．标记基因的作用

练14：质粒是基因工程中最常用的运载体，它存在于许多细菌体内。质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基因插入位置（插入点有a 、b 、c ），请根据表中提供细菌的生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是（ A ）

A ．①是c ；②是b ；③是a

B ．①是a 和b ；②是a ；③是b

C ．①是a 和b ；②是b ；③是a

D ．①是c ；②是a ；③是b