DTT(二硫苏糖醇)的作用.
DTT (二硫苏糖醇的作用
DTT 即 DL-Dithiothreitol , 中文名为二硫苏糖醇。分子式为 C4H10O2S2, 分子量为 154.25, 。常用还原剂,有抗氧化作用。 DTT 和巯基乙醇相比,作用相似,但 DTT 的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。而且 DTT 比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近。
DTT 的特性:
DTT 是一种很强的还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键的构象稳定性。它的氧化还原电势在 pH 为 7时为 -0.33伏。
由于容易被空气氧化,因此 DTT 的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低, 随着 pH 值的降低, DTT 的有效还原性也随之降低;而 Tris(2-carboxyethylphosphine HCl (TCEP 盐酸盐可以作为低 pH 值条件下 DTT 的替代品,而且也比 DTT 更为稳定。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT 溶液配制方法:
用 20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2溶解 3.09g DTT ,过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于 -20℃。
【注意】 DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。
DTT 的作用:
DTT 的用途之一是作为巯基化 DNA 的还原剂和去保护剂。巯基化 DNA 末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体, 特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如 DNA 在生物感应器中的固定的效率;而在 DNA 溶液中加入 DTT ,反应一段时间后除去,就可以降低 DNA 的二聚化。
DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形
成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但 DTT 往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性 (高温加热或加入变性剂,如 6M 盐酸胍、 8M 尿素或 1%SDS 。反之,根据 DTT 存在情况下,二硫键还原速度的不同, 可以判断其包埋程度的深浅。
DDT 二硫苏糖醇
DL-Dithiothreitol Catalog Numbers D0632, D5545Storage Temperature 2-8°C CAS RN 3483-12-3 Synonyms: Clelands's Reagent 1; DTT;threo -1,4-Dimercapto-2,3-butanediol Molecular Formula: HSCH 2CH(OH)CH(OH)CH 2SH Molecular Weight: 154.25Melting point: 41-44 °C Product Description D0632 Assay: ≥99% (titration)Appearance: white powder Shelf-life: four years D5545 SigmaUltra Assay: >99% (titration)Appearance: white powder Shelf-life: four years DTT is synthetic. A method of preparation has been described in J. Chem. Soc.253 (1949) Dithiothreitol is an agent for reducing -S-S-to -SH.Redox potential: -0.33 volts at pH 7. DTT acts as a protective agent for -SH groups of other species in solution. In this reaction the DTT is oxidized to the cyclic disulfide, and thereby ensures the reduction of other disulfides in solution. The disulfide reduction is complete in minutes at pH 8. A specific and sensitive assay for disulfide groups is based on determination of resulting monothiols with 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB), Catalog Number D8130.2 Precautions and Disclaimer This product is for R&D use only, not for drug, household, or other uses. Please consult the Material Safety Data Sheet for information regarding hazards and safe handling practices. Preparation Instructions The solubility of dithiothreitol has been tested by Sigma at 50 mg/ml in water, resulting in a clear colorless solution. It has been described as freely soluble in water, ethanol, acetone, ethylate, chloroform and ether. Solutions oxidize relatively slowly in air.3It is recommended to make solutions fresh daily. Recorded half-life (hours) of DTT solutions at various pH and temperatures are as follows:4 References 1.Biochemistry 3, 480 (1964) 2.J. Biol. Chem.243, 716 (1968) 3.Merck Index 12 ed. #3441 4.Biochemical Education 11, 70 (1983) PHC 04/08-1Sigma brand products are sold through Sigma-Aldrich, Inc. Sigma-Aldrich, Inc. warrants that its products conform to the information contained in this and other Sigma-Aldrich publications.Purchaser must determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply. Please see reverse side of the invoice or packing slip.
