细菌的形态学检查法
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碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，色 基带正电，易与带负电的被染物结合着色 酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基 带负电
复合染料：可与cell浆结合
单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不 溶于水，而溶于脂溶剂。
二
染色程序：
1.涂片制备：
基本步骤：
涂片（干燥） 液体标本（细菌培养液）直
固定 染色
复 习
2.暗视野显微镜
常用于活的微生物的动力检测
3.相差显微镜
利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密 度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明 暗对比。 应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。
4.荧光显微镜
以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光 短，故分辨率比普通显微镜要高。
5.电子显微镜：
以强大的电子流代替光源，因电子流的波长 仅为0.005nm，（仅为可见光源的几万分之一）， 故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物 体。 电镜种类 透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌， virus内部结构，通过荧屏显示。 扫描电镜：因电子流对物体的表面进行扫描， 可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可 用于对细菌，virus的结构观察。
（初染、煤染、脱色、复染） 接涂于玻片上； 固体培养基上的培养物 ，取 生理盐水涂片，涂成蚕豆大 小的菌膜。
2.固定：
目的：①杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色 ②改变其通透性，利于染料进入
③使菌体附着在玻片上
④保持细菌原有的形态、结构 方法：常用的火焰加热固定法。
3.染色：
初染 媒染 目的：加固初染 媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。 脱色 目的：使不该染上颜色的部分脱下颜色 脱色剂：酸（为碱的脱色剂）
一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。
基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团 ，
它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深
如-NO2(硝基）\ -N=N-（偶氮基）
助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和
性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性: -NH2（碱性） -OH （酸性）
常用染料种类：
方法：
结晶紫（初染） 1min 水洗
卢戈氏碘液（媒染）
1min 水洗
95%酒精（脱色） 1min 水洗
稀释石炭酸复红（复染）
结果： 意义：
2. 抗酸染色
（acid-fast stain）
原 理：分枝杆菌一般不易着色，若用5% 石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红 色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗3% 盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸 菌。
第二节 不染色细菌标本检查法
仅用于细菌动力的观察。
1.压滴法 2.悬滴法 3.毛细管法：孔径0.5-1.0mm，长约60-70mm毛 细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后， 两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。 注意：区别细菌的运动与布朗运动。 明视野法、暗视野法。
第三节
色
细菌染色标本的检查
方 法：
涂片、干燥、固定 石炭酸复红（初染） 加热至冒蒸汽 5min
盐酸酒精脱色
碱性美兰（复染） 1min
wk.baidu.com
结 果： 意 义：
3.特殊染色法
细胞壁染色： 染液：10％鞣酸溶液、0.5％结晶紫溶液 方法：涂片自然干燥→鞣酸染15min，水洗→ 结晶紫染3~5min，水洗→待干，镜检。 结果：细胞壁（细菌的周边）染成紫色，内部无色； 无细胞壁的细菌（L型菌）整个菌体染成紫色。 鞭毛染色法 荚膜染色法 芽孢染色法 异染颗粒染色法
1.革兰染色法（Gram stain):
由丹麦细菌学家Christain Gram首创，已有100 多年的历史。
染料： 结晶紫、卢戈氏碘液、 95%酒精、稀释石炭酸复红
原理：
（1）等电点学说：革兰阳性菌ph2-3,低于 革兰阴性菌ph4-5。 （2）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核 酸镁盐。 （3）通透性学说：革兰阳性菌cell wall因 肽聚糖厚，脂类少， 通透性低，酒精不易进入 脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易 被酒精溶解，使cell wall通透性升高。
碱（为酸的脱色剂），还有甲醇，乙醇等
脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的 性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度
复染
（对比染色） 常用染料：稀释复红、沙黄（与紫色对比）、
美兰、苦味液（与红色对比）
三：常用的染色法
（一）单染法： 用一种染料染，细菌及周围部分都染成 同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、 排列及简单的结构，如美兰染色，复红染色。 （二）复染法： 用两种以上的染料，将不同的细菌或同 一细菌的不同结构染成不同的颜色。
透射
电镜
扫 描 电 镜
革兰阴性菌（红色）
革兰阳性菌（紫色）
1
2
3
图一
图二
鞭毛染色法
荚膜染色法
第一章
细菌的形态与结构
一、细菌的大小和形态 细菌的基本形态： 球形、杆状、螺形菌
二、细菌的结构
基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
特殊结构：鞭毛、菌毛、荚膜、芽胞
三、细菌L型
细菌形态学检查
形态学检查的目的：
①从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别 的基础； ②了解被检标本中有无细菌；
③直接从标本中观察到某些细菌，可对少 数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。
第一节
显微镜（microscope）
1.普通光学显微镜
