生物实验常用溶液的配制(整理版)
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生物实验常用溶液的配制
一、DNA电泳相关:
1、DNA电泳缓冲液:
(1)Tris-乙酸(TAE)缓冲液:TAE较为常用,且价格低,但其缓冲能力较弱。所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环,而且TAE需要经常更新;且要加入EDTA,目的在于鳌合二价离子,抑制DNase,以保护DNA。
① TAE使用液:
1×:40mmol/L Tris-乙酸
1mmol/L EDTA
② TAE贮存液(每L):
50×:242g Tris碱
57.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
(2)Tris-硼酸(TBE)缓冲液:
① TBE使用液:
0.5×:0.045mol/L Tris-硼酸
1mmol/L EDTA
② TBE贮存液(每L):
5×:54g Tris碱
27.5ml 硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
(3)Tris-磷酸(TPE)缓冲液:
① TPE使用液:
1×:90mmol/L Tris-磷酸
2mmol/L EDTA
② TPE贮存液(每L):
10×:108g Tris碱
15.5ml 85%磷酸
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
2、1%(线性DNA分子大小为400-6000)琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程:
①制胶:按要求取1g琼脂糖加入1×TAE(或0.5×TAE)电泳缓冲液100ml,置于三角瓶中,在沸水浴
或微波炉中加热至琼脂糖溶解(一般中低火温,3-5min即可);
②溶液冷却至60℃,加入EB至0.5μg/ml(2-3ml即可),充分混匀;
③迅速倒入备好的胶模中;
④凝胶完全凝固后,小心移去梳子和封口胶带,将凝胶放入电泳槽中;
⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液(TAE);
⑥DNA样品与加样缓冲液(溴酚蓝)混合后,用微量移液吸头加样;
⑦盖上电泳槽并通电,使DNA向正极移动(黑极→红极),1-5V/cm(80V电压左右)进行电泳(30min 左右);
⑧电泳完毕,切断电源,取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。
二、12%SDS-PAGE 的相关溶液
1、5×加样缓冲液:
10% w/v SDS,10 mM DTT或β-巯基乙醇,20% v/v甘油,0.2M Tris-HCl pH 6.8,0.05% w/v 溴酚蓝。(注意:将不含DTT的1×SDS凝胶上样缓冲液置于室温下储存,临用前从1mol/L DTT储液中添加到上述缓冲液中。)
5×Sample Buffer:
10% w/v SDS
10 mmol/L Dithiothreitol,or beta-mercapto-ethanol
20% v/v Glycerol
0.2 mol/L Tris-HCl pH 6.8
0.05% w/v Bromophenolblue
另:2×SDS 上样液缓冲液:
100mL溶液中含0.5mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 20mL , SDS 4 g ,甘油20 mL , 溴酚蓝0.2 g ,DTT3g;
2、1×电泳缓冲液:
25 mM Tris-HCl pH 8.8,200 mM 甘氨酸,0.1% w/vSDS。
1×Running Buffer
25mmol/L Tris-HCl pH 8.8
200~250mmol/L Glycine(电泳级)(pH 8.3)
0.1% w/v SDS
可以配成5×贮存液,在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱和94g甘氨酸,然后加入50ml 10%(m/v)电泳级SDS的贮存液,用去离子水补至1000ml即可。
3、分离胶配方:
H2O 10.5,1.5 M Tris-HCl pH8.8 7.5,20% w/v SDS 0.15,30% 丙烯酰胺/ 0.8% 亚甲双丙烯酰
胺(/w/v) 12.0,10% w/v 过硫酸铵15,TEMED 0.02(单位:mL,总体积25 mL)。注:过硫酸铵会缓慢分解,故应每周新鲜配制,可用去离子水配制少量10%(m/v)储存液于4℃保存。
Running Gel Solution (mL) :
H2O 10.2
1.5 mol/L Tris-HCl pH8.8 7.5
20% SDS (w/v) 0.15
Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 12.0
10% ammonium persulfate (w/v) 0.15
TEMED 0.02
4、积层胶配方(4% 丙烯酰胺):
H2O 3.05,0.5 M Tris-HCl pH6.8 1.25,20% w/v SDS 0.025,30% 丙烯酰胺/ 0.8% 亚甲双丙烯酰胺(/w/v) 0.65,10% w/v过硫酸铵0.025,TEMED 0.005(单位:mL,总体积5 mL)。
Stacking Gel Solution (4% Acrylamide) (mL):
H2O 3.075
0.5 mol/L Tris-HCl pH6.8 1.25
20% SDS (w/v) 0.025
Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 0.67
10% ammonium persulfate (w/v) 0.025
TEMED 0.005
5、考马斯亮蓝染色液:
0.25 g考马斯亮蓝R250溶解于90 mL甲醇:水(1:1 v/v)和10 mL冰乙酸的混合液中,过滤除去颗粒状物质。(或考马斯亮蓝R-250 0.5g ,乙醇250mL ,乙酸110mL ,水740mL ,混匀;)
另:0.2%考马斯亮兰R-250染液:
甲醇46.5ml
醋酸7.0ml
考马斯亮兰0.2g
蒸馏水加至100ml
6、脱色液:
170 mL甲醇,加70 mL冰乙酸,加蒸馏水定容至1000 mL。
三、蛋白质纯化的相关溶液
1、超声破菌缓冲液:
20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5 mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