1,4-二硫代苏糖醇的设备制作方法与相关技术
本技术介绍了一种1,4二硫代苏糖醇的制备方法，包括如下步骤：以1,4二磺酸2丁烯为起始原料，与氧化剂进行氧化反应，得到第一中间体；将步骤S1中所得的第一中间体在碱液中水解，得到第二中间体；将步骤S2中所得的第二中间体与还原剂进行还原反应，制得1,4二硫代苏糖醇。本技术是以1,4二磺酸2丁烯为起始原料，经过氧化、水解、还原等三个步骤合成二硫苏糖醇的方法，该制备方法的过程简洁，收率较高，收率77％以上，所得产品与常规产品应用性能一致。 技术要求 1.一种1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： S1：以1,4-二磺酸-2-丁烯为起始原料，与氧化剂进行氧化反应，得到第一中间体； S2：将步骤S1中所得的第一中间体在碱液中水解，得到第二中间体； S3：将步骤S2中所得的第二中间体与还原剂进行还原反应，制得1,4-二硫代苏糖醇。 2.根据权利要求1所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，所述1,4-二磺酸-2-丁烯与所述氧化剂的摩尔比为1：8-13。 3.根据权利要求2所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，所述氧化剂为钨酸/双氧水、过氧化苯甲酸中的一种。 4.根据权利要求1所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，所述第一中间体与所述碱液的摩尔比为0.1-0.2：1.5-3。 5.根据权利要求4所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，所述碱液为2mol/L的氢氧化钠溶液。 6.根据权利要求1所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，所述第二中间体与所述还原剂的摩尔比为1：6-8。 7.根据权利要求6所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，所述还原剂为氢化锂铝、硼氢化钠中的一种。 8.根据权利要求1所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，反应温度为30℃-40℃。 9.根据权利要求1所述的1,4-二硫代苏糖醇的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，反应温度为60℃-70℃。
DTT(二硫苏糖醇)
DTT（二硫苏糖醇） 1二硫苏糖醇 DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为 C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。 常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。 DTT结构式 还原性 DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。 特点 由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差；但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低，随着pH值的降低，DTT的有效还原性也随之降低；而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl（TCEP盐酸盐）可以作为低pH值条件下DTT 的替代品，而且也比DTT更为稳定。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液 【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。 【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。 应用 DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA 末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。 DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原
生物实验室常用试剂毒性说明.
生物实验室常用试剂毒性说明 (1Tris 吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 (2氨基乙酸:吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。 (3X-半乳糖(X-gal:对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是,X-gal 溶液是在一种有机溶剂(DMF中制备的。 (4β-半乳糖苷酶:有刺激性可产生过敏反应。吸入、摄入、皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 (5苯二胺:吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。 (6苯酚:有剧毒性和高度腐蚀性,可致严重烧伤。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好合适的手套和护目镜,穿好防护服,在通风橱内操作。若有皮肤接触药物,可用大量清水冲洗,并用肥皂和水清洗,不要用乙醇洗。 (7苯甲基磺酰氟化物(PMSF:为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂。对上呼吸道的黏膜、眼睛和皮肤有极大损害。戴好合适的手套和护目镜,在通风橱内操作。万一眼睛或皮肤接触到此药品,立即用大量的水冲洗,丢弃被污染的衣物。 (8苯甲酸:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,不要吸入。 (9苯甲酸苄酯:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。避免接触眼睛。戴好合适的手套和护目镜。 (10苯乙醇:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,远离火源、火花和明火。
(11丙烯酰胺(未聚合的:为一种潜在的神经毒素,可通过皮肤吸收(有累积效应。避免吸入尘埃。称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时,戴好手套和面罩,在化学通风橱内操作。聚合的丙烯酰胺是无毒的,但是使用时也应小心,因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。 (12蛋白酶K:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 (13碘化丙锭:吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜,穿好防护服,在通风橱内小心操作。 (14碘乙酰胺:能碱基化蛋白质上的氨基,从而影响抗原的氨基酸序列分析。有毒性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作,勿吸入尘埃。 (15叠氮化钠:有剧毒性,可阻断细胞色素电子转运系统。含此药物的溶液要明确标记。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,并小心使用。此药品为氧化剂,故保存时要远离可燃物品。(16多聚甲醛:有剧毒。易通过皮肤吸收,并对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有严重破坏性。避免吸入尘埃。戴好手套和护目镜,在通风橱内操作。多聚甲醛是甲醛的未解离形式。 (173,3’-二氨基联苯胺四氢氯化物:为一种致癌剂,操作时要非常小心。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。 (18二甲苯:可燃,高浓度有麻醉作用。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。始终远离热源、火花和明火。 (19二甲苯蓝:见二甲苯。 (20二甲次胂酸钠:可能为致癌剂,并含有砷,有剧毒性。戴好手套和护目镜,只在通风橱内操作。