原理 自然光的波长为0.4μm；显微镜 的最大分辨率为0.2μm（前者的一半）；肉眼 的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2μm放 大到0.2mm。
复合染料：可与cell浆结合
单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不 溶于水，而溶于脂溶剂。
二
染色程序：
1.涂片制备：
基本步骤：
涂片（干燥） 液体标本（细菌培养液）直
固定 染色
复 习
2.暗视野显微镜
常用于活的微生物的动力检测
3.相差显微镜
利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密 度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明 暗对比。 应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。
4.荧光显微镜
以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光 短，故分辨率比普通显微镜要高。
5.电子显微镜：
以强大的电子流代替光源，因电子流的波长 仅为0.005nm，（仅为可见光源的几万分之一）， 故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物 体。 电镜种类 透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌， virus内部结构，通过荧屏显示。 扫描电镜：因电子流对物体的表面进行扫描， 可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可 用于对细菌，virus的结构观察。
（初染、煤染、脱色、复染） 接涂于玻片上； 固体培养基上的培养物 ，取 生理盐水涂片，涂成蚕豆大 小的菌膜。
2.固定：
目的：①杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色 ②改变其通透性，利于染料进入
③使菌体附着在玻片上
④保持细菌原有的形态、结构 方法：常用的火焰加热固定法。
3.染色：
初染 媒染 目的：加固初染 媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。 脱色 目的：使不该染上颜色的部分脱下颜色 脱色剂：酸（为碱的脱色剂）
一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。
基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团 ，
它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深
如-NO2(硝基）\ -N=N-（偶氮基）
助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和
性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性: -NH2（碱性） -OH （酸性）
常用染料种类：
方法：
结晶紫（初染） 1min 水洗
卢戈氏碘液（媒染）
1min 水洗
95%酒精（脱色） 1min 水洗
稀释石炭酸复红（复染）
结果： 意义：
2. 抗酸染色
（acid-fast stain）
原 理：分枝杆菌一般不易着色，若用5% 石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红 色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗3% 盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸 菌。
第二节 不染色细菌标本检查法
仅用于细菌动力的观察。
1.压滴法 2.悬滴法 3.毛细管法：孔径0.5-1.0mm，长约60-70mm毛 细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后， 两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。 注意：区别细菌的运动与布朗运动。 明视野法、暗视野法。
第三节
色
细菌染色标本的检查
方 法：
涂片、干燥、固定 石炭酸复红（初染） 加热至冒蒸汽 5min
盐酸酒精脱色
碱性美兰（复染） 1min
wk.baidu.com
结 果： 意 义：
3.特殊染色法
细胞壁染色： 染液：10％鞣酸溶液、0.5％结晶紫溶液 方法：涂片自然干燥→鞣酸染15min，水洗→ 结晶紫染3~5min，水洗→待干，镜检。 结果：细胞壁（细菌的周边）染成紫色，内部无色； 无细胞壁的细菌（L型菌）整个菌体染成紫色。 鞭毛染色法 荚膜染色法 芽孢染色法 异染颗粒染色法
1.革兰染色法（Gram stain):
由丹麦细菌学家Christain Gram首创，已有100 多年的历史。
染料： 结晶紫、卢戈氏碘液、 95%酒精、稀释石炭酸复红
原理：
（1）等电点学说：革兰阳性菌ph2-3,低于 革兰阴性菌ph4-5。 （2）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核 酸镁盐。 （3）通透性学说：革兰阳性菌cell wall因 肽聚糖厚，脂类少， 通透性低，酒精不易进入 脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易 被酒精溶解，使cell wall通透性升高。
碱（为酸的脱色剂），还有甲醇，乙醇等
脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的 性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度
复染
（对比染色） 常用染料：稀释复红、沙黄（与紫色对比）、
美兰、苦味液（与红色对比）
三：常用的染色法
（一）单染法： 用一种染料染，细菌及周围部分都染成 同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、 排列及简单的结构，如美兰染色，复红染色。 （二）复染法： 用两种以上的染料，将不同的细菌或同 一细菌的不同结构染成不同的颜色。
透射
电镜
扫 描 电 镜
革兰阴性菌（红色）
革兰阳性菌（紫色）
1
2
3
图一
图二
鞭毛染色法
荚膜染色法
第一章
细菌的形态与结构
一、细菌的大小和形态 细菌的基本形态： 球形、杆状、螺形菌
二、细菌的结构
基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
特殊结构：鞭毛、菌毛、荚膜、芽胞
三、细菌L型
细菌形态学检查
形态学检查的目的：
①从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别 的基础； ②了解被检标本中有无细菌；
③直接从标本中观察到某些细菌，可对少 数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。
第一节
显微镜（microscope）
1.普通光学显微镜
原理 自然光的波长为0.4μm；显微镜 的最大分辨率为0.2μm（前者的一半）；肉眼 的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2μm放 大到0.2mm。