试剂作用 汇总
试剂 1.DTT 二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）是一种小分子有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的异构体为二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-差向异构体。 二硫苏糖醇分子结构式 DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子（-S–）才具有反应活性，硫醇（-SH）则没有；而巯基的pKa一般为～8.3 2.Tris Tris为弱碱，在25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论， Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。Tris碱的 水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需 值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris 的pKa的影响。 由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被 去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液 中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的 稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得 “TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得 “TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用 于核酸电泳实验中 Tris常用作生物缓冲液，常配成pH值为6.8，7.4，8.0，8.8。其pH值随温度变化很大。一般来说，温度每升高一度，PH值下降0.03。 1M Tris-HCl 6.8和1.5M Tris-HCl 8.8是SDS-PAGE最常用的试剂。 而由Tris配成的TAE，TBE等是DNA电泳最常用的试剂，TE（pH8.0）主要用于溶解DNA。（TE为Tris加EDTA合称。）
常用试剂、溶液及缓冲液的配制
1常用试剂、溶液及缓冲液的配制 1.基本要求 分子生物学所用试剂必须是分析纯或分子生物学试剂级。溶液配制水尽可能使用灭菌、蒸馏、去离子水（建议用Milli-Q过滤系统或类似系统进行过滤）。除非有特殊的说明，大部分配制的溶液需用0.22um孔径滤膜过滤除菌或者高压灭菌（15psi，121℃,20～30min）。使用高压灭菌的水、灭过菌的容器以及灭过菌的贮液来配制溶液，会延长所配制溶液的使用时间。用干燥的化学试剂和无菌水配置的溶液一般都不需要在灭菌；有些酸、碱和一些有机化合物溶液也不需要灭菌，因为微生物不能在这些溶液中生长。制备的溶液应该分成小分保存。如果没有特别说明，则所有贮液和缓冲液至少能在室温下贮存六个月。作为贮液应贮存在4℃或-20℃，使用时取出到达到室温后再开启，以防止试剂内的缩合作用，以确保度数精确。 以质量浓度表示的溶液浓度是指在100ml溶液中溶质的质量，质量单位为g；以体积分数表示的溶液浓度是指总体积为100ml溶液中各组分成分的体积，体积单位为ml。缓冲液的ph为25℃是溶液的ph。 2.浓酸及碱的摩尔浓度 溶液质量分数/% 浓度 /mol/L 冰乙酸 甲酸 盐酸 硝酸 磷酸 硫酸 氢氧化铵 氢氧化钾 氢氧化钠 90～100 90 36 70 85 95 28（NH3） 50 50 17.4 23.4 11.6 15.7 14.6 18 14.8 13.5 19.1 3.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（spermidine） 溶解2.55g亚精胺（相对分子质量为254.6）于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份。贮存于-20℃.不须将溶液灭菌 1mol/L精胺（spermine） 溶解3.48g精胺（相对分子质量为348.2）于足量水中，使终体积为10ml，分装为小份贮存于-20℃.不须将溶液灭菌。 10mol/L乙酸铵（ammonium acetate） 将77.1g乙酸铵（相对分子质量为77.1）溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。
PMSF及常用试剂的配制方法
P M S F及常用试剂的配制 方法 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT
PMSF 英文全称：Phenylmethanesulfonylfluoride 中文名称：苯甲基磺酰氟 分子式：C7H7FO2S 分子量： CAS号：[329-98-6] PubChem号：4784 结构示意图： 分类： OrganicChemicals SulfurCompounds Sulfones PhenylmethylsulfonylFluoride 使用介绍： 1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）； 2）10mg/ml溶于异丙醇（或无水乙醇）中； 3）在室温可保存一年,一般保存在-20度或4度.； 4）工作浓度：17~174ug/ml（~1mM），储存液浓度为100或200mM； 5）在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h,补加一次。（见水分解，使用前加入） 【注意事项】
剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。 在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为时，20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。PMSF的储存：2-8℃可以存放数月之久。欲长期保存，可冻存在-20℃ 例:100mMPMSF 称量(针状结晶固体)溶于10ml异丙醇,震荡混匀，保存在-20度或４度. 工作浓度我一般用1mM,1:100(V/V)加入即可.样品处理超过1h,补加一次. (PMSF剧毒,为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作．PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF，应立即用大量水冲洗之。） PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH 值为时，20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 用异丙醇溶解PMSF成ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达ml的贮存液（100mmol/L）。 常用试剂的配制： 1、30%丙烯酰胺 (1)配制方法：将29G丙烯酰胺和1gN，N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml 的水中，加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml，用Nalgene滤器（孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于，置之不理棕色瓶中保存于室温。
常见缓冲液的配方
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合，
NaOH的20g和2H2O?Na2EDTA的186.1g或称取的三钠盐。EDTA后形成． 并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2?6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
生物实验室危险试剂汇总
生物实验室危险试剂 2011年8月
(1) Tris：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 (2) 氨基乙酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。 (3) X-半乳糖(X-gal)：对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是，X-gal 溶液是在一种有机溶剂(DMF)中制备的。 (4)β-半乳糖苷酶：有刺激性，可产生过敏反应。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 (5)苯二胺：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。 (6)苯酚：有剧毒性和高度腐蚀性，可致严重烧伤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好合适的手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内操作。若有皮肤接触药物，可用大量清水冲洗，并用肥皂和水清洗，不要用乙醇洗。 (7)苯甲基磺酰氟化物(PMSF)：为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂。对上呼吸道的黏膜、眼睛和皮肤有极大损害。戴好合适的手套和护目镜，在通风橱内操作。万一眼睛或皮肤接触到此药品，立即用大量的水冲洗，丢弃被污染的衣物。 (8)苯甲酸：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，不要吸入。 (9)苯甲酸苄酯：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。避免接触眼睛。戴好合适的手套和护目镜。
(10)苯乙醇：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，远离火源、火花和明火。 (11)丙烯酰胺(未聚合)：为一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收(有累积效应)。避免吸入尘埃。称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时，戴好手套和面罩，在化学通风橱内操作。聚合的丙烯酰胺是无毒的，但是使用时也应小心，因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。 (12)蛋白酶K：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。 (13)碘化丙锭：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内小心操作。 (14)碘乙酰胺：能碱基化蛋白质上的氨基，从而影响抗原的氨基酸序列分析。有毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作，勿吸入尘埃。 (15)叠氮化钠：有剧毒性，可阻断细胞色素电子转运系统。含此药物的溶液要明确标记。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，并小心使用。此药品为氧化剂，故保存时要远离可燃物品。 (16)多聚甲醛：有剧毒。易通过皮肤吸收，并对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有严重破坏性。避免吸入尘埃。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。多聚甲醛是甲醛的未解离形式。
DNA提取过程中各种试剂的作用及原理
DNA提取过程中各种试剂的作用及原理 1．溶液I—溶菌液： 溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。 2．溶液II－NaOH－SDS液： NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。 但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。 在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。 SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有： （1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。 （2）解聚细胞中的核蛋白。 （3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。 但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中 （用RNase去除RNA时）受到干扰。 3. 溶液III--3mol／L NaAc（pH 4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。 所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性， 使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。而高盐的3mol／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、 RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合， 后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。 4．为什么用无水乙醇沉淀DNA？ 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶， 乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA 相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。 因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。 但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA 损失也增大，
DTT(二硫苏糖醇)的作用.
DTT (二硫苏糖醇的作用 DTT 即 DL-Dithiothreitol , 中文名为二硫苏糖醇。分子式为 C4H10O2S2, 分子量为 154.25, 。常用还原剂,有抗氧化作用。 DTT 和巯基乙醇相比,作用相似,但 DTT 的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。而且 DTT 比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近。 DTT 的特性: DTT 是一种很强的还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键的构象稳定性。它的氧化还原电势在 pH 为 7时为 -0.33伏。 由于容易被空气氧化,因此 DTT 的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低, 随着 pH 值的降低, DTT 的有效还原性也随之降低;而 Tris(2-carboxyethylphosphine HCl (TCEP 盐酸盐可以作为低 pH 值条件下 DTT 的替代品,而且也比 DTT 更为稳定。 1mol/L二硫苏糖醇(DTT 溶液配制方法: 用 20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2溶解 3.09g DTT ,过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于 -20℃。 【注意】 DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。 DTT 的作用: DTT 的用途之一是作为巯基化 DNA 的还原剂和去保护剂。巯基化 DNA 末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体, 特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如 DNA 在生物感应器中的固定的效率;而在 DNA 溶液中加入 DTT ,反应一段时间后除去,就可以降低 DNA 的二聚化。 DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形
实验室有毒试剂
实验室有毒试剂 免疫组化: 甲醛(致癌) 二甲苯(致癌) Triton X-100(有毒) DAB(二氨基联苯胺,致癌) RT-PCR DEPC(焦碳酸二乙酯,易挥发,致癌) 氯仿(有挥发性,致癌) 苯酚(trizol中含,易挥发,有毒) DMSO(二甲桠枫,易挥发,血管毒性与肝肾毒性) EB(溴化乙锭,致癌) Goldview(致癌有争议) 紫外灯(致癌) Western-blot PMSF(苯甲基磺酰氟, 高强度毒性胆碱酯酶抑制剂) SDS(十二烷基硫酸钠,粉末、质量小、易飞扬,对皮肤、呼吸道粘膜有刺激) TEMED(N,N,N',N'-四甲基乙二胺,强神经毒性) 丙烯酰胺(中等神经毒性) 过硫酸铵(有毒)叠氮钠(NaN3,有毒) DTT(二硫苏糖醇,很强得还原剂)
放射线(可能用到,致突变) 细胞: 逆转录病毒(这个不用说了,想想HIV…) Giemsa(吉姆萨染料,有毒) 其余可能接触有毒物质: 三氯乙酸、冰醋酸、苯、四氯甲烷、氰及氰化物、氟化氢、硫化氢、高氯酸、有机过氧化物 实验室最危险得17种物质。。。 慢性毒性,最易忽视~ 各位兄弟姐妹们务必小心 1、DMSO: DMSO就是二甲基亚砜, 用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其她气体得溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。就是一种即溶于水又溶于有机溶剂得极为重要得非质子极性溶剂。对皮肤有极强得渗透性,有助于药物向人体渗透。也可作为农药得添加剂。也就是一种十分重要得化学试剂。 DMSO也就是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶得形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物与代谢产物得通透性。 但就是研究表明,DMSO存在严重得毒性作用,与蛋白质疏水集团发生作用,导致蛋白质变性,具有血管毒性与肝肾毒性。
常用蛋白还原剂和变性剂
常用蛋白还原剂 1．DTT 中文名称为二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT），是苏糖醇的C-1及C-4位羟基置换成巯基的化合物。在生化反应中用做还原剂，保护蛋白质或酶中的巯基不致氧化而失活。也常用于还原蛋白质分子中的二硫键等。 DTT是一种小分子有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的异构体为二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-差向异构体。 DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。 2.β-巯基乙醇 英文名称：β-Mercaptoethanol，化学式：HOCH2CH2SH，分子量：78.13，是一种具有特殊臭味的无色透明液体，易燃、易溶于水和醇、醚等多种有机溶剂。 β-巯基乙醇(又称为2-巯基乙醇、1-硫代乙二醇、2-羟基乙硫醇、β-硫醇代乙醇）是一种有机化合物，其化学式为HOCH2CH2SH，英文通用缩写为ME或β-ME。它兼具乙二醇（HOCH2CH2OH）和乙二硫醇（HSCH2CH2SH）的官能团，为挥发性液体，具有较强烈的刺激性气味。β-ME通常用于二硫键的还原，可以作为生物学实验中的抗氧化剂。它被广泛使用的原因是它的羟基使它能够溶解于水中，并且降低它的挥发性。由于具有较低的蒸汽压，它的难闻的情况比起恶臭的硫醇要好得多。 2-巯基乙醇可以打开蛋白质中存在的二硫键：cysS-Scys+2HOCH2CH2SH→2cysSH+ HOCH2CH2S-SCH2CH2OH，二硫键被打开后可以使蛋白质的四级或三级结构被破坏。由于2-巯基乙醇能够打开蛋白质的结构，它常常被用于蛋白质分析。而2-巯基乙醇也常常被用于保护蛋白质中自由的半胱氨酸巯基之间不会错误形成二硫键。作为还原剂，2-巯基乙醇常常可以与二硫苏糖醇（DTT）或三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐（TCEP）互换使用。 2-巯基乙醇是少数几种被发现可以延长小鼠寿命的化合物。在微克量级水平上，2-巯基乙醇被观察到对实验鼠的生命具有多种可能的正面效应。 3.TCEP 化学名称：三(2-羧乙基)膦；英文名称：Tris(2-carboxyethyl)phosphine（TCEP）；分子量：250.19。无色透明液体，不溶于脂肪烃，微溶于水，溶于醇、酮、酯、醚、苯、甲苯、二甲苯等，能与氯仿及四氯化碳混溶，与醋酸纤维素、硝酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、乙基纤维素、聚氯乙烯、酚醛树脂、聚丙烯酸酯等高聚物相容性好。 TCEP是一种非常有效的硫醇类还原剂，广泛用作蛋白质化学及蛋白质组学研究中二硫键的定量还原剂。该试剂在水溶液中的稳定性和溶解性都很好。在酸性、碱性溶液中的稳定性也不错。与其他类别的硫醇类还原剂如DTT相比，TCEP不仅是一种高效的二硫键还原
DTT二硫苏糖醇简介及应用注意事项
DTT（Dithiothreitol）二硫苏糖醇 定义： 苏糖醇的C-1及C-4位羟基置换成巯基的化合物。在生化反应中用做还原剂，保护蛋白质或酶中的巯基不致氧化而失活。也常用于还原蛋白质分子中的二硫键等。 简介 二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）是一种小分子有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的异构体为二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-差向异构体。 识别 CAS号3483-12-3 应用学科： 应用于生物化学与分子生物学简介 华越洋生物DTT二硫苏糖醇说明：还原-蛋白质S-S键的试剂；生化研究用作巯基保护剂；酶的专一性抑制剂；测定酶活力。SDS-PAGE上样缓冲液的配制等。 别名：1,4-二硫代-DL-苏糖醇；1,4-二巯基-DL-苏糖醇；1,4-二巯基-2,3-丁二醇；1,4-Dithio-DL-threitol；Threo-1,4-dimercapto-2,3-butandiol 分子式：C4H10O2S2 分子量：154.25 CAS＃：3483-12-3 外观：白色针状或白色颗粒、粉末 特性： 纯度：≥97%(滴定) 氧化型二硫苏糖醇：≤0.5% 熔点：41-44℃
溶解性：用20ml 0.01mol/l乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT，过滤除菌，每管分装1ml，于-20℃贮存。 R：22-36/37/38 S：26-36 储存条件：2-8℃ 性质 化学式C4H10O2S2 摩尔质量154.253 g·mol?1 外观白色固体 熔点42-43 °C 沸点125-130 °C （2 mmHg压力下） 在水中的溶解度可溶 若非注明，所有数据来自25 °C，100 kPa 还原性 DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的巯基-二硫键交换反应所组成： 其中，第一步反应所形成的中间态很不稳定，因为DTT上的第二个巯基趋向于与被氧化的硫原子连接，使中间态很快被转化为DTT的环状氧化结构，从而完成对二硫键的还原。
常用培养基配制
常用培养基
参考文献 1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用储存液
参考文献 1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缓冲液 10X 磷酸盐缓冲液(储存液) (PBS) /升终1 X浓度 NaCl 80.0 g 137 mM KCl 2.0 g 2.7 mM Na2HPO414.4 g 100 mM KH2PO4 2.7 g 2 mM H2O 至800 ml HCl 至pH 7.4 H2O 至1升 20X SSC /升终1 X浓度 NaCl 175.3 g 150 mM Na3citrate x H2O 88.2 g 15 mM H2O 至800 ml 1M HCl调节pH值至7.0
PMSF及常用试剂的配制方法
英文全称：Phenylmethanesulfonylfluoride 中文名称：苯甲基磺酰氟 分子式：C7H7FO2S 分子量：174.19 CAS 号：[329-98-6] PubChem号：4784 结构示意图： 分类： OrganicChemicals SulfurCompounds Sulfones PhenylmethylsulfonylFluoride 使用介绍： 1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）； 2）10mg/ml 溶于异丙醇（或无水乙醇）中； 3）在室温可保存一年,一般保存在-20 度或4 度.； 4）工作浓度：17~174ug/ml （0.1~1mM），储存液浓度为100 或200mM ; 5）在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF,样品处理超过1h,补加一次。（见水分解，使用前加入）【注意事项】 1.PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 2.PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。 3.PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25C的失活速率高于4C。pH值为8.0时，20卩mmol/IPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。PMSF的储存：28C可以存放数月之久。欲长期保存，可冻存在-20C 例:100mMPMSF 称量0.174gPMSF（针状结晶固体）溶于10ml异丙醇，震荡混匀，保存在-20度或4度. 工作浓度我一般用1mM,1:100（V/V）加入即可.样品处理超过1h,补加一次. （PMSF剧毒，为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。） PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25C的失活速率高于4C。pH 值为8.0时，20卩mmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml （10mmol/L），分装成小份贮存于-20C。女口有必要可配成浓度高达17.4mg/ml 的贮存液（100mmol/L）。 常用试剂的配制： 1、30%丙烯酰胺
实验室常用溶液的配制
实验室常用溶液的配制 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
实验室常用溶液的配制 1．30%丙烯酰胺溶液（100ml） 【配制方法】将29g丙烯酰胺和1gN,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4℃温度。 【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于1年的溶液应该被丢弃。 2．40%丙烯酰胺（用于DNA测序，1L） 【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20gN,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足 至终体积为1L。置棕色瓶中保存于室温。 【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 3．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液（1ml） 【配制方法】在0.8ml蒸馏水中溶解60mgATP，用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水稀释1ml 【注意】分装成小份保存于-70℃ 4．10mol/L乙酸铵溶液（1L） 【配制方法】把770g乙酸铵溶解于800ml蒸馏水中，加水稀释至1L后过滤除菌。在4°C储存。 【注意】乙酸铵是热不稳定的。不要高压灭菌。 5．10%过硫酸铵溶液（10ml） 【配制方法】把1g过硫酸铵溶于8ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至10ml。该溶液可在4℃保存数周。 6．1mol/LCaCl2溶液（200ml） 【配制方法】称取54gCaCl2·6H2O并溶解在170ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至200ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。 【用法】制备感受态细胞时，将等分试样解冻，用蒸馏水稀释至100ml。通过Nalgene过滤器（0.45微米）过滤除菌，并在使用前冷却至0℃。 7．2.5mol/LCaCl2溶液（20ml） 【配制方法】称取13.5gCaCl2·6H2O并溶于15ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至20ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 8．脱氧核苷三磷酸（dNTPs）溶液 【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/lTris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